水溶性维生素E在精子优选过程中对精子质量的影响研究

吴满意

（皖南医学院弋矶山医院，安徽 芜湖 241004）

0 引言

近年来，我国大多数男性出现了许多不健康的生活方式，例如：抽烟、喝酒、长时间熬夜、不健康性行为等，造成我国男性的不育概率在近年内有了明显上升的趋势[1]。对于一些因男方不育而无法正常生育但却想要孩子的家庭来说，人工授精是最佳的方法，精子优选是人工授精工作中一个重要的步骤，其目的在于通过分离技术，选出质量佳的精子进行人工授精，进而提高授精的成功率[2]。在优选分离的过程中，除了通过降低分离技术对精子的伤害来提高精子质量外，临床研究显示加入水溶性维生素E也可有效提高精子分离后的质量[3]。本次研究通过对比分析的方法，对比了单一分离和加入水溶性维生素E进行分离对精子质量的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究中，选取2017年6月至2018年6月在我院接受不育治疗的40例男性患者的新鲜精液，将每例精液均分为4份，每份各包括40例精液，每2份为一组，共分为对照组和实验组两个组别。患者年龄23-33岁，平均（28.30±1.50）岁，所选取的患者均与女性配偶有1年或以上的未采取避孕措施的性行为，但女方未见任何怀孕迹象，且女方经身体检查，未患有不孕症。排除标准：排除近期发生身体感染、全身性疾病、肾功能衰竭、3个月内有发热及用药情况、有长期不良环境暴露史、1周内有性行为的患者。采集后的精液进行毒性测试显示合格后，保存于安全容器内，检测显示患者的精液浓度均＞20×106/mL，患者前向运动的精子率均＞32%，患者精子的形态正常率均≥4%。

1.2 方法

（1）对照组精子分离方法。对照组的2份精液分别通过上游法和密度梯度法进行分离，具体方法如下。

①上游法：采用Quinn’s Sperm Washing Medium 上游离心洗涤，取一只干净试管，向其中加入1 mL精液和1.5 mL Washing培养液，让试管在保持45°倾斜的情况下于37℃条件下进行1 h的孵育，另取一干净试管，将1.2 mL的上层液体加入其中，再加入2 mL的Washing培养液，在200 g的条件下进行8 min的离心操作后将上清液去除，最后，将精液重悬于0.5 mL的Washing培养液中，在37℃的条件下进行0.5 h的孵育。

②密度梯度法：采用PureCeption密度梯度离心法，浓度分别为80%和40%，取一干净锥底管，向其中加入1 mL密度梯度液（80%）后，在其上方缓慢滴加1 ml密度梯度液（40%），再在最上层加入1 mL精液，在300×g的条件下进行20 min的离心操作后将上清液去除，最后，将精液重悬于0.5 mL的Washing培养液，在37℃的条件下进行0.5 h的孵育。

（2）实验组精子分离方法。实验组的2组精液选取的分离方法与对照组相同，并在对照组的基础上加入一定浓度的水溶性维生素E。具体方法如下。

①上游法：使用Quinn’s Sperm Washing Medium的Washing液，并向其中加入水溶性维生素E（浓度为30-240μmol·L-1），其余操作与对照组相同，只需将对照组中加入的Washing液更换为滴加了水溶性维生素E的Washing液即可。

②密度梯度法：采用PureCeption密度梯度离心法，浓度分别为80%和40%，其余操作与对照组相同，并各向其中加入水溶性维生素E（浓度为30-240μmol·L-1），只需将对照组中加入的Washing液更换为滴加了水溶性维生素E的Washing液即可。

1.3 观察指标

通过对比两组精子在分离后0 h和24 h的前向运动精子率、活动精子率，以及获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平，从而对分离效果进行有效评价。其中前向运动精子率、活动精子率通过计算机辅助精子分析仪进行检测分析，精子活动指数＝孵育后活动精子率/孵育前活动精子率[4]；精子获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平的检测，利用酪氨酸磷酸化抗体荧光标记物检测精子尾部TP状况[5]。

1.4 统计学处理

本次研究中的数据均采用SPSS 19.0软件进行分析处理，计数资料以例数和百分率表示，将均数±标准差作为计量资料（精子活力情况、获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平）等的表示方法，t作为组间数据进行检验。进行比较后得出P，当P＜0.05时，数据处理结果的统计学意义明显。

2 结果

2.1 分离后0 h、24 h精子活力情况

实验组精子在分离后0 h、24 h的前向运动精子率、活动精子率均优于对照组（P＜0.05），详见表1。

表1 分离后0 h、24 h精子活力情况（±s）

表1 分离后0 h、24 h精子活力情况（±s）

注：*t=3.0564，*P=0.0013；#t=13.3158，#P=0。

上游法 密度梯度法实验组 对照组 实验组 对照组0 h前向运动精子（%） 79.69±9.26 63.75±9.82 62.76±11.45 47.99±12.89 24h h前向运动精子（%）指标组别55.88±38.06 30.01±14.73 50.93±16.08 27.74±10.57 0 h活动精子（%） 90.06±8.03 81.03±7.68 89.12±9.18 83.50±13.18 24 h活动精子（%） 77.68±41.60 46.32±17.88 66.46±17.69 42.95±14.51精子活动指数 0.85±0.54* 0.57±0.21* 0.97±0.21# 0.45±0.13#

2.2 精子获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平

实验组获能0 h和2 h后酪氨酸磷酸化水平均高于对照组（P＜0.05），详见表2。

表2 精子获能0 h和 2h后酪氨酸磷酸化水平（±s）

表2 精子获能0 h和 2h后酪氨酸磷酸化水平（±s）

注：*t=2.1356，*P=0.0359；#t=2.1686，#P=0.0332。

指标组别上游法 密度梯度法实验组 对照组 实验组 对照组获能0 hTP（%） 6.22±7.07 5.09±6.21 9.76±9.86 7.84±8.13获能2 hTP（%） 14.33±12.53 10.62±9.39 18.98±14.83 13.84±11.58△ TP（%） 8.10±5.66* 5.71±4.25* 9.32±8.09# 6.00±5.32#

3 讨论

精子优选的目的是选出高质量的精子，因此通过有效的手段来提高精子优选工作的效率十分必要[6]。水溶性维生素E苯环上的酚羟基被乙酰化，酯水解为酚羟基后为生育酚。生育酚能促进性激素分泌，使男子精子活力和数量增加[7-8]。本次研究通过对比分析的方法，验证了水溶性维生素E可在精子优选过程中提高精子质量这一事实。

综上所述，在精子优选分离的过程中，向其中加入水溶性维生素E，可以有效改善分离后的精子质量，因此，值得推广。