CRP、叶酸代谢能力基因检测与妊娠期糖尿病的相关性研究

刘晓敏，崔妙平，姚琼，钟赛凤

邵阳市中心医院妇产科，湖南 邵阳 422000

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠前糖代谢正常，妊娠期才出现的糖尿病，妊娠合并糖尿病孕妇中90%以上为GDM，对母儿危害较大[1]。目前已成为全国妇幼卫生系统的一个沉重负担，该病是在妊娠期首次发生和发现的糖尿病或出现的糖耐量受损、代谢紊乱，给母胎带来诸多不良影响，并增加了母胎死亡率，对母胎远期影响大，有GDM病史的女性患糖尿病和心血管疾病的风险更高[2]。FIGO明确指出，目前在孕前、孕期及产后GDM的预防、诊断和管理，以及母儿近远期结局方面，还存在很大不足[3]，诸多学者从探索GDM的发病机制出发，以达到防治和管理GDM的目的。已有研究[4-5]认为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)在GDM的发病机制中起了重要作用，其机理主要为人体内调控MTHFR、MTRR的基因发生变异，从而造成叶酸代谢与利用能力不足增加Hcy的浓度，此外有研究[6]已报道与炎症反应也有关，而关于炎症因子在叶酸代谢能力障碍中是否发挥关键作用，此类国内外文献尚无报道，因此本研究拟检测分析GDM患者叶酸代谢能力障碍与超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)之间的关系，为探明妊娠期糖尿病的发病机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象选择2018年于邵阳市中心医院接受产检行口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)试验及叶酸代谢能力基因检测的孕妇，被确诊为GDM的患者50例，孕24～28周，年龄(29.68±3.50)岁，排除妊娠前糖尿病、高血压、肝肾疾病等病史。选择同期在我院产检时行OGTT试验及叶酸代谢能力基因检测的正常孕妇50例作为观察组，孕24～28周，年龄(28.75±2.09)岁。GDM诊断参照国际糖尿病与妊娠关系研究协会2011年发布的相关标准：空腹血糖≥5.1mmol/L，服用75g葡萄糖后1h血糖≥10.0mmol/L，2h血糖≥8.5 mmol/L，符合任意一项即诊断为GDM。

1.2 检测方法

(1)基因检测：采用PCR+SNE(单碱基延伸法)检测各基因所列位，试剂购自苏州旷远生物分子技术有限公司，仪器购自Life Technologies Holdings Pte Ltd公司。

(2)血糖检测：受试对象禁食12h后次晨空腹采集静脉血2mL用于检测空腹血糖；服用75g葡萄糖后，分别于1h、2h采集静脉血检测血糖水平；所有检测在抽血后1h内完成。检测仪器采用美国AU5800全自动生化分析仪。血糖检测采用己糖激酶法，试剂购自湖南圣湘生物科技有限公司。

(3)CRP检测：样本均采用含促凝剂分离胶真空采血管采集股静脉血4mL(排除溶血标本)，所有标本在采血后即刻以3000转/分钟，离心10min，分离血清。使用进行检测，采用速率散射比浊法测定CRP水平。检测仪器采用德国BN-II全自动特种蛋白分析仪。CRP试剂购自德国西门子医学诊断产品有限公司。

1.3 基因结果判定根据检测结果，判断叶酸代谢障碍风险等级：①未发现风险组：3个位点均无突变，或MTHFR基因C677T或仅MTHFR基因A1298C；②低度风险：MTHFR基因C677T和A1298C，或仅MTHFR基因T677T或仅MTHFR基因C1298C或仅MTRR基因A66G；③中度风险：MTRR基因A66G伴MTHFR基因T677T或C1298C或仅MTRR基因G66G；④高度风险：MTRR基因G66G伴MTHFR基因T677T或C1298C。

1.4 统计学处理采用SPSS19.0软件进行统计学分析。计量资料以()表示，组间比较采用两独立样本t检验；多组独立样本运用采用完全随机设计的单因素方差分析方法；计数资料组间比较采用Wilcoxon秩检验。P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结果

2.1 GDM组与正常组中CRP的比较GDM组、对照组CRP水平分别为(17.82±1.69)、(6.15±1.34)μmol/L，GDM组CRP水平高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 GDM组与正常组中叶酸代谢障碍风险比较50例正常组中叶酸代谢障碍未发现风险组32例，叶酸代谢障碍低度风险组14例，叶酸代谢障碍中度风险组3例，叶酸代谢障碍高度风险组1例，50例GDM患者中叶酸代谢障碍未发现风险组20例，叶酸代谢障碍低度风险组22例，叶酸代谢障碍中度风险组5例，叶酸代谢障碍高度风险组3例。结果表明正常孕妇与GDM患者比较，GDM更容易出现叶酸代谢障碍，经Wilcoxon秩检验比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 不同叶酸代谢能力GDM患者CRP水平的比较将50例GDM患者按照叶酸代谢能力不同，分为4组，分别为：未发现叶酸代谢障碍风险组、叶酸代谢障碍低度风险组、叶酸代谢障碍中度风险组、叶酸代谢障碍高度风险组，对各组中CRP水平进行比较，采用完全随机设计的单因素方差分析方法进行统计学比较，结果显示各组CRP水平无统计学差异(P＞0.05)，提示GDM患者中，各叶酸代谢能力障碍不同风险组中CRP水平无差别。

3 讨论

3.1 CRP与GDM相关性妊娠期糖尿病的发病机制与胰岛素抵抗密切相关，而体内的炎症刺激因在胰岛素抵抗过程中发挥重要作用，CRP是机体组织受到损伤刺激时，肝细胞合成的一种急性炎症因子，当机体胰岛素抵抗增加，妊娠期糖尿病患者胰岛素分泌不能随之增加，使得CRP合成增强，慢性低度炎症与大多数公认的GDM危险因素有关，炎性细胞因子可作为GDM疾病的筛查和诊断标记物[7]。GDM患者同时补充镁锌钙维生素D6周可以降低炎症和氧化应激的生物标志物[8]。CRP引发GDM的具体发病机制有待进一步研究，近来，肠道菌群与GDM的相互关系被广泛关注，也有研究表明CRP在妊娠期糖尿病发病机制中，是因为肠上皮细胞表达微生物相关分子模式受体(microbe-associated molecular pattern,MAMP)中主要成分Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)介导蛋白炎症反应[9]，因此，在临床上加强对CRP的动态观察，可一定程度上及时了解妊娠期糖代谢的早期变化，对病情的发生、发展和转归有一定的预测作用，国内大部分研究报道GDM与CRP有关，蒋惠玲[10]认为妊娠期糖尿病患者体内存在着高水平的炎症因子[白介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]，朱庆霞[11]认为GDM患者血清CRP水平高于正常人；观察组血清CRP水平均高于对照组，HOMAIR低于对照组，血清CRP水平与TG呈正相关。提示GDM患者血清CRP水平升高。本研究资料表明：CRP在GDM组中的水平高于正常组，这说明CRP在GDM发病机制中起到重要作用。与之相反，有研究[12]证明GDM组与正常孕妇组中CRP水平无明显差异，CRP在妊娠期糖尿病的发病机制中受到其他因素的影响，如瘦素等相关基因、年龄、饮食、运动、抵抗力、其他炎症介导因子等。因此，对CRP在GDM发病机制中是否发挥作用，目前研究结果尚不一致，有待进一步探讨CRP在GDM中的发病机制。

3.2 叶酸代谢能力障碍与GDM相关性孕期贫血、胎儿先天发育畸形等诸多妊娠并发症与叶酸缺乏有关，叶酸代谢能力基因异常导致的叶酸代谢障碍尚未引起足够重视，这是叶酸缺乏的重要原因，因此，从调节叶酸代谢基因角度寻找叶酸缺乏原因尤为重要。调节叶酸代谢的基因主要有MTRR与MTHFR，当这两种基因发生变异可能导致相应酶活性降低或丧失，从而导致叶酸代谢与利用能力不足，使叶酸代谢障碍，并增加同型半胱氨酸(Hcy)浓度进而引起相关并发症，Hcy是一种含硫氨基酸，在体内由蛋氨酸脱甲基代谢后生成，Hcy与胰岛素抵抗相互影响在GDM发病机制中起到重要作用，且高Hcy与不良妊娠结局有相关性[13]，MTRR能催化甲钴胺的再生，是甲硫氨酸合成酶(methionine synthetas,MTR)的辅助因子，对维持MTR活性至关重要。MTRR基因位于染色体5p15.2～15.3，包括15个外显子，最常见的突变位点为A66G，该突变导致MTRR异亮氨酸被甲硫氨酸替代。编码MTHFR的基因位于染色体1p36.3，包含11个外显子，C667T和A1298C是该基因两个最常见也是研究最多的突变位点。本研究通过检测MTRR(A66G)、MTHFR(C677T)、MTHFR(A1298C)这三种基因型，进一步从基因突变角度验证调节叶酸代谢能力基因突变在GDM的发病机制的影响，结果表明GDM组与正常组人群相比，叶酸代谢障碍高风险人数较正常组多(P＜0.05)差异具有统计学意义，这与管会苓、于天龙研究[14]一致，其研究表明MTHFR基因C677T位点基因型差异具有统计学意义(P＜0.05)，且有研究[15]发现GDM患者与正常妊娠者C677T基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05)因调控叶酸代谢基因突变在GDM中重要作用，已有学者[16]表明可通过补充叶酸降低妊娠期糖尿病的发病率。

3.3 不同叶酸代谢能力GDM患者中CRP水平的比较国内外研究对调节叶酸代谢能力基因突变与GDM的关系报道比较少，且结果有争议，本研究已表明GDM与叶酸代谢能力障碍有关，提示调节叶酸代谢能力基因突变与GDM的发生发展密切相关，这与国外Khan IA等[17]不一致，其研究认为GDM组与非GDM组C677T多态性等位基因和基因型频率无显著差异(P=0.8892)。国内张艳华等[18]也认为MTHFR(A1298C)可能不是妊娠糖尿病发生的易感因素之一。叶酸代谢能力基因突变对GDM发病机制的作用，可能受到其他遗传基因的影响，如国外有研究[2]表明，TCF7L2 rs7903146变异增加GDM患病风险。MTNR1B变异与GDM易感性显著相关。另外可能受到机体炎症介导因子、及外界因素影响，如孕妇周围环境、饮食习惯、运动有关，因此，本研究进一步探讨叶酸代谢调节基因突变是否与GDM患者机体CRP水平有关，有助于补充GDM患者基因突变学说，本研究将叶酸代谢障碍未发现风险、低度风险、中度风险、高度风险组中CRP的水平进行比较，无统计学差异，据此可推测CRP与叶酸代谢基因突变关联不大，叶酸代谢基因突变对GDM发病机制的影响可能受到其他多种因素的综合影响，有待于进一步研究。

4 结论

GDM患者中CRP水平高于正常孕妇，叶酸代谢能力障碍风险级别与GDM患病机制相关，叶酸代谢能力障碍在GDM的发病机制中与CRP水平无明显相关性，本研究结果表明CRP、叶酸代谢能力障碍在GDM发病机制中发挥了重要作用，并对CRP与调节叶酸代谢基因突变之间是否相关作了初步研究，叶酸代谢能力障碍对GDM的发病机制中可能受到机体内外因素的影响，包括其他炎症介导因子、血液流动学、其他遗传基因突变、环境因素、饮食结构、生活方式等多因素的影响，这对GDM遗传基因突变病因学说提供了较新的见解，并可能有助于识别新的GDM诊断或治疗方向，在一定程度上为GDM的早期识别、防治提供一定的理论依据。