炎性痛电针镇痛参数优选及对炎性因子的影响*

陈贞羽 龚 杰 庄晟坚 周 杰

1 浙江省杭州市下城区天水武林街道社区卫生服务中心 浙江 杭州 310003

2 浙江省杭州市萧山区中医院 浙江 杭州 311201

3 浙江省温州市中西医结合医院 浙江 温州 325000

4 浙江中医药大学附属第三医院 浙江 杭州 310005

课题组前期发现2Hz、120Hz是电针治疗慢性疼痛的有效频率[1]；且电刺激频率与波宽优化组合可提高镇痛效应，即频率为2Hz时，波宽为50µs镇痛效果最好，而频率为120Hz时，波宽为300µs镇痛效果最好[2]，然而尚未确定疏密波是否具有更好的镇痛效果。本研究选用经典弗氏完全佐剂（CFA）致大鼠炎性痛模型，应用Master-9电脉冲刺激器，模拟电针仪输出频率、波形、波宽、电流等电刺激参数，通过观察炎性痛大鼠行为学变化和相关炎性因子检测，筛选出电针治疗炎性痛的有效电刺激参数。

1 材料与方法

1.1 实验动物：清洁级健康雄性SD大鼠30只，体质量160～200g［动物由浙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（沪）2014-0016］。饲养期间给予啮齿类动物标准颗粒饲料及自由摄食与饮水，温度25±2℃，湿度30%～40%，12h循环灯光。

1.2 仪器和试剂：脉冲电刺激器（以色列AMPI公司，型号Master-9）；电刺激隔离器（以色列AMPI公司，型号ISO-Flex）；Digital Von Frey测痛仪（法国Bioseb公司，型号BIO-EVF3）。弗氏完全佐剂（美国Sigma公司）；CFA（美国Sigma，批号：SLBM 9312V）；IL-β EIA kit（美国Abcam公司）；TNF-αEIA kit（美国Abcam公司）。华佗牌无菌针灸针（苏州医疗用品厂有限公司，规格0.25mm×13mm）。

1.3 分组与模型的制备：采用SPSS17.0软件随机分为空白组（N组）、模型组（M组）、2Hz组、120Hz组、2/120Hz组，每组各6只。大鼠俯卧位，于右后足垫底部碘伏消毒，75%酒精脱碘，取1ml注射器抽取适量CFA，按照0.1ml/只缓慢注射于右后足跖皮下（N组注射等量的生理盐水），注射完成后用干棉球按压以防止出血和CFA的渗出。

1.4 电刺激器参数设置：2Hz组波形：双向对称矩形波；频率：2Hz；波宽：50μs；刺激强度和时间：1mA 15min，再2mA 15min，共30min。120Hz组波形：双向对称矩形波；频率：120Hz；波宽：300μs；刺激强度和时间：1mA 15min，再2mA 15min，共30min。2/120Hz组波形：双向对称矩形波；频率：2Hz持续3s，然后120Hz持续3s，两者自动切换；波宽：2Hz时，波宽为50μs，120Hz时，波宽为 300μs；刺激强度和时间：1mA 15min，再 2mA 15min，共30min。

1.5 处理与治疗：N组不做任何处理，自由活动。M组用特制的布套固定，不行针灸干预；其余各组均取右侧足三里、昆仑穴，用特制布套固定，0.25mm×13mm针灸针刺激，导线分别连接Master-9针灸针和脉冲刺激器，刺激器参数如上。每天1次，连续10天。

1.6 PWTs测试：触觉纤维丝检测造模前，造模后24h，干预第1、3、5、7、9、10天，共8个时间点PWTs。

1.7 取材：大鼠干预第10天结束后统一处死，剪取大鼠患侧即右后足跖炎症组织，立即称重后放入事先预冷的10ml离心管中，保存于-80℃的冰箱中待用。

1.8 指标检测：ELISA检测大鼠足跖炎症组织白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。将事先冻存的足跖炎症组织样本于冰浴下解冻，将预配制的PBS溶液按照样本重量以1∶9的比例加入离心管中，随后在冰浴环境下使用组织匀浆机充分匀浆，置于落地高效冷冻离心机中离心，4℃，3000rpm，离心10min，后取上清液1ml于离心管中，-80℃冻存待测。

1.9 统计学方法：采用SPSS17.0软件进行统计分析，计量资料以-x±s表示，组间比较用单因素方差分析；组间两两比较，方差齐性时采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。

2 结果

2.1 大鼠痛阈检测结果：见图1。造模后24h除N组外其余各组PWTs均显著下降（P＜0.01），提示造模成功。与M组比较，电针干预后各时间点PWTs均提高（P＜0.01）。在电针干预后第7～10天，2/120Hz组痛阈高于2Hz组（P＜0.01或P＜0.05）；干预后第7、9天，2/120Hz组痛阈高于120Hz组（P＜0.01）。

图1 各组大鼠痛阈检测结果比较

2.2 大鼠足跖IL-1β含量：见表1。与N组比较，M组IL-1β含量显著升高（P＜0.01）。2/120Hz组IL-1β含量显著低于M组（P＜0.05）。

2.3 大鼠足跖TNF-α含量：见表2。与N组比较，M组TNF-α含量显著升高（P＜0.01）。120Hz组和2/120Hz组TNF-α含量显著低于 M组（P＜0.05）和2Hz组（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 各组大鼠足跖炎症因子IL-1β含量比较（-x±s）

表2 各组大鼠足跖炎症因子TNF-α含量比较（-x±s）

3 讨论

研究结果表明3种参数组合（2Hz/50μs，120Hz/300μs及2/120Hz）电针均有明显镇痛效果，且从电针治疗起始终优于模型组。在电针干预1周之内，无论是低频、高频还是疏密波电刺激，均能提高模型大鼠的痛阈，三组之间无差异；而电针干预1周以后，发现2/1200Hz电针组大鼠痛阈不同程度优于2Hz组和120Hz组。可见病程在1周以内不同电针参数不影响疗效，而治疗后期应该选2/120Hz疏密波来治疗，这提示在临床治疗中炎性痛病程较长者应选用疏密波电针来治疗。

研究结果提示2/120Hz电针能抑制IL-1β、TNF-α两种炎症因子分泌，120Hz电针能抑制TNF-α分泌，而2Hz电针对炎性因子分泌无抑制作用，表明120Hz和2/120Hz电针较2Hz电针治疗具有更好的抗炎作用。因此，笔者认为2/120Hz电针镇痛效果优于2Hz电针可能与前者可以同时抑制两种炎症因子有关。

同时，考虑到疏密波可以降低实验对象或患者对电针的耐受性，且疏密波可以让多种内阿片肽全部释放，结合本研究结果看，建议电针治疗炎性痛时选用2/120Hz电针，不推荐使用连续波电针治疗。

4 参考文献

[1]周杰，庄晟坚，龚杰，等.不同频率电针对神经病理痛模型大鼠镇痛效应观察[J].浙江中医药大学学报，2016，40（12）：887-890.

[2]周杰,庄晟坚,龚杰,等.不同频率和波宽组合电刺激对健康大鼠痛阈变化的研究[J].浙江中医杂志，2017，52(10)：764-766.