黄河三角洲地区男性不育患者Y染色体AZF基因微缺失的研究

田明明，高洪莲，孙大康，孟玮

滨州医学院附属医院临床医学实验室，山东滨州 250063

随着生活节奏加快、生活压力增大及环境污染危害，目前不孕不育症患者有逐年增多的趋势，全球育龄夫妇中约有15%不育，其中男性因素约占50%[1]。引起男性不育的病因有很多，包括感染、免疫功能异常、精索静脉曲张、染色体异常等[2]。男性不育常伴随着精子数量减少，国内外学者已对其进行了大量相关研究。由遗传缺陷引起的精子发生障碍约占男性不育因素的30%。Y染色体长臂无精子症因子（azoospermia factor,AZF）微缺失是导致男性生精障碍主要的遗传学因素之一[3-4]。2015年8月—2017年12月间该研究对黄河三角洲地区男性不育患者Y染色体AZF微缺失情况进行分析，以了解AZF微缺失与男性不育的关系，为临床的诊断和治疗提供依据，报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

该研究收集因男性无精子症、少精子症不育就诊于该院的328例患者及80例精液无异常患者，进行外周血Y染色体AZF微缺失检查，年龄22～55岁。无精及严重少精症纳入标准：染色体核型正常，病因诊断为Y染色体微缺失，且参照WHO标准，无精症患者为连续3次精液常规检查，均未发现精子，少精症为精子密度＜20×109/L,严重少精症为精子密度＜5×109/L。在患者填写知情同意书后，采集EDTA抗凝血5 mL。

1.2 方法

Y染色体微缺失检查：采用北京爱普益生物科技有限公司AZF区微缺失核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）。应用PCR及荧光标记探针技术，快速检测Y染色体 AZF区的 8个 STS位点：AZFa为 sY84、sY86；AZFb 为 sY127、sY134；AZFc 为 sY254、sY255；AZFd为sY145、sY152。对每个待检样品进行4个（分别为 A、B、C、D）三重 PCR 反应，正常男性、女性为对照组。通过扩增曲线直接观察结果。

1.3 统计方法

数据采用SPSS 18.0统计学软件分析，计数资料采用百分比（%）表示，进行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在328例男性不育患者中，检出Y染色体AZF微缺失26例，缺失率为7.93%（26/328）；无精症患者缺失率为14.75%（18/122）；严重少精症患者缺失率为3.88%（8/206）；两组Y染色体AZF微缺失率，差异无统计学意义 (P＞0.05)。最常见缺失类型为仅AZFc缺失，占38.46%（10/26）。正常对照组均未发现Y染色体微缺失。

所检出的26例Y染色体微缺失分为以下8类：AZFa、AZFb、AZFc、AZFa+c、AZFa+d、AZFb+c、AZFb+d、AZFb+c+d缺失。其中AZFa缺失2例（7.69%）；AZFb缺失 4例（15.38%）；AZFc缺失 10例（38.46%）；AZFa+c缺失 1例（3.85%）；AZFa+d缺失 2例（7.69%）；AZFb+c缺失 4例 （15.38%）；AZFb+d缺失 1例（3.85%）；AZFb+c+d 缺失 2 例（7.69%）；sY254、sY255为缺失率最高的位点（65.38%，17/26），其次是sY134（42.31%，11/26）、sY127（30.77%，8/26）。

3 讨论

因研究方法、研究人群、患者纳入标准及STS位点选择等的不同，各地区报道的男性不育患者Y染色体 AZF微缺失发生率从0.7%～55%不等[5-7]。该文检测的328例男性不育患者中，Y染色体微缺失发生率为7.93%，其中122例无精症和206例严重少精症患者AZF缺失发生率分别为14.75%、3.88%。这与Zhang等[8]发现的无精症患者AZF缺失率10%～15%一致，严重少精症患者缺失率与Lin等[9]报道的低于5%一致。该研究最常见缺失类型为仅AZFc缺失，最常见缺失模式为sY254+sY255，这与其他研究者的报道基本一致。

AZF各区域缺失临床表现差异较大，检测结果可指导后续治疗，对于有AZFa区域位点缺失（如该研究中缺失模型为AZFa、AZFa+c、AZFa+d）的患者，缺失后果最严重，通常表现为唯支持细胞综合征，即SCO综合征，同时伴有睾丸体积缩小，临床表现无精子症，目前对SCO综合征没有有效的治疗方案，不建议行睾丸穿刺。对于有AZFb区域位点缺失（如该研究中 AZFb、AZFb+c、AZFb+d、AZFb+c+d） 的患者，睾丸组织学特征常表现为SCO综合征或是生精阻滞（减数分裂后生精上皮细胞缺失，生精过程被阻滞在精母细胞阶段，无精子生成），此类患者也不宜行睾丸穿刺。AZFc缺失的表型多样，通常此类患者残存精子生成能力，可表现出无精症，也可表现出精子数目正常，但形态异常，无精症患者可通过睾丸穿刺获得精子，并行卵胞浆内单精子注射技术，但是，此类患者的男性子代将成为AZFc区域位点缺失的携带者，而且，AZFc缺失的少精症患者，精子数目有进行性下降趋势，最终发展为无精症。因此，精子的遗传学异常所带来的遗传风险也是需要引起关注的，很有必要对无精症及严重少精症患者夫妇进行遗传学检查，进而防止基因缺陷的遗传。对于AZFd缺失的患者，临床表现为轻度少精症，或精子数目正常，形态异常。

Y染色体微缺失的检测为男性不育的诊断提供重要依据。该研究在一定程度上明确了黄河三角洲地区无精及严重少精症患者Y染色体微缺失的特点。从而使得临床上一些原因不明的无精及严重少弱精症患者明确病因，为临床诊疗方案提供依据。同时，为防止基因缺陷的遗传，可通过胚胎植入前遗传诊断技术选择女性胚胎以防止不育患儿的出生。