非洲猪瘟病毒检测方法进展

李 芹

（云南省曲靖市动物疫病预防控制中心，云南 曲靖 655000）

非洲猪瘟隐患已经存在多年，由于未对我国造成影响，也一直被人们忽视。这是一种由非洲猪瘟病毒引起的高传染性的病毒，它起源于非洲，之后蔓延到南美洲、欧洲等地。直至去年8月份传入中国，这才使得国人高度关注。由于目前尚未研发出有效的疫苗预防非洲猪瘟，因此只能通过扑杀感染非洲猪瘟的猪的方式来防控。这也对国内养猪业造成了巨大损失，这也是猪肉价格上涨的原因之一。所以非洲猪瘟病毒检测方法的进展迫在眉睫，许多专家也是研究出多种方法，但都以失败告终，故加强该病预防措施的工作具有重大的现实意义。

1 最古老的检测法—红细胞吸附法

早在1960年，Malmquist在观察病毒感染猪白细胞的培养物后出现了血红细胞吸附的现象，将其应用于 ASFV上，发现了红细胞吸附法也就是所谓的HAD法。但是由于当时科技水平的落后，得不到发展。因此过了许多年才被广泛认可作为ASFV的鉴定方法。ASFV的分离株大部分具有 HAD的活性，但极少数的毒株没有此活性，称为NHV（non- haemadsorbing virus）毒株，这类毒株大多数不携带病毒。因此在检测时就存在着许多问题，且红细胞吸附法的检测时间一般为3～10d，所以慢慢地被接下来的PCR法所代替。

2 非洲猪瘟PCR方法检测的进展

PCR是指聚合酶链式反应，这种方法在检测动物是否感染ASFV中起到了重要作用。检测方法是将病体中病毒 DNA片段通过聚合酶链式反应（PCR）进行扩大，直到满足检测需求的量，然后进行检测，这种方法提到了检测效率和检测质量。PCR法的有点在于它检测过程比较简单，检测方法也快速并灵敏，这比通常的 ELISA 和 FAT检测技术相比有了不少的提高；但是它也有致命的缺点，他在检测时及其容易产生交叉污染的现象，导致检测失灵，并且其仪器价格也十分昂贵。但是目前PCR检测技术仍然检测人员的第一选择，虽然存在漏洞，但是它可以提供基本的信息，完成基本检测。

3 荧光抗体实验法

相比于PCR方法，荧光抗体法即FAT法的出现更加早，早在1969 年，Bool 等人就率先将FAT法应用于ASFV的检测上，该试验方法不仅仅用于检测ASFV，其最为广发的应用是对病毒抗原的检测。FAT方法主要有两个方面的运用，第一，可用于白细胞培养物进行抗原检测；第二，可将感染猪瘟的淋巴结、肾、肺等组织冰冻后切片，然后进行观察，若细胞浆荧光则为病毒阳性。在急性传染性疾病的检测中，FAT的有点十分明显，高效、敏感性高、价格低廉。但是对于一些慢性疾病，它所检测的显著性、敏感性都大幅度降低，可能是由于抗体与靶抗体形成了复合物，阻断了与荧光抗体的结合。所以由于非洲猪瘟是急性传染病，这种方法依旧可以快速高效地使用，未来它的发展也应该朝着慢性、亚急性疾病的而方向发展。

4 探针杂交技术的出现

基于PCR方法的广泛运用，许多专家将探针杂交技术与PCR法广泛联系，出现了一种新型方法。该法将样品在凝胶上分离，然后通过“影印”的方式转移到固相支持物上，然后在与带有放射性标记或其他标记的探针进行杂交，通过放射自显影或显色反应，判断样品中是否有探针同源的分子。这画中方法可以有效地排除PCR检测过程中非特异性结果，操作更加简单，检测也更加迅速。但是它存在的问题是建立难度较高，要求人员的操作水平也比较刻苦，过程也十分繁琐。不过显然这是PCR方法后有一个改进得不错的方法，这种改进钻研的方法值得国内专家学习，早日研制出非洲猪瘟病毒的疫苗。

5 结语

随着世界经济的快速增长，贸易全球化也发展十分迅速。一些具有高传染性的病毒的跨国传染也接连发生，是国内的养殖业遭到了沉重的打击，严重阻碍了我国养殖业经济的发展，也对我国出口贸易造成了十分严重的影响。非洲猪瘟在去年在中国被发现，对于国内猪的威胁也越来越大，由于此病毒未研发出疫苗，我国专家必须高度警惕，建立快速的ASFV的检测室，减少病毒的扩散。目前国内检测ASFV的方法虽然很多，但是未能从根源上防止病毒的产生，因此对为感染ASFV病毒的动物应采取有效的预防措施。伴随着免疫学和生物技术的发展，ASFV疫苗的研发指日可待，非洲猪瘟病毒的防控也将得到进展。