探讨药物GLP机构致癌试验中啮齿类动物的临床检查

李春令 刘增祥 刘金鑫 孙昌华

(1.山东省医疗器械产品质量检验中心，济南 250101)(2.山东省食品药品检验研究院，济南 250101)

随着我国医药工业的迅猛发展，药物研发状况也由之前的仿制性研究逐步过渡为创新性研究。尤其是随着我国重大新药创制专项的实施，新增加的需要评价的药物数量呈逐年递增趋势，愈来愈多的创新药物需要进行致癌风险的评价[1]。致癌性试验是创新药物安全性评价和上市风险控制的重要组成部分。新药上市申请时通常需要提供必要的完整的动物致癌性试验结果[2]。在国际上，ICH、EMEA、FDA等药物管理机构已经制定并实施了相关指南[3]。2007年国家食品药品监督管理局发布实施的《药品注册管理办法》中，规定“致突变试验结果为阳性”的化合物需要进行致癌性试验[4]。2010年4月国家食品药品监督管理局又颁布了《药物致癌试验必要性》的指导原则，明确规定预期长期使用的药物需要进行啮齿类动物致癌试验[5]。在药物非临床研究领域，综合实力较强的GLP机构均已申报或现已开展致癌性试验。致癌性试验周期长，花费高，试验设计和结果比较复杂[6]，使用动物数量多，对研究人员业务能力要求高。试验周期通常情况下应进行为期2年的终生暴露，中短期致癌试验期限一般均<1年(通常为3～6个月)[1]。在致癌实验的动物(尤其是大鼠)选择中，针对不同的药物可以更好地更合理地挑选动物品种、品系和性别(如果需要)[7]。致癌试验进行半年后开始出现体表肿块，试验进行1年后动物自发死亡率明显升高[8]。所以详细的临床检查显得尤为重要，每周至少一次，记录可见、可触肿物的生长情况及动物出现的临床体征，其检查结果为动物人道终点、临床病理学检测、组织病理学检查提供直接参考依据，现总结并归纳了2年来大鼠背景数据的临床检查方法，探讨其在致癌试验中的应用。

临床检查法是为诊断的目的而应用于临床实际的各种检查方法[9]。基本的临床检查方法主要包括：问诊及一般称为物理检查法的视诊、触诊、叩诊、听诊和嗅诊。动物临床检查之前主要是对病畜进行客观的观察与检查，主要应用于大动物。随着生命科学、医药产业的快速发展，临床检查也逐步应用于被称为“活的试剂”、“活的精密仪器”的实验动物，实验动物与大动物的临床检查相比较各不相同，具有其自身的特点。

1 问诊

问诊是临床检查的第一步，通过问诊可获得第一手资料，对其他诊断具有指导意义[10]。利用知识与经验进行一系列有目的、有重点的询问，通过询问饲养员及相关实验人员了解和掌握动物的日常管理情况，动物的饮食、饮水情况以及更换垫料时动物的精神状态、粪便、尿液等情况，以便进行下一步有针对性的检查。

2 视诊

视诊是检查者用视觉直接观察动物群体和个体的整体概况或局部表现的诊断方法，也称为望诊。视诊是临床诊断中最简单、最易行的首选方法，经常可以搜集到很重要的症状和资料[9]。视诊的适应范围包括群体检查和个体检查[10]。啮齿类动物的群体检查通常选择隔笼观察法，检查者进入饲养室后，在安静的状态下观察每笼动物的整体状态，被毛状态，精神及体态、姿势与运动、行为。个体检查通常与触诊等检查相结合进行。尽管视诊是临床检查中最简单易行的方法，但它需要检查者熟悉动物的生物学特性，同时要具有丰富的医学知识和临床经验，否则会出现视而不见的情况。

3 触诊

触诊是检查者通过触觉及实体感觉进行检查的一种方法。即检查者用手触摸按压动物体的相应部位，判定病变的位置、大小、形状、硬度、湿度、温度及按压敏感性等，以推断疾病的部位和性质[10]。触诊的适用范围广，可遍及动物躯体各个部位。在致癌试验过程中动物半年后便开始出现体表肿物，所以触诊成为主要的临床检查方法。

3.1 触诊方法

触诊的方法分为浅部触诊和深部触诊等[9-13]。

3.1.1浅部触诊:辅助人员将动物从笼内取出放置于检查台后，首先观察动物的精神及被毛状态，然后将动物保定，检查者按照从头至尾的顺序抚摸躯体，主要检查体表的温湿度、皮肤弹性、浅表淋巴结、局部肿物位置、肿物大小、肿物软硬程度及敏感性。

3.1.2深部触诊:深部触诊时辅助人员将动物呈仰卧姿势保定，主要检查腹腔内脏器及腹部的肿物，因实验动物个体较小，所以触诊时动作要轻柔，当检查到某部位敏感性时，应本着先健区后病区，先周围后中心，先轻触后重触的原则进行，并注意与对应部位或健区进行比较。深部触诊通常分为：按压触诊、切入触诊和冲击触诊。其中，按压触诊适用于检查实验动物胸腹壁的敏感性及腹腔器官与内容物的性状；切入触诊、冲击触诊适用于大动物的临床检查。触诊虽然是一种常用、简便的方法，但要做到判断准确，也须经过长时间的锻炼。显然，触诊也并不单纯是用手去摸，而必须是同时手、脑并用，做到边触诊边思索。有句口诀总结的好，“触诊方法常用到，手脑并用细琢磨；体表光滑无肿物，温凉润燥手感觉”[14]。

3.2 触感分类

3.2.1捏粉感(面团感)：感觉稍柔软，如按压生面团，指压留痕，除去压迫后慢慢复平，常见于皮下水肿，表明皮下组织内有浆液浸润。

3.2.2波动感：柔软而有弹性，指压不留痕，进行间歇性压迫时有波动感。常见于血肿、组织液外渗、脓肿等。

3.2.3坚实感：感觉质地致密，硬度如肝。见于组织发生细胞浸润或结缔组织增生。

3.2.4硬固感：感觉组织坚硬如骨。见于骨瘤等。

3.2.5气肿感：感觉柔软而有弹性，并随触压而有气体向邻近组织传动感，同时可听到捻发音。多为皮下气肿的特征。

4 叩诊

叩诊是用手指或器械对动物体表进行叩击，使之振动而产生音响，根据振动和声响的特点，来判断被检部位的脏器状态有无异常的一种检查方法。声音现象是叩诊的理论基础。动物的各个器官、组织有不同程度的弹性，当叩诊时可产生不同性质的音响。叩诊通常分为直接叩诊法和间接叩诊法，结合触诊实验动物常使用直接叩诊法来检查腹部是否可见胃肠鼓气。

5 听诊

听诊是借助听诊器或直接用耳朵听取机体内脏器官活动过程中发出的自然或病理性声音，再根据声音的性质特点，判断其有无病理改变的一种方法。听诊的方法可分为直接听诊法和间接听诊法，因听诊多适用于大动物，故较小实验动物较少使用。

6 嗅诊

嗅诊是用嗅觉发现、辨别动物的呼出气体、口腔臭味、排泄物及病理性分泌物异常气味与疾病之间关系的一种检查方法[10]。异常气味大都来自皮肤、黏膜、呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道呕吐物、排泄物或脓液等。实验动物经常用嗅诊检查的主要有呼出气体、粪便、尿液、脓液味等。嗅诊通常情况下会结合动物更换垫料时或与视诊、触诊等临床检查进行。

动物临床检查过程中，物理检查法(视诊、触诊、叩诊、听诊和嗅诊)是用检查者的视觉、触觉、听觉和嗅觉器官去感知外界现象的。感觉器官的灵敏程度是不同的，人们感官精确程度的顺序是视觉，触觉，听觉，嗅觉和味觉，因此，视诊是最可靠的检查方法，触诊次之，而依靠听觉的叩诊和听诊则更次之。临床检查过程中应详细记录每只动物的临床状态，如有异常应结合上次检查进行仔细比较分析，及时汇报给实验专题负责人及相关实验人员。总结动物的临床检查方法，有个口诀概括的更为全面，即“临床检查方法多，摸问视听叩常做；粪尿气味用鼻闻，六大方法莫记错；先整体后个别，系统检查加思索；大小症状均罗列，蛛丝马迹莫放过”[14]。

目前我国新药创制能力不断增强，如何更好地进行致癌性研究评价是我们面临的紧迫性课题。我国GLP机构起步较晚，与国外先进水平存在一定差距，但是在国内管理机构及毒理学家的共同努力下，相信与国外的差距会越来越小，并逐步实现与国际接轨。