液基细胞学联合HPV分型在宫颈癌早期筛查中的意义

喻朝霞，潘陶强，黄启梅，张云荣，张 润，邓士杰

（安徽省安庆市第一人民医院病理科，安徽 安庆 246000）

我国是宫颈癌的高发地区，发病率仅次于乳腺癌，严重威胁着妇女的健康和生命。宫颈癌是唯一可早期发现并实施预防的恶性肿瘤，主要病因是高危型人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染。因此，降低已婚女性的HPV的感染可通过HPV检测进行。目前液基细胞学检查（TCT）是宫颈细胞学的主要筛查方法[1]，但需要依靠医生的主观判断来确认结果，且宫颈癌细胞发生浸润性改变现象较晚，无法在宫颈癌早期诊断中进行应用。因HPV-DNA检测能够诊断早期宫颈宿主细胞感染HPV，本研究采用液基细胞学技术（TCT）联合HPV分型进行宫颈病变筛查，旨在探讨TCT联合HPV分型检测对早期宫颈癌筛查的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年5月～2018年5月本院收治的宫颈癌的患者4000例，性生活史超过2年，年龄20～64岁，平均（33.2±10.6）岁，无妊娠，无其他妇科疾病，无宫颈手术史，处于非月经期；均同意进行TCT和HPV检测。

1.2 方法

采集标本前24小时内禁止性生活；标本采集前3天内禁止阴道冲洗或使用阴道用药。所有病例均使用一次性取样器，将专用毛刷置入宫颈口，在鳞状上皮以及宫颈内鳞柱交界处采集细胞，连续刷3～5圈后取标本，将宫颈分泌物装入专用的细胞保存液收集管中，并做好标记。

1.2.1 TCT检测

于宫颈口及颈管部用宫颈刷收集脱落上皮细胞，并置于ThinPrep保存液中，送至我院病理科进行细胞学检查。检查结果分为：含有无明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）和鳞状细胞癌（SCC）。

1.2.2 HPV检测试剂

DNA提取：将保存于收集管中的宫颈分泌物放入1.5 mL离心管中，加入裂解液150 μL，充分震荡混匀，在100℃金属浴中加热10 min，13000 rpm离心10 min，取中间层DNA溶液待用。采用HPV基因分型（23型）检测试剂盒，将提取的DNA采用聚合酶链式反应（PCR）扩增，在已固定核酸探针的低密度基因芯片上进行杂交、孵育、显色，根据膜条上蓝色斑点显现的位置读取该位置标注的基因型信息，对HPV感染进行分型（23型）。HPV基因分型（23型）检测试剂盒，其中包括5种低危型HPV：81、43、42、11、6和18种高危型HPV：83、82、73、68、66、59、58、56、53、52、51、45、39、35、33、31、18、16。

1.2.3 病理学检测

将TCT和HPV-DNA其中两种检测均为阳性或一种检测为阳性者进行阴道镜取活检查，病理组织结果分为宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）、炎症或正常，其中CIN-Ⅰ相当于TCT诊断中的LSIL，CIN-Ⅱ和CIN-Ⅲ相当于TCT诊断中的HSIL。

1.3 统计学方法

上述数据应用SPSS 20.0软件分析，计量资料与计数资料分别以()及%表示，组间比较分别采用t及x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TCT检测

TCT检测中正常或炎症者、ASCUS、LSIL、HSIL及SCC患者HPV感染率分别为26.03%（880/3380）、59.43%（189/318）、82.35%（140/170）、85.11%（80/94）、100.00%（38/38）。

2.2 病理学检测结果分析

病理检测正常或炎症者、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ与CIN-Ⅲ及SCC中，高危型HPV感染率分别为19.62%（650/3312）、79.33%（426/537）、89.38%（101/113）、100.00%（38/38）。

2.3 3种检查方法结果比较

HPV灵敏度为81.00%（1215/1500），特异度为95.48%（2387/2500），阳性预测值为91.49%(（1215/1328），阴性预测值为89.33%（2387/2672）；TCT灵敏度为65.73%（986/1500），特异度为86.36%（2159/2500），阳性预测值为74.30%（986/1327），阴性预测值为80.77%（2159/2673）；2者联合灵敏度为86.53%（1298/1500），特异度为95.72%（2393/2500），阳性预测值为92.38%（1298/1405），阴性预测值为92.22%（2393/2595）；TCT联合HPV-DNA分型检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于单独应用TCT，灵敏度、阴性预测值显著高于单独HPV-DNA分型检测（P＜0.01）。

3 讨 论

据统计数据显示，我国每年的宫颈癌新发病例约占全世界发病总数的25%～33%，实施疾病防治与控制疾病恶变显得至关重要[2]，宫颈癌的发病是一个缓慢进展的过程，大量基础与临床研究已证实[3]，宫颈癌病变是一个单向的病理生理学发展过程，早期干预治疗能够抑制癌变组织发展演变为宫颈癌的可能。普通宫颈癌患者由癌前病变发展至宫颈癌通常会经历10～20年，若在病变过程中得到规范的、合理的早期筛查，根据筛查结果进行对症治疗，通常能逆转疾病的发展[4]，因此早期诊断是预防宫颈癌发生的重要环节。目前临床常见的检查手段有液基细胞学，HPV检测，阴道镜检查以及宫颈组织活检。宫颈刮片涂片准确性可达到97%～100%，但有研究指出其敏感性仅为29%～56%[5]，因此临床检查中经常会出现假阴性，导致漏诊误诊。病理学检测的另一大问题是存在检查盲区，主观性较强[6]。针对巴氏涂片的缺点及不足，研究者对制片技术进行了一定的改良修正发明了TCT检测，21世纪初被广泛推广于临床使用。对取材器进行保留，使标本保留最大程度的完整性，同时将标本完全置于保存液中，避免制片过程对标本的损害。本研究所选取的4000例患者中，TCT检测结果，随着宫颈癌的病变HPV阳性检出率升高；TCT联合HPV-DNA分型检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于单独应用TCT，灵敏度、阴性预测值显著高于单独HPV-DNA分型检测。

综上所述，TCT联合HPV-DNA检测结果准确度均优于单独应用其中一种方法的检测率，因此值得在临床上推广应用。