气相色谱法同时测定卡莫司汀原料中3种有机溶剂残留量

2019-01-26高燕霞庞文哲张轶华

中国药业 2019年3期

韩彬，高燕霞，庞文哲，张轶华

（河北省药品检验研究院，河北石家庄 050011）

卡莫司汀又称双氯乙亚硝脲、亚硝基脲氮芥、卡氮芥，是目前使用较广泛的周期非特异性抗肿瘤药。人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）规定了69种组分作为药品中残留溶剂的检测对象，并规定了各组分在药品中的残留限度［1］。国内生产企业共用到有机溶剂3种，即甲酸、乙醇和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。卡莫司汀为 2010 年版《中国药典（二部）》［2］收载，但均未对残留溶剂进行控制，我国和欧洲药典［2-3］均采用气相色谱法测定挥发性溶剂的残留量，也有采用气相色谱（GS）法测定残留溶剂的［4-5］。本研究中采用 GS法同时测定3种有机溶剂残留量，直接进样方式提高了甲酸和DMF的响应值，便于操作，可更好地控制药品质量。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

ThermoTRACE1310型气相色谱仪（Thermo公司）。

1.2 试药

甲酸（批号为 20180912），乙醇（批号为20180201）和DMF（批号为20120319）均为色标物质，均购自天津市光复精细化工研究所；甲醇（色谱纯，Fisher chemical）；卡莫司汀原料药由河北某药厂提供（批号分别为150901，150902，150903）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：HP-FFAP 柱（30 m ×0.53 mm，1 μm）；检测器：FID；进样量：1.0 μL；起始温度：40 ℃ ，维持10 min，以10℃ ／min的速率升温至200℃，维持3 min；进样口温度：200℃；检测器温度：230℃；载气：N2；流速：3.0 mL ／min；分流比：5 ∶1。采用直接进样方式，以甲醇作为溶剂，溶剂无干扰，气相色谱图见图1。

图1 气相色谱图

2.2 溶液制备

取甲酸、乙醇和DMF适量，精密称定，用甲醇定量稀释成每 1 mL 中约含甲酸 0.5 mg、乙醇 0.5 mg、DMF 0.088 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取卡莫司汀原料约1.0 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：取甲酸、乙醇和DMF适量，精密称定，用甲醇定量稀释成每1 mL中约含甲酸1.0 mg、乙醇 1.0 mg、DMF 0.176 mg的混合溶液，作为对照品贮备液，由对照品贮备液逐级稀释，分别配制（按乙醇计）质量浓度为 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.8，1.0 g ／L 的溶液，按拟订色谱条件分析。以峰面积（A）为纵坐标、质量浓度（C）为横坐标绘制标准曲线。结果见表1。

表1 3种残留溶液的回归方程与线性范围（n＝7）

精密度试验：取2.2项下对照品溶液，按拟订色谱条件测定，连续进样6次。结果甲酸、乙醇、DMF峰面积的RSD分别为 0.52%，1.04%和 1.31% （n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取样品（批号为 150901）1.0 g，精密称定，按2.2项下方法平行制备6份，按拟订色谱条件测定含量。结果甲酸、乙醇、DMF的平均含量分别为2.74%，0.047%，0.0029%，RSD分别为 0.72%，1.62%和 2.31% （n＝6）。

稳定性试验：取对照品溶液分别于 0，2，4，8，12，24 h时进样，测定各色谱峰峰面积。结果甲酸、乙醇、DMF峰面积的RSD分别为 0.81%，1.10%和 1.60% （n＝6），表明对照品溶液在24 h内基本稳定。

检出限与定量限确定：将对照品贮备液逐级稀释，按信噪比（S／N）＝3计算，甲酸、乙醇和DMF检出限分别为 0.02，0.001 6，0.002 4 μg；按S／N＝10 计算，最低定量限分别为 0.07，0.004 5，0.007 μg。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为150901）约 1.5 g，精密称定，置 10 mL容量瓶中，共 9份，按80%，100%，120%计算回收率。分别加入对照品溶液4，5，6 mL，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。按拟订色谱条件分析，以外标法计算。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（%，n＝9）

2.4 样品含量测定

2010年版《中国药典》附录ⅧP中规定，甲酸限度为 0.5%，乙醇限度为 0.5% ，DMF 限度为 0.088% 。对3批卡莫司汀原料药的残留溶剂进行测定。结果见表3。可见，甲酸检出量远远超过限度值，应加强对残留溶剂的质量控制。

表3 3批样品残留溶剂含量测定结果（%）

3 讨论

3.1 进样方式和进样口温度选择

由于DMF的沸点较高（149～156℃），不容易充分气化，我国药典中明确建议采用直接进样法测定。文献［6］报道用1，3-二甲基咪唑啉酮作为溶剂，采用顶空进样法测定DMF残留量，但该溶剂昂贵，检验成本较高。卡莫司汀熔点较低（30～32℃），遇热不稳定，本研究中将进样口温度分别设为160℃和200℃进行试验，试验结果证明，2种温度下产生的热分解产物均与待测物质分离良好。为提高甲酸和DMF的灵敏度，故采用直接进样方式，进样口温度设为200℃。