长沙县地区地中海贫血筛查与基因诊断结果分析

杨牡丹 贺丹

410100长沙县妇幼保健医院，湖南 长沙

地中海贫血(TM)是一种较为严重的遗传病，主要是由于珠蛋白基因的缺失或点突变，抑制蛋白链的合成所致。虽然轻型TM 不会影响正常发育和日常生活，但会引起遗传性危害，而中间型及重型TM不仅会给家庭带来重大的经济和精神负担，也会明显影响患儿生长发育。产前诊断是阻止重症患儿的有效手段[1]，产前筛查及基因诊断是目前控制TM的有效措施。而开展产前诊断是了解和掌握管辖范围内出现TM的概率和相应的基因类型。对2016年12月-2018年11月在我院进行产前筛查及基因诊断的资料进行回顾性分析，旨在掌握我县TM发病情况。

资料与方法

2016年12-2018年11月在我院进行地中海贫血筛查及基因诊断标本18 500例，年龄20～38岁，平均32岁。

方法：①筛查：严格按照采血规范，抽取2 mL EDTA K2血常规管，采用全自动高压液相毛细管电泳仪进行检测，相关指标作为地中海贫血的初步筛查依据。②基因检测：对于初步检测为阳性的孕妇，收集夫妇血样或孕妇孕期在B 超引导下抽取羊水或脐血，7 d 内送至上级医院或华大基因研究公司地贫基因诊断。高通量测序(NGS)采用Magen 核酸提取试剂盒进行DNA 提取，利用质量值和深度对SNP和InDel进行过滤得到变异结果。

基因检测指标：①α-地中海贫血基因采用缺口PCR，即gap-PCR 方法诊断，主要检测SEA、3.7 和4.2 三种缺失型突变。②β-地中海贫血基因采用PCR结合反向点杂交作为诊断依据，主要检测常见17种点突变。

结 果

初步筛查阳性率：18 500 例孕妇共检出地中海贫血表型阳性1 427例，阳性率为7.71%。

基因诊断：对地中海贫血表型阳性进一步经基因筛查，阳性517 例，携带率为2.79%，其中α型251 例(48.55%)。基因类型：①--SEA/α α 94 例(37.45%，标注型)；②--SEA/-α3.7 10例(3.98%，中型)；③--SEA/-α4.2 58 例(23.11%，标注型)；④αα/-α3.7 51 例(20.32%，静止型)；⑤αα/-α4.2 38 例(15.14% ，静止型)。β型 266 例(51.45%)，基因类型：①CD41-42 109 例(40.98%)；②IVS-Int654 95 例(35.71%)；③CD17 40 例(15.04%)；④CD43 22 例(8.27%)。

讨 论

我国地中海贫血发病集中在长江以南，以广东、广西、贵州、四川、湖北、湖南等省为高发地带[2]。本病以α地中海贫血及β地中海贫血最为常见。轻型地中海贫血临床症状不明显，容易漏诊、误诊，而重型患者贫血严重，往往需输血维持生命，患儿生命脆弱。由于危害重大，对其研究从未止步。了解发病机制才能从本质上加以认知，从而制定有效预控措施。①珠蛋白基因缺失和突变：珠蛋白基因分为α珠蛋白基因簇及β珠蛋白基因簇，其在红系发育过程中具有较高的红系组织特异性和发育阶段特异性，若此两类基因发生缺失或突变，便会导致相应贫血疾病的发生。纵观国内外近年来的研究，对地中海贫血发生的机制主要集中在珠蛋白基因上，并发现α地中海贫血基因突变类型有约46种点突变和35种缺失突变，而β地中海贫血基因有约186 种突变类型，主要是点突变[3-4]。②表观遗传：表观遗传可提供时间、地址、方式三种信息的遗传指令，其遗传可不改变DNA 序列下进行。国内外诸多研究表明，多种遗传性疾病与表观遗传有关。③DNA 甲基化：研究发现，DNA 甲基化也是导致基因失活的主要机制。动物实验表明，DNA 甲基化修饰与类珠蛋白基因表达调控有关[5]。

本研究中，18 500 例孕妇中共检出地中海贫血表型阳性1 427例，阳性率为7.71%，再次经基因诊断地贫携带517例，携带率为2.79%，低于文献报道的广东(8.3%)、广西(15.2%)[6-7]，说明地中海贫血存在地域差异。虽然本研究携带率低于邻近省，但对于一个人口大省的湖南来说，携带总数仍是个大数目，不可小觑，产前诊断及干预措施仍不可懈怠。本研究中α地贫及β地贫所占比例无明显差异，说明我地区地贫类型未出现明显改变，今后预防措施依旧以这两类为主。α地中海贫血中标准型最为常见(60.56%)，以--SEA/αα为主。中型10 例(3.98%)，未出现严重型，说明我地区地贫尚可控，这与切实有效的产前筛查工作密不可分。266例β型中常见基因类型为CD41-42，与以往报道一致[8]。

地中海贫血为常染色体单基因隐性遗传病，与性别无关。通过我院多年统计数据分析，父母为携带者，子代地贫携带阳性率大于理论值，若父母均为携带者，且容易出现中型。复合型地贫(曾出现一孕妇连续两次怀孕均为中型α地贫胎儿)，考虑缺陷基因具有遗传规律和遗传倾向，更容易遗传给子代。特别是两个β地贫携带者婚配，可能会出现严重型β地贫患儿，此类患儿只能通过输血维持生命，且容易出现相关并发症，一般寿命不长。因此，通过血液学表型筛查和产前基因诊断，可避免中型和重型地贫患儿的出生，提高出生人口素质。