UHPLC测定不同产地芍药根的有效成分

2019-01-12陕西省西安市陕西服装工程学院

人人健康 2019年5期

（陕西省西安市陕西服装工程学院石钰）

我国芍药种类以白芍药与赤芍药为主，它们被主要种植在四川、浙江、安徽等各省。对不同产地芍药的芍药根有效成分及质量进行评价能够了解芍药根的质量差异，而所采用的试验测定方法主要是UHPLC测定。

一、关于UHPLC测定试验

UHPLC测定试验的全称是UHPLC-DAD技术，它是一种建立在芍药苷、芍药根、芍药内酯苷、没食子酸等8种各大有效成分基础之上的吸收波长检测方法。该试验主要针对产自于我国四川、浙江、安徽等各省的白芍药进行样品试验，试验样品数量高达60份以上，专门测定芍药根中的8种有效成分。另外，还会对不同生长年限的芍药根质量进行测定试验分析，以此为我国白芍药主产地建立更大规模种植基地提供合理有效的科学依据。

二、不同产地白芍药根的UHPLC测定试验应用分析

本文将针对四川、浙江这两大白芍药产地的白芍药根进行UHPLC测定试验，专门对两省白芍药根中的各种有效成分与质量进行对比分析。

（一）试验仪器

在针对白芍药根的UHPLC测定试验应用中主要包括了超高效液相色谱仪、四元梯度泵、自动进样仪、柱温箱、电子天平以及双频数控超声波清洗仪等等。

（二）药品与试剂

UHPLC试验中所采用药品与试剂包括了芍药根、芍药苷、五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷等等。药材方面结合四川、浙江两省的芍药根药材样品首先进行根茎剪除处理，然后快速冲洗除去其中泥沙，最后烘干备用。

（三）试验方法

1色谱条件试验：在试验过程中首先要明确一点色谱条件，其色谱柱应该为100mm x 4.5mm x 2.8μm，另外它的流动相选择了浓度为0.05%的乙腈磷酸溶液。对芍药根进行7分钟左右的梯度洗脱，保持柱温在30℃左右，且洗脱液体流速保持在1.0mL/min左右，如此测量其进样量应该在3μL左右，测量检测波长应该为250nm。此时芍药根中的氧化芍药苷含量应该为258nm（四川）和269nm（浙江），丹皮酚含量分别为274nm和291nm，儿茶素含量分别为280nm和282nm。在普通色谱条件下，两省的芍药根样品中8种待测有效成分的分离度均保持良好。

2溶液制备线性试验：UHPLC试验中还要对样品溶液制备线性范围进行考察，主要是对两省的芍药根样品在量瓶中加入甲醇到制定刻度位置（分别为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 刻度）然后得出的混合对照品溶液浓度（前为四川、后为浙江）分别为122/128、96/98、60/70、80/78、303.60/350.21、51.28/47.29μg/mL。在甲醇定容到刻度位置后摇匀处理，在经过0.24μm的微孔滤膜过滤以后获得上述6个浓度梯度的最终混合对照品溶液。根据对比试验结果表明，两省芍药根中的8种有效成分指标均在合理浓度范围内，且它们的峰面积线性关系表现均相对良好。

3精密度试验：除上述试验外，还对两省的芍药根进行了精密度试验，即取用两省各一份供试品溶液，连续进行6次精密度试验，专门测定两省芍药根中的有效成分峰面积。就以没食子酸为例，四川省芍药根中的没食子酸峰面积达到0.64%，而浙江省芍药根中的没食子酸峰面积达到0.77%，这表明试验用仪器精密度相对良好，准确测量出两省芍药根的峰面积。

4含量测定试验：最后对两省芍药根进行有效成分含量测定试验，其中每一份芍药根的粉末含量取2份，并按照前文所提到的色谱条件测定方法进行测定，再基于回归方程计算出两省芍药根中8种有效成分的供试品溶液含量浓度（μg/mL），另外还有药材粉末含量（mg/g）。最后计算两份平行芍药根样品中的药材粉末含水量。以丹皮酚为例，四川省芍药根的丹皮酚含量在0.0486mg/g，而浙江芍药根的丹皮酚含量为0.0432mg/g，两省（四川、浙江）的芍药根样品有效成分PCA综合得分分别为0.4535和0.0182[1]。

（四）试验结果分析

最后在两省芍药根的质量评价中，专门挑选干燥待测样品进行测量。其中四川产的芍药根中没食子算的葡萄糖含量相对较高，而浙江省产的芍药根中儿茶素含量较高。如果单纯以芍药苷作为基础指标进行对比分析，可能难以评价两省芍药根的正确质量，因此还要结合两省芍药根中的8种有效成分含量进行主成分综合分析，最终得出综合质量评价结果[2]。