短管兔耳草化学成分的研究

张晨辉， 李 敏， 曾金祥， 谢雄雄， 毛 竹， 钟国跃（江西中医药大学中药资源与民族药研究中心，江西南昌330004）

藏药是我国传统医药的重要组成部分，尤其对风湿病、心血管病、胃病等方面显示出其他药物无可替代的作用[1］。短管兔耳草系玄参科兔耳草属植物Lagotis brevituba Maxim.的干燥全草，主要分布于青海、西藏、甘肃等省区，其应用历史悠久，是著名藏药洪连的基原植物[2］，藏医学在临床上用于治疗肾炎、高血压、动脉粥样硬化症、全身发烧、肺病、湿热泻痢、阴道流黄黑色液物、综合性毒性中毒及心热等多种病症[3］，具有极高的药用价值，被 《四部医典》列为藏草药之首。现代研究表明[4-8］短管兔耳草含有黄酮类、苯丙素类、环烯醚萜类、有机酸类等多种成分，具有有降尿酸、抗癌抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗肝损伤等多种生物活性。本实验对短管兔耳草的化学成分研究，进一步明确其化学成分，为短管兔耳草的开发利用提供依据。

1 仪器与材料

薄层色谱硅胶及柱色谱硅胶 （青岛海洋化工厂）；ZF-I型三用紫外分析仪 （上海顾村电光仪器厂）；LC-20AT高效液相 （日本 Shimadzu公司）；SZ-93 A型双重纯水蒸馏器 （上海亚荣生化仪器厂）；SHB-Ⅲ型循环水式真空泵 （郑州长城科工贸有限公司）；旋转蒸发仪 （瑞士步琪公司）；BT25S型电子分析天平 （北京赛多利斯仪器系统有限公司）；Bruker AX-400型、Bruker AX-600型核磁共振波谱仪 （以TMS为内标，瑞士布鲁克公司）；YMC-Pack ODS半制备柱（250 mm×10 mm，5 μm）、 YMC C18柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） （日本YMC公司）；其他试剂均为分析纯 （广东汕头市西陇化工股份有限公司）。

短管兔耳草购于成都荷花池药材市场，经江西中医药大学钟国跃教授鉴定为玄参科兔耳草属植物短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim.的干燥全草。

2 提取与分离

短管兔耳草的干燥全草10 kg，粉碎，渗漉，提取液减压浓缩得浸膏，加水混悬至无明显颗粒，石油醚萃取，水层减压浓缩得浸膏 （385 g），硅胶拌样，经硅胶柱层析 （200～300目，CH2Cl2∶CH3OH＝100∶0～0∶100），得到8个流分 （Ⅰ～Ⅷ）。流分Ⅱ经重结晶，得化合物3（2.27 g），剩余部分经Sephadex LH-20柱层析 （100%CH3OH）得到流分Ⅱ-1～Ⅱ-3，Ⅱ-3得到化合物 2（8.3 mg）；流分Ⅳ经Sephadex LH-20柱层析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1）得到流分Ⅳ-1～Ⅳ-3，Ⅳ-3得到化合物1（7.7 mg）。流分 V经 ODS柱层析 （C18，H2O ∶CH3OH＝100∶0～0∶100）， 得流分 V-1～V-8，V-6经Sephadex LH-20柱层析 （100%CH3OH）得化合物5（43.4 mg）；V-8经 ODS柱层析 （C18，H2O ∶CH3OH＝70∶30～0∶100） 得到流分 V-8-1～V-8-3，V-8-1经Sephadex LH-20柱层析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1） 得化合物4 （10.1 mg）； V-8-3经Sephadex LH-20柱层析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1）得3个流分，V-8-3-3经半制备高效液相（CH3OH∶H2O＝45 ∶55）， 得到化合物 6（61 mg）、 7 （46.9 mg）、 8 （23.6 mg）、 9 （32.9 mg）。 流分Ⅵ经过Sephadex LH-20柱层析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1）得到流分Ⅵ-1～Ⅵ-9，Ⅵ-5经 ODS柱层析 （C18，H2O ∶CH3OH＝75∶25～0∶100） 得到流分Ⅵ5-1～Ⅵ-5-5，Ⅵ-5-4经半制备高效液相 （CH3OH∶H2O＝41 ∶59） 得化合物10（351 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色片状结晶，ESI-MS m／z：167[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 3.89（s， 3H， -OCH3）， 3.93 （s， 3H， -OCH3）， 7.14 （d，J＝8.2 Hz， 1H， H-2）， 7.45 （d， J＝1.9 Hz， 1H，H-5）， 7.55 （dd， 1H， J＝1.9， 8.2 Hz， H-6）， 9.81（s， 1H， H-7）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ：131.5 （C-1）， 110.7 （C-2）， 151.1 （C-3）， 156.3（C-4）， 112.1 （C-5）， 127.8 （C-6）， 192.9 （C-7），56.4（C-8）， 56.6 （C-9）。 以上数据与文献 [9］一致，故鉴定为3，4-二甲氧基苯甲醛。

化合物2：白色晶体，ESI-MS m／z：210[M+H］+。1H-NMR （CD3OD，600 MHz） δ：3.86 （s，3H，-OCH3）， 3.87 （s， 3H， -OCH3）， 6.36 （d， J＝15.9 Hz， 1H， H-7）， 6.97 （d， J＝ 8.3 Hz， 2H， H-5），7.16 （dd， J＝ 2.0， 8.3 Hz， 1H， H-6）， 7.20 （d，J＝1.9 Hz， 1H， H-2）， 7.61 （d， J＝15.9 Hz， 1H，H-8），9.81 （s， 1H， COOH）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz） δ： 128.9 （C-1）， 116.9 （C-2）， 146.4（C-3）， 111.5 （C-4）， 152.7 （C-5）， 150.8 （C-6），112.6 （C-7）， 123.9 （C-8）， 170.8 （C-9）， 56.4（C-10），56.5（C-11）。 以上数据与文献 [10]一致，故鉴定为3，4-二甲氧基苯丙酸。

化合物3：白色固体，ESI-MS m／z：209[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 7.58 （d， J＝15.9 Hz， 1H）， 7.17 （s， 1H）， 7.12 （d， J＝ 8.2 Hz，1H），6.94 （d， J＝8.2 Hz，1H），6.32 （d， J＝16.0 Hz， 1H）.3.92 （s， 3H）， 3.93 （s， 3H）；13CNMR （CD3OD， 151 MHz） δ： 56.4 （-OMe）， 56.5（-OMe）， 111.5 （C-4）， 112.6 （C-7）， 116.9 （C-2）， 123.9 （C-8）， 129.0 （C-1）， 146.5 （C-3），150.8 （C-6），152.8 （C-5），170.8 （C-9）。 以上数据与文献 [11］一致，故鉴定为阿魏酸甲酯。

化合物4：无色油状液体，ESI-MS m／z：279[M+H］+。1H-NMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 7.74（dd， J＝6.0，2.7 Hz， 2H， H-3，6），7.55 （dd， J＝6.0， 2.7 Hz， 2H， 2H， H-4， 5）， 4.33 （t， J＝6.0 Hz， 4H， H-1′， 1″）， 1.74 （ m， 4H， H-2′， 2″），1.45 （m， 4H， H-3′， 3″）， 0.95 （t， J＝7.2 Hz， 6H，H-4′， 4″）；13C-NMR （ CDCl3， 151 MHz） δ： 13.9（C-4′， 4″）， 19.3 （C-3′， 3″）， 30.7 （C-2′， 2″），65.7 （C-1′， 1″）， 129.0 （C-4， 5）， 131.1 （C-3，6），132.5（C-1，2），167.9（-C＝O）。 以上数据与文献 [12］一致，故鉴定为邻苯二甲酸二丁酯。

化合物5：黄色针状结晶，ESI-MS m／z：287[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 12.61（s， 1H， H-5）， 7.38 （m， 2H， H-2′， H-6′）， 6.91（d， J＝ 8.4 Hz， 1H， H-5′）， 6.54 （s， 1H， H-3），6.44 （d， J＝8.4 Hz， 1H， H-8）， 6.21 （d， J＝1.5 Hz， 1H， H-6）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ：66.3 （C-2）， 103.8 （C-3）， 183.8 （C-4）， 163.1（C-5）， 100.2 （C-6）， 166.3 （C-7）， 95.1 （C-8），159.4 （C-9）， 105.2 （C-10）， 120.3 （C-1′）， 114.2（C-2′）， 147.0 （C-3′）， 151.0 （C-4′）， 116.8 （C-5′）， 123.6 （C-6′）。 以上数据与文献 [13]一致，故鉴定为木犀草素。

化合物 6：灰白色针状结晶，ESI-MS m／z：463 [M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ：12.97 （s， 1H，HO-5），6.94 （s， 1H， H-3），6.45（J＝2.0 Hz，1H， H-6），6.87 （J＝2.0 Hz， 1H， H-8）， 6.98 （d， J＝ 2.0 Hz， 1H， H-2′）， 3.89 （s，3H， CH3O-3′）， 7.59 （dd， J＝ 9.0， 2.0 Hz， 1H，H-6′）， 5.07 （d， J＝8.0 Hz， 1H， H-1″）， 3.26 （dd，J＝ 9.0， 8.0 Hz， 1H， H-2″）， 3.45 （dd， J＝ 9.0，8.5 Hz， 1H， H-4″）， 3.17 （m， 1H， H-5″）， 3.46（dd， J＝12.5， 2.5 Hz， 1H， H-6″）， 3.71 （dd， J＝12.5， 4.5 Hz， 1H， H-6″）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ： 164.2 （C-2）， 103.4 （C-3）， 182.05 （C-4），161.1 （C-5），99.5 （C-6），163.0 （C-7），95.0（C-8）， 156.9 （C-9）， 105.3 （C-10）， 121.3 （C-1′）， 110.3 （C-2′）， 151.0 （C-3′）， 148.1 （C-4′），115.8 （C-5′）， 120.5 （C-6′）， 100.0 （C-1″）， 73.1（C-2″）， 77.3 （C-3″）， 69.6 （C-4″）， 76.5 （C-5″），60.6 （C-6″）， 56.0 （-OCH3）。 以上数据与文献[14］一致，故鉴定为柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MS m／z： 463 [M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 12.94 （s， 1H， 5-OH）， 7.58 （d， J＝8.6 Hz， 1H， H-6′）， 7.46 （s， 1H， H-2′）， 7.11 （d， J＝8.6 Hz， 1H， H-5′）， 6.84 （s， 1H， H-3）， 6.82（brd，J＝1.7 Hz， 1H， H-8）， 6.46 （brd， J＝1.7 Hz， 1H， H-6）， 5.09 （d， J＝7.2 Hz， 1H， H-1″），3.87 （s， 3H， -OCH3）；13C-NMR （DMSO， 150 MHz） δ： 163.0 （C-2）， 103.8 （C-3）， 182.0 （C-4）， 161.1 （C-5），99.6 （C-6），164.1 （C-7），94.8（C-8）， 157.0 （C-9）， 105.4 （C-10）， 122.9 （C-1′）， 113.2 （C-2′）， 146.8 （C-3′）， 151.3 （C-4′），112.2 （C-5′）， 118.9 （C-6′）， 55.8 （-OCH3）， 99.9（C-1″）， 73.1 （C-2″）， 76.4 （C-3″）， 69.5 （C-4″），77.2 （C-5″）， 60.6 （C-6″）， 56.0 （-OCH3）。 以上数据与文献 [15］一致，故鉴定为香叶木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 8：淡黄色针晶，ESI-MS m／z：295[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 7.65（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7），7.53 （dd， J＝2.0，8.0 Hz，2H，H-2， 6），6.94（dd，J＝8.0，2.0 Hz，2H，H-3， 5）， 6.38 （d， J＝ 16.0 Hz， 1H， H-8）， 5.1（m， 1H， H-1′）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ：128.1 （C-1）， 131.1 （C-2， 6）， 115.4 （C-3， 5），163.2 （C-4）， 146.3 （C-7）， 115.9 （C-8）， 169.0（C-9）， 94.0 （C-1′）， 72.0 （C-2′）， 71.7 （C-3′），75.4 （C-4′）， 70.8 （C-5′）， 64.9 （C-6′）。 以上数据与文献 [16]一致，故鉴定为4-p-香豆酸-O-α-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 9： 淡黄色针晶， ESI-MS m／z： 295[M+H］+。1H-NMR （CD3OD，600 MHz） δ：7.67 （d，J＝15.9 Hz， 1H， H-7）， 7.54 （dd， J＝ 2.0， 8.0 Hz， 2H， H-2， 6）， 6.97 （dd， J＝ 8.0， 2.0 Hz，2H， H-3.5）， 6.40 （d， J＝ 16.0 Hz， 1H， H-8），4.3～4.6 （m， 4H）， 4.4 （d， J＝8.0 Hz， 1H），6.40 （dd， J＝5.9， 1.8 Hz， 1H）， 3.62 （dd， J＝9.6，9.2 Hz， 1H）， 3.3～3.4 （m， 1H）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δ： 128.1 （C-1）， 131.1 （C-2，6）， 115.4 （C-3， 5）， 163.2 （C-4）， 146.3 （C-7），115.9 （C-8）， 169.0 （C-9）， 98.2 （C-1′）， 73.7（C-2′）， 77.9 （C-3′）， 76.2 （C-4′）， 74.7 （C-5′），65.0（C-6′）。以上数据与文献 [16]一致，故鉴定为4-p-香豆酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 10：白色无定型粉末，ESI-MS m／z：699 [M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ：7.72 （d，J＝15.9 Hz，1H， H-7″），7.22 （d，J＝2.0 Hz， 1H， H-2″）， 7.19 （dd， J＝ 8.4， 2.0 Hz， 1H，H-6″）， 6.98 （d， J＝8.4 Hz， 1H， H-5″）， 6.50 （d，J＝15.9 Hz， 1H）， 6.40 （dd， J＝ 5.9， 1.8 Hz，1H， H-3）， 5.11 （d， J＝ 9.6 Hz， 1H， H-1），4.20～4.14 （m，2H），4.06 （d， J＝8.2 Hz，1H，H-6）， 3.84 （d， J＝ 13.1 Hz， 1H， H-10）， 2.59（dd， J＝ 9.8， 7.5 Hz， 1H， H-9）， 2.48 （ddt， J＝12.3， 6.4， 1.8 Hz， 1H， H-5）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz） δ：95.2 （C-1）， 142.2 （C-3）， 103.6 （C-4）， 37.2 （C-5）， 83.7 （C-6）， 59.3 （C-7）， 66.6（C-8）， 43.2 （C-9）， 61.4 （C-10）， 99.7 （C-1′），74.8 （C-2′）， 77.6 （C-3′）， 71.7 （C-4′）， 78.5 （C-5′）， 62.9 （C-6′）， 100.2 （ C-1″）， 70.3 （C-2″），75.3 （C-3″）， 71.3 （C-4″）， 70.3 （C-5″）， 18.0（C-6″）， 162.6 （α）， 116.6 （β）， 146.6 （γ），128.8 （C-1）， 111.4 （C-2）， 152.7 （C-3）， 150.6（C-4），112.6 （C-5）， 124.0 （C-6）。 以上数据与文献 [17]一致，故鉴定为6-O-[α-L-（3-3，4-二甲氧基肉桂酰）-吡喃鼠李糖基］-梓醇。

4 结论

本文从短管兔耳草中分离得到10个化合物，其中黄酮类3个，环烯醚萜苷类1个，苯丙素类6个，其中化合物1～4、8～10为首次从该植物中得到，化合物2～4、8～10为首次从本属得到。现代药理研究证明，黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗自由基、抗氧化等作用。苯丙素类化合物具有抗氧化作用，环烯醚萜类化合物具有抗肿瘤、保肝、抗氧化作用。与短管兔耳草药材的生物活性[4-8］对照分析，可知本实验所得黄酮、环烯醚萜可能为其抗肿瘤活性的物质基础，所得黄酮、环烯醚萜、苯丙素为抗氧化活性的有效成分，所得环烯醚萜为保肝活性的物质基础。