苞叶雪莲化学成分的研究

芦永昌，辛青霞，李 欣，任梅娟，赵 英，李海丽

（1.青海民族大学药学院，青海 西宁 810007；2.青海省青藏高原植物资源化学研究重点实验室，青海 西宁 810007；3.青海省药物分析重点实验室，青海 西宁 810007）

苞叶雪莲Saussurea obvallata（DC）Edgew.为风毛菊属雪莲亚属植物，藏药名为煞杜果古。生长在海拔 4 500～5 800 m 高山草甸。产于青海、西藏、四川西部、云南西北部等地［1］。其性味苦、寒。具有清热解毒、祛风除湿、通经活血之功。主治癫痛、中风、癫狂、麻风等［2］。但目前对其化学成分方面研究较少，为了进一步确定其活性成分，对苞叶雪莲化学成分进行研究。从苞叶雪莲乙醇提取物中分离鉴定了10 个化合物，所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

高效液相色谱仪、高效液相制备色谱仪（美国Agilent 公司）；CombiFlash 中压快速制备色谱仪（美国 Teledyne Isco 公司）；UV-2401 型紫外可见分光光度计、IR Prestige-21 型傅里叶（日本岛津公司）；Avance Ⅱ 400 Bruker Biospin 核磁共振波谱仪（德国 Bruker 公司）；Bruker Avance 500 MHz 型核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；薄层层析、柱色谱硅胶G（青岛海洋化工厂）；葡聚糖凝胶LH-20（瑞士 Pharmacia 公司）；大孔吸附树脂 AB-8（南开大学化工厂）。

实验用藏药苞叶雪莲于2014年8月采自青海省海南州贵德县拉脊山，由青海民族大学药学院毛继祖教授鉴定为正品。

2 提取与分离

将苞叶雪莲药材3.5 kg 粉碎，浸泡在一定体积的95%乙醇中24 h，用纱布过滤，取上清液旋蒸成浸膏后；重复3 次，将3 次所得的浸膏合并，得到浸膏①。继续将95%乙醇浸泡过的滤渣放入65%乙醇浸泡24 h，用纱布过滤，取上清液旋蒸成浸膏后；重复3 次，将3 次所得的浸膏合并，得到浸膏②。继续将65%乙醇浸泡过的滤渣放入去离子水中浸泡24 h，用纱布过滤，取上清液旋蒸成浸膏后；重复 3 次，将 3 次所得的浸膏合并，得到浸膏③。将①②③合并得到总浸膏，用适量的水溶解。置于2 000 mL 的分液漏斗中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水相萃取物，并分别浓缩，得总浸膏700 g。

总浸膏加适量水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收各溶剂，分别得到石油醚部位 20 g、乙酸乙酯部位 24 g、正丁醇部位 39 g、水部位543 g。石油醚部位经正相硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯（100 ∶1、50 ∶1、20 ∶1、10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1）梯度洗脱，薄层色谱检测，再经葡聚糖凝胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯（20 ∶1）洗脱，石油醚重结晶，得化合物1；再经正相硅胶柱，葡聚糖凝胶柱纯化，石油醚-乙酸乙酯（10 ∶1）洗脱得化合物2；乙酸乙酯部位经正相硅胶柱色谱，氯仿 ∶甲醇（100 ∶1、50 ∶1、20 ∶1、10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1、纯甲醇）梯度洗脱，经正相硅胶柱，氯仿 ∶甲醇（10 ∶1）洗脱，制备液相色谱，得化合物 3～4；正丁醇相经 MCI 反相色谱柱，甲醇 ∶水梯度洗脱，再经全制备液相色谱，得化合物5～6；将10%进行全制备液相色谱，得化合物7～9；将50%冷却结晶，得化合物10。

3 结构鉴定

化合物 1：无色针状结晶，mp 136～137 ℃。1HNMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，brd），3.52（1H，m），1.01（3H，s），0.97（3H，d，J= 6.5 Hz），0.86（3H，d，J= 6.0 Hz），0.83（3H，d，J= 6.5 Hz），0.82（3H，d，J= 6.5 Hz），0.72（3H，s）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：37.8（C-1），32.3（C-2），71.3（C-3），43.4（C-4），142.（C-5），121.2（C-6），32.6（C-7），32.3（C-8），50.5（C-9），36.9（C-10），21.3（C-11），40.0（C-12），42.5（C-13），56.8（C-14），24.5（C-15），28.6（C-16），56.3（C-17），12.2（C-18），20.0（C-19），36.4（C-20），19.7（C-21），34.2（C-22），26.4（C-23），46.0（C-24），29.4（C-25），18.9（C-26），19.2（C-27），23.3（C-28），12.2（C-29）。以上数据与文献［3］基本一致，由此判断该化合物为甾醇或萜类化合物。与β-谷甾醇对照品共薄层Rf 值及显色行为一致，与对照品混合后熔点不下降，故鉴定为β-谷甾醇。

化合物 2：白色颗粒状（丙酮结晶），mp 67.5～69 ℃。溴甲酚绿显黄色。EI-MSm／z：368［M］＋。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.88（3H，t，J= 6.3 Hz，-CH3），1.20～1.40（40H，m，-CH2），2.25（2H，t，J=7.9 Hz，-CH2-COOH）；13C-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：180.0（C-1），34.3（C-2），25.0（C-3），23.0（C-23），14.4（C-24）。以上数据与文献［4］基本一致，故鉴定为二十四烷酸。

化合物 3：黄色粉末，mp 303～304 ℃，365 nm紫外光下黄色荧光，盐酸-镁粉反应呈阳性，FeCl3反应 呈 阳 性。ESI-MSm／z：301.0［M-H］-。1HNMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.48（1H，s，5-OH），10.76（1H，s，7-OH），9.57（1H，d，J= 2.2 Hz，H-2′），7.53（1H，dd，J= 2.2 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J= 8.5 Hz，H-5′），6.40（1H，d，J= 2.0 Hz，H-8），6.18（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：93.3（C-6′），98.2（C-8），115.0（C-2′），l15.6（C-5′），103.0（C-10 ），119.9（C-6′），121.9（C-1′），135.7（C-3），145.0（C-3′），146.8（C-2），147.7（C-4′），156.1（C-5），160.7（C-9），163.8（C-7），175.8（C-4）。以上数据与文献［5］基本一致，故鉴定为槲皮素。

化合物 4：黄色小针状晶体；mp 185～188 ℃。盐酸-镁粉反应阳性，Molish 反应阳性。由其1HNMR 和13C - NMR 可知为黄酮黄酮类化合物。1HNMR（DMSO-d6）δ：6.20（1H，d，J= 1.5 Hz，H-6），6.39（1H，d，J= 1.5 Hz，H-8），7.53（1H，d，J= 2.0 Hz，H-2′），6.84（1H，d，J=8.0 Hz，H - 5′），7.54（1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-6′），5.33（1H，d，J= 8.0 Hz，H-1″），4.38（1H，brs，H-1″），1.07（3H，d，J= 6.0，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6）δ：156.5（C-2），133.3（C-3），177.4（C-4），161.3（C-5），98.7（C-6），164.1（C-7），93.7（C-8），156.7（C-9），104.0（C-10），121.2（C-1′），115.3（C-2′），144.8（C-3′），148.5（C-4′），116.3（C-5′），121.7（C-6′），101.2（C-1″），74.1（C-2″），76.5（C-3″），70.4（C-4″），75.9（C-5″），67.1（C-6″），100.8（C-1 ‴），70.0（C-2‴），70.6（C-3 ‴），71.9（C-4‴），68.3（C-5‴），17.8（C -6 ‴）。以上数据与文献［6］基本一致，故鉴定为芦丁。

化合物 5：半水合物为针状结晶（水），mp 205～209 ℃，ESI-MSm／z：100～1 900［MH］-。1H-NMR 7.51（1 H，d，J= 15 Hz），6.20（1H，d，J= 15 Hz），显示为反式烯烃的质子；7.11（1 H，d，J=2.1 Hz），6.96（1 H，dd，J=2.1，8.2 Hz），6.79（1 H，d，J=8.2 Hz），为苯环三取代的 ABX 体系；5.21（1H，m），4.04（1H，m），3.49（1H，m），2.11～1.59（2H，m）；13CNMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：125.5，115.7，148.3，144.9，114.7，121.3 分别为苯环上 1～6位上碳的化学位移；145.5，114.2 分别为 7 和 8位上烯基碳的化学位移；165.6 为9 位上酯基碳的化学位移；73.4，37.1，68.0，70.8，70.3，36.2分别为六元环上 1′～6′位上碳的化学位移；174.8为7′位上羧基碳的化学位移，以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为绿原酸。

化合物 6：黄色粉末（甲醇），1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）：12.96（1H，s，5-OH），7.40（1H，dd，J= 8.0，2.0 Hz，H-5′），7.38（1H，d，J=2.0 Hz，H-3′），6.86（1H，d，J=8.0 Hz，H-6′），6.64（1H，s，H-3），6.48（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.9 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6）δ：181.8（C-4），164.2（C-7），164.0（C-2），161.5（C-5），157.4（C-9），149.8（C-4′），145.8（C-3′），121.5（C-1′），119.1（C-6′），116.1（C-5′），113.4（C-2′），103.8（C-10），102.9（C-3），98.9（C-6），93.9（C-8）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为木犀草素。

化合物 7：黄色针晶（甲醇），mp 345～347 ℃。盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish 反应阴性。ESI-MSm／z：270［M］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）：6.82（1H，s，H-3），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.45（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.92（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.91（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），12.97（1H，s，5-OH）；13C-NMR（DMSO-d6）δ：164.5（C-2 ），102.9（C-3 ），181.9（C-4），157.8（C-5），98.9（C-6），164.0（C-7），94.3（C-8），161.6（C-9），103.9（C-10），121.2（C-1′），128.8（C-2′），116.1（C-3′），161.3（C-4′），116.1（C-5′），128.8（C-6′）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为洋芹素。

化合物 8：黄色粉末（甲醇结晶）mp 193～195 ℃，365 nm 紫外光下显黄色荧光，盐酸-镁粉反应呈阳性，FeCl3反应呈阳性，Molish 反应阳性。ESI-MSm／z：447.0［M-H］-。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.65（1H，s，5-OH ），10.85（1H，s，7-OH），9.69（1H，s，3′-OH），9.32（1H，s，4′-OH），7.30（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′），7.25（1H，dd，J= 2.1，8.1 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.39（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），5.25（1H，d，J= 1.5 Hz，H-1″糖端基质子），3.11～3.52（5H，m，H-2″～6″糖环上质子），0.82（3H，d，J=5.7 Hz，C-CH3）；13C-NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：156.6C-2），133.7（C-3），177.6（C-4），161.4（C-5），98.9（C-6），164.3（C-7），93.7（C-8），156.5（C-9），104.0（C-10），121.2（C-1′），116.1（C-2′），145.0（C-3′），148.6（C-4′），116.1（C-5′），122.1（C-6′），103.0（C-1″），71.3（C-2″），73.7（C-3″），68.2（C-4″），73.2（C-5″），65.3（C-6″），100.2 C-1‴），70.8（C-2‴），70.6（C-3 ‴），72.0（C-4‴），68.4（C-5 ‴），18.1（C-6‴）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖。

化合物 9：黄色粉末（甲醇），mp 266～267 ℃。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.72（1H，s，5-OH），7.58（1H，d，J= 2.1 Hz，H-2′），7.57（1H，dd，J= 8.0，2.1 Hz，H-6′），6.84（1H，d，J= 8.0 Hz，H-5′），6.51（1H，s，H-8），5.46（1H，d，J= 7.4 Hz，Glu-H-1），3.75（3H，s，6-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：156.3（C-2），133.0（C-3），177.7（C-4），152.3（C-5），131.3（C-6），157.5（C-7），93.8（C-8），151.5（C-9），104.3（C-10），121.6（C-1），115.2（C-2），144.8（C-3），148.4（C-4），I16.2（C-5），121.2（C-6），100.9（C-1″），74.1（C-2″），76.5（C-3″），69.9（C-4″），77.5（C-5″），61.0（C-6″），60.0（6-OCH3）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为万寿菊素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 10：无色针状晶体（甲醇）mp 180～182 ℃，ESI-MSm／z：395［M ＋ Na］＋；1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.75（2H，brs，H-3，5），6.55（1H，d，J= 16.0 Hz，，H-7），6.33（1H，dt，J= 16.0，5.5 Hz，H-8），4.87（1H，d，J= 7.0 Hz，H-1′），4.22（2H，dd，J= 5.5，1.5 Hz，H-9），3.86（6H，s，2，6-OCH3），3.78（1H，dd，J=12.0，2.5 Hz，H-6′a），3.67（1H，dd，J=12.0，5.5 Hz，H-6′b），3.21～3.48（4H，m，H-2′-5′）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：135.4（C-1），154.4（C-2，6），105.6（C-3，5），131.4（C-4），136.1（C-7），130.2（C-8），63.7（C-9），105.5（C-1′），75.9（C-2′），78.0（C-3′），71.5（C-4′），78.5（C-5′），62.7（C-6′），57.2（-OCH3×2）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为紫丁香苷。

4 讨论

本实验从苞叶雪莲乙醇提取物中分离得到10个化合物，而且均是首次从苞叶雪莲中分离得到，以期拓展对其物质基础的认识，为合理有效的开发利用该资源提供科学依据。

苞叶雪莲性味苦、寒，这与其所含化合物的生物活性有一定关系，其中化合物10 的作用机制可能是它不仅能够调节人体免疫系统，而且能够抑制细胞因子TNF-α 的产生和细胞毒素T cell 增殖。一旦体内细胞因子失去了平衡就会产生大量炎症因子，且这些炎症因子与风湿性关节炎有直接的联系。还报道紫丁香苷可能是通过进入人体后水解成芥子醇发挥药效作用，推测其可能是苞叶雪莲表现出苦寒药性的主要成分之一［13］。此外，同科植物天山雪莲的化学成分研究报道其含有芦丁、槲皮素、紫丁香苷、芹菜素等化合物［14］。苞叶雪莲中绿原酸和芦丁具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用［15］，但这些活性是否与苞叶雪莲抗风湿及寒属性相关仍需进一步探讨。