心神宁片特征图谱的初步研究

宋佳　侯超　段树卿　李云霞

[摘要]目的 建立心神宁片的高效液相色谱法（HPLC）特征图谱。方法 采用HPLC法建立心神宁片的特征图谱，采用Perkin Elmer C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相：以乙腈（A）～0.2%冰乙酸（B）为流动相进行梯度洗脱;检测波长260 nm;柱温25℃;流速1.0 ml/min;进样体积10 μl。结果 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行分析，共确定了8个共有峰，精密度、重复性和稳定性实验中共有峰相对保留时间RSD值均<0.62%，相对峰面积RSD值均<2.86%。初步建立了心神宁片的HPLC特征图谱，并进行了相似度分析。结论 所建立的方法简便、有效、重现性良好，建立的对照特征图谱对心神宁片的整体质量提出了更高的要求，为从整体上控制心神宁片的质量提供了科学依据。

[关键词]心神宁片;特征图谱;高效液相;初步研究

[中图分类号] R286     [文献标识码] A     [文章编号] 1674-4721（2019）11（c）-0034-03

Preliminary study on the characteristic atlas of Xinshenning Tablets

SONG Jia1，2   HOU Chao1*   DUAN Shu-qing1，2   LI Yun-xia1，2

1. Jingfukang Pharmaceutical Group Co.， Ltd.， Hebei Province， Chengde   067000， China; 2. Hebei New Engineering Technology Research Center of Traditional Chinese Medicine， Hebei Province， Chengde   067000， China

[Abstract] Objective To analyze the specific chromatograms of Xinshenning Tablets by high performance liquid chromatography （HPLC）. Methods Perkin Elmer C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） column was used for high performance liquid HPLC with a gradient elution of acetonitrile-0.2% glacial acetic acid in mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min. The wavelength was 260 nm， the column temperature was 25°C， and the injection volume was 10 μl. Results All results of the experiment were analyzed with Chromatographic Fingerprint Evaluation System， 8 common peaks were identified; the RSD of the relative retention time in precision， stability and repea-tability experiments were all less than 0.62%， and the RSD of relative peak area was less than 2.86%. The standard specific chromatogram was established， and similarity analysis was carried out. Conclusion The established HPLC method of Xinshenning Tablets is simple， effective and reproducible， the establishment of the control characteristic map will put forward higher requirements for product quality and provides a basis for the overall control of the quality of compound Xinshenning Tablets.

[Key words] Xinshenning Tablets; Specific chromatograms; High performance liquid chromatography; Preliminary study

心神寧片由酸枣仁、远志、茯苓、栀子、神曲、甘草等六味中药组成，收载于国家药品标准中[1]。现行标准中含量测定项下只有栀子苷1项，其他相关研究，多是对一种或几种成分进行的定性或定量研究，用于中药制剂的质量评价已无法满足实际需求[2-5]，难以从整体上评价心神宁片的质量。而中药指纹（特征）图谱技术作为多指标综合评价中药材或中成药的有效手段，可较为全面的反映药品化学成分的变化情况和评价中药制剂均一性及稳定性，更具科学性[6-9]。综合中药特征图谱的特点和心神宁片质量研究的需求，本实验参考相关文献[10-17]，采用高效液相色谱法（HPLC），建立了心神宁片的特征图谱，同时对10批样品的相似度进行评价，并初步确立了共有峰的归属，以期为心神宁片的质量研究提供科学依据。

1仪器与试药

1.1主要仪器

高效液相色谱仪（Agilent1260），紫外检测器：Perkin Elmer C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱;KQ-500DE医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒AE 240）。

1.2试药

乙腈（美国Fisher）为色谱纯;冰乙酸、乙醇（天津佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司）分析纯，纯化水（三级反渗法）。心神宁片（批号392170、530011、530079， 530083、530269、530270、530271、530274、530275、530276）、阴性样品及阴性样品制备所用原料由颈复康药业集团有限公司提供（颈复康药业集团有限公司中药鉴别师鉴定为真品）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Perkin Elmer C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相为A（乙腈）～B（0.2%冰乙酸水），梯度洗脱0～12 min，17%～19%A;12～22 min，19%～30%A;22～25 min，30%～35%A;25～35 min，35%～55%A;35～38 min，55%～60%A;38～43 min，60%A;43～50 min，60%～65%A;50～52 min，65%～17%A。检测波长为260 nm;柱温为25℃;流速为1.0 ml/min;进样量为10 μl。

2.2供试品溶液的制备

取本品，去除包衣研细，取粉末约0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 ml，称定质量，超声提取10 min，放至室温，称重补重，摇匀，过滤，取续滤液即得。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验  取同一批次心神宁片（批号392170），按照“2.2”项制备供试品溶液，按照“2.1”项条件连续重复进样6次，计算共有峰的相对保留时间及相对峰面积，其相对保留时间RSD值均<0.09%，相对峰面积RSD值均<2.86%。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对结果进行计算，其相似度均>0.99，表明仪器精密度良好，符合特征图谱的检测要求。

2.3.2重复性试验  取同一批次心神宁片（批号392170），按照“2.2”制备供试品溶液6份，按照“2.1”项条件测定，共有峰相对保留时间RSD值均<0.62%，相对峰面积RSD值均<2.00%，其相似度均>0.99，表明该处理方法重现性良好。

2.3.3稳定性试验  取同一批次心神宁片（批号392170），按照“2.2”项制备供试品溶液，按照“2.1”项条件测定，分别在0，2，4，6，8，10，12 h进样10 μl，进行特征图谱测定，相似度均>0.99，共有峰的相对保留时间RSD值均<0.15%，相对峰面积RSD值均<2.16%，表明供试品溶液在12 h内保持稳定。

2.4心神宁片标准特征图谱的建立

2.4.1特征图谱的建立  取上述10批心神宁片，按照2.2方法分别制备供试品溶液，并按照“2.1”条件进行测定，记录色谱图，通过对以10个不同批号心神宁片的紫外吸收光谱与保留时间方法，确认共有特征峰包括参考峰（1号峰）在内的8个共有色谱峰。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行评定，色谱峰进行匹配，时间窗宽度设为0.3 min，采用中位数法生成对照特征图谱，见图1（封四）、图2。

2.4.2样品相似度评价  采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对上述10批样品进行相似度评价。将各批次色谱图导入软件，计算色谱图的相似度（表1）。

由检测结果可知，10批样品的相似度达到0.972以上，說明生产工艺条件较为稳定，选材提取过程较为严格

3讨论

3.1色谱条件的优选

流动相的选择：比较了乙腈～水、甲醇～水、乙腈～0.1%冰乙酸、乙腈～0.2%冰乙酸、乙腈～0.5%冰乙酸、乙腈～1%冰乙酸等作为流动相时，结果发现乙腈～0.2%冰乙酸作为流动相，色谱峰数目较多，基线较平，干扰较少且分离度良好。

检测波长的选择：采用DAD检测器，在200～400 nm进行全波长扫描，发现在260 nm处，色谱峰较多，大部分色谱峰得到较好地分离且特征峰型较好，确定260 nm作为检测波长。

3.2样品制备条件的优选

考察了提取溶剂甲醇（100%、70%、50%）、乙醇（100%、70%、50%），考察了加入溶剂量10、25、50 ml，考察了超声5、10、25、35 min，最终确定条件为：精密加入70%甲醇25 ml，超声10 min为宜。

3.3共有峰的初步归属

按照处方比例制备各阴性样品、各单味药材溶液进行检测，与对照特征图谱对比，初步发现：峰1为栀子药材的归属峰，峰2、3为远志药材的归属峰，峰4为酸枣仁药材的归属峰，峰5、6、7、8为甘草药材的归属峰。

综上所述，本研究初步建立了心神宁片的HPLC特征图谱，所建立的方法简便、有效、重现性良好，建立的对照特征图谱为从整体上控制心神宁片的质量提供了科学依据。10批样品相似度达到0.972以上，反映了不同批次心神宁片的共性及差异，说明其生产工艺条件较为稳定，选材提取过程较为严格。但考虑到投料药材的批次等问题，还待收集更多批次和不同厂家的样品，进一步深入探究。

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（收稿日期2019-05-22  本文编辑：崔建中）