人乳头瘤病毒和解脲脲原体、沙眼衣原体、淋病奈瑟菌的感染现状分析

张 睿，周艳丽，2，窦亚玲，孔令君，叶阿里，吴 洁，徐英春

1中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科，北京 100730 2河北省唐山市玉田县医院检验科，河北玉田 064100

性传播疾病是一类以性接触为主要传播方式的泌尿生殖道感染性疾病，性传播疾病病原体主要有以下几种：人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)、解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，UU)、沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae，NG)、单纯疱疹病毒Ⅱ型、部分真菌等。其中CT、NG、UU是3种最为常见的性传播疾病的病原体。CT、UU所致炎症主要是非淋菌性尿道炎、阴道炎，病原体合并感染时容易引起持续感染[1]，NG所致炎症主要是淋球菌性尿道炎、阴道炎。HPV是一种嗜上皮性DNA病毒，自然界中广泛存在，人是其唯一宿主。在免疫缺陷状态时更易感染，HPV持续感染是宫颈癌发生的最危险因素[2]，而与其他病原体协同作用，不断感染女性生殖道，使得宫颈癌变或癌前病变的概率不断增加[3]。本研究主要探讨HPV感染时，CT、NG、UU的感染情况以及它们之间是否存在一定的相关性。

资料和方法

资料收集2014年1月至2017年12月就诊于北京协和医院皮肤性病科、妇产科、泌尿外科、男科门诊等多个临床科室患者的样本；排除重复检测样本标准：以第1次检测结果为准，再次送检结果与第1次不同按再次感染计算，纳入统计中。如第1次结果为阳性，之后检测为阴性，按第1次计算。如第3、4次结果与之前任何一次相同，也剔除；如为阴性，剔除检出率统计，计入好转中；如检测几次均为阴性，只记1次阴性。所有检测结果按以上标准剔除后，男性207例、女性663例，共计870例，年龄14～66岁，平均(35.06±8.87)岁。

样本采集

宫颈拭子：采用专用细胞刷取器沿宫颈口移行带附近旋转刷取1～2周，将刷取的宫颈脱落细胞置于细胞保存液中，置于4℃冰箱待检。

尿道拭子：用专用的尿道拭子于尿道口内旋转1～2周，将拭子置于无菌容器中，加入2 ml生理盐水，置于4℃冰箱待检。

尿液：用专用无菌容器收集憋足2 h以上前段尿5～10 ml，吸取2 ml尿液置于尿液保存液中，置于4℃冰箱待检。

检测方法用高危型(high risk，HR)HPV分型 (16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)和低危型(low risk，LR)(6、11)核酸测定试剂盒(上海之江生物科技股份有限公司)和全自动核酸提取仪对样本中的HPV-DNA进行核酸提取，采用SLAN-96P荧光定量PCR仪(上海宏石医疗科技有限公司)和SLAN全自动医用PCR分析系统8.3.1进行数据分析；应用沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和解脲脲原体核酸检测试剂盒(上海仁度生物科技有限公司)和全自动核酸提取仪对样本中的CT-RNA、NG-RNA、UU-RNA分别进行核酸提取，采用Roche LightCycler 480Ⅱ荧光定量PCR仪进行监测和数据分析。

统计学处理采用Excel 2007及SPSS 17.0统计软件分析，比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

阳性检出率870份样本阳性检出率最高为UU[53.68%(467/870)]，其次为HPV[32.41%(282/870)]和CT[7.24%(63/870)]，最低为NG[2.18%(19/870)]。

不同科室间HPV-DNA、UU-RNA、CT-RNA和NG-RNA阳性检出情况妇科门诊UU-RNA检出率最高，为60.61%，HPV-DNA检出率为34.57%，以 HR-HPV-DNA为主检出率为31.72%，CT-RNA检出率为5.90%，NG-RNA检出率为2.84%。皮肤性病门诊HPV-DNA检出率为30.69%，UU-RNA检出率最高，为46.28%，CT-RNA检出率为9.16%，NG-RNA检出率为1.73%。男科门诊和泌尿科门诊标本量较少，UU-RNA检出率最高，为50.00%和33.33%。

不同性别间HPV-DNA、CT-RNA、NG-RNA、UU-RNA阳性检出情况HR-HPV-DNA和UU-RNA女性总检出率明显高于男性，差异有统计学意义(P<0.001)。CT-RNA和 NG-RNA检出率在不同性别间差异无统计学意义(表1)。

HR-HPV组中UU-RNA、CT-RNA、NG-RNA阳性检出情况HR-HPV阳性组男性和女性CT-RNA检出率均高于阴性组，差异有统计学意义(P<0.001，P=0.024)；其他检测差异均无统计学意义(表2)。

LR-HPV组中UU-RNA、CT-RNA、NG-RNA阳性检出情况LR-HPV阳性组女性UU-RNA检出率明显高于阴性组，差异有统计学意义(P<0.001)；其他检测差异均无统计学意义(表3)。

表1 男女性别间 HR-HPV-DNA、LR-HPV-DNA、UU-RNA、CT-RNA和NG-RNA阳性检出率比较(%)

HR：高危型；HPV：人乳头瘤病毒；LR：低危型；UU：解脲脲原体；CT：沙眼衣原体；NG：淋病奈瑟菌

HR：high risk；HPV：human papilloma virus；LR：low risk；UU：Ureaplasmaurealyticum；CT：Chlamydiatrachomatis；NG：Neisseriagonorrhoeae

表2 HR-HPV阳性组和阴性组UU-RNA、CT-RNA和NG-RNA阳性检出率比较(%)

表3 LR-HPV阳性组和阴性组UU-RNA、CT-RNA和NG-RNA检出率比较(%)

讨 论

目前发现HPV已有200多种基因亚型，但并不是所有的HPV感染都会演变为宫颈癌，只有在机体免疫低下或其他感染因素存在时，高危型 HPV持续感染造成宫颈上皮细胞遗传物质DNA失去稳定性，恶性增殖形成浸润性病变，才会引导宫颈癌的发生[4]。大部分HPV感染为一过性的，自身免疫机制对其有一定的免疫力，但是HPV与其他泌尿生殖道病原体具有协同作用[1]：CT通过感染宫颈，沿柱状上皮上行引起子宫内膜炎、输卵管炎和盆腔炎[5]，其生殖道感染潜伏期长，1～3周才会出现临床症状，约50%男性感染者和70%女性感染者一般无任何临床症状。国外研究表明，与HPV-DNA阴性女性相比，HPV-DNA阳性受试者感染CT的概率显著增加，CT感染会对患者HPV感染的状态产生一定的影响，增加宫颈癌变的风险，影响患者自身免疫系统对HPV的细胞免疫反应，造成持续感染[6]。本研究显示，在高危型HPV阳性组中，男性和女性CT的阳性率明显高于HR-HPV阴性组，表明CT与HPV感染具有一定的相关性且与型别有关，可能引发持续性感染，有增加宫颈癌变的风险。

支原体是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性、能通过除滤菌器、在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。UU能紧紧黏附于易感宿主细胞膜表面受体上，这种黏附细胞的特性成为支原体的致病性条件[7]。当机体免疫力低下或黏膜受损时支原体感染人体，一般黏附于泌尿生殖道上皮细胞表面的受体上，导致细胞损伤而使炎症上行，引起非淋菌性尿道炎、尿路结石、前列腺炎、肾盂肾炎、女性盆腔炎、阴道宫颈感染等多种疾病，并与女性不孕、习惯性流产及胎儿宫内发育迟缓等有关[8-9]。已有报道UU可在性成熟女性生殖道中处于正常携带状态[10]，与NG和CT相比感染率最高[11]，UU代谢产生的尿素酶、IgA 蛋白酶、磷脂酶A和C及多带抗原蛋白可引起细胞膜的损伤和组织的破坏，其中尿素酶可分解尿素产生氨，引起pH值改变，不仅有利于一些细菌的定植，对细胞也有毒害作用，IgA蛋白酶能破坏泌尿生殖道黏膜，损害免疫系统[12]，能在细胞分化过程中导致染色体的丢失和移位，因此可能促进细胞染色体变异和病毒的持续感染[13]。本研究检测为UU-RNA，因RNA远不如DNA稳定，病原体死后RNA很快降解，检测病毒RNA便于鉴别菌体存活状态，判断是否是现症感染。本研究显示，女性在LR-HPV阳性组中UU阳性率明显高于阴性组，表明低危型HPV感染与UU的现症感染存在一定的相关性。

综上，本研究UU和HPV感染率女性明显高于男性，而UU的感染更多集中于女性，无论是单一感染还是混合感染，CT和NG的感染无性别差异；在妇科门诊和皮肤性病门诊，UU-RNA检出率最高，达到60%，其次为HPV-DNA；男性和女性均以UU感染居首位，这点与其生理的活跃期以及职业社会背景直接相关。在高危型HPV阳性组中，男性和女性CT的阳性率明显高于HR-HPV阴性组，表明CT与高危型HPV感染具有一定的相关性；在低危型HPV阳性组中，女性UU阳性率明显高于阴性组，表明低危型HPV感染与UU的现症感染存在一定关系。CT和UU这两种病原体是否能引发HPV持续性感染、增加宫颈癌变的风险需要进一步研究。由此可见，生殖道混合感染比单一感染危害更大，所以在诊断和治疗泌尿生殖疾病过程中，联合4种病原体同时检测，尤其是在HPV分型检测阳性后同时进行CT、NG 和UU的检测，对感染呈上升趋势的HPV及其致癌因子给予足够的重视，及早发现和全面控制性病病原体的传播，进而提高混合感染的总体治愈率。