茶叶茶多酚检测方法研究进展

田玉凤，郑美慧，田晓静

（西北民族大学 生命科学与工程学院，甘肃兰州 730030）

茶叶是茶树的芽和叶子，我国很多地方都种植，是一种理想的保健饮品。茶叶中含有丰富的茶多酚、生物碱、氨基酸、茶多糖等活性成分；微量元素（如硒、铬、铁、锌等）在人体的新陈代谢和生长发育中起重要作用，如抗氧化[1-3]、提高综合免疫力[4]、抑菌[5-6]，抗癌[7-8]、降血脂[9]、抗衰老、抗辐射等作用[10]。现已广泛应用于食品、化妆品、医疗保健等领域[11]。

茶多酚（Tea Phlyphenols，TP）又名茶鞣质，是一类多羟基类化合物，是茶中酚类化合物的总称。茶多酚不仅是茶叶中的主要生物活性成分[12]，而且是茶中苦味、涩味和色泽的重要来源，也是评价茶叶品质的重要指标之一[3]。茶多酚的含量对茶叶质量有很大影响，选用合适高效的检测方法实现茶叶的品质鉴定和分级，将促进其在工业、食品和医疗领域的开发和利用。

1 检测方法

1.1 光谱分析法

1.1.1 分光光度法

分光光度法（Spectrophotometry）是利用被测物质在特定波长下的吸收度，再根据吸光度与被测物质浓度之间的线性关系进行检测分析的方法[13]。主要有以下几种方法。

1.1.2 福林酚比色法

福林酚比色法（Folin-ciocalteucolorimetry，FC）是通过福林酚试剂氧化茶多酚中的-OH而显蓝色进行比色测定的。高海荣等人[14]对比福林酚比色法和重铬酸钾分光光度法分析信阳毛尖、铁观音、大红袍及普洱饼茶4种茶叶中茶多酚总量的差异，发现福林酚比色法比重铬酸钾分光光度法更为有效。赵春玲等人[15]以没食子酸乙酯为标准品，建立了一种利用硝酸铝光度法检测茶叶中茶多酚含量的有效方法，平均回收率100.7%，RSD为1.07%。钟育均等人[16]建立了硅钼蓝光度法测定红茶和绿茶茶多酚的新方法，检测限为0.000 097 mg/mL，精密度和加标回收率是理想的。福林酚比色法快速、简单，并且减少人体接触试剂的机会[17]。

1.1.3 三维荧光光谱法

三维荧光光谱（Three-dimensional Fluorescence Spectrometry，3D-EEM）是利用某些物质分子受荧光照射时，发射具有不同特征和强度的荧光光谱，并在不同的激发波长上进行定性定量分析[18]。张琪瑞[19]利用三维荧光光谱结合荧光体积积分技术，分析铁观音和黄山毛峰两种茶叶中的叶绿素α、茶多酚与黄酮类物质的浸出情况，结果发现在相同浸泡条件下，叶绿素α浸出量接近最大值，茶多酚与黄酮类物质含量适中，浸泡温度可显著影响茶多酚的浸出量。

1.1.4 近红外光谱法

近红外光谱法（Near Infrared Spectrometry，NIR）利用分子的振动频谱，直接获得与分子的内部结构、官能团和分子状态有关的定量或定性信息[20]。赵雅等人[21]采用近红外光法结合偏最小二乘法在1 872 nm建立了茶多酚含量预测模型，R2=0.937 8。刘辉军等人[22]采用近红外光谱分析技术，结合非线性偏最小二乘法，在不同的光谱区间组合建立了最佳的分析模型，相关系数R2=0.967。马健[23]采用近红外光谱进行采样建模分析，建立偏最小二乘法模型，对信阳毛尖进行含量检测，预测集的相关系数R2=0.975 5。芦永军等人[24]采用近红外光谱结合定标过程检测茶多酚中儿茶素含量，其相关系数R2=0.994 7。

1.2 色谱分析法

色谱分析法通常用于分离和测定茶汤中的茶多酚，可用于茶多酚单体的含量检测。主要有液相色谱法、高效薄层色谱法、质谱法等。

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1.2.1 高效液相色谱法

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是根据物质在不同两相中的分配系数不同，经洗脱剂从而使混合物中各组分分离出来。采用HPLC法会涉及到样品的前处理问题，目前常采用溶剂萃取法对样品进行处理，有纯水[25]、甲醇、乙腈[26]、乙醇[27]、乙酸乙酯[28]等。HPLC法可同时测定多组分，可对茶多酚中的各组分测定。王增明等人[29]建立了HPLC法测定茶多酚中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和表儿茶素没食子酸酯（ECG）含量的检测方法，发现EGCG和ECG的线性范围和相关系数分别为159.4～797.0 mg/L，R=0.999 6和40.16～120.18 mg/L，R=0.999 7，方法的精密度和重复性良好。郭佳莉等人[30]利用超声波提取茶多酚，并采用高效液相色谱法分析测定相同产地不同级别茶叶的茶多酚，其线性范围和相关系数分别为0.6～3.0 mg/L，R=0.999 6～0.999 9，方法的精密度和重复性较好。HPLC可以同时准确测定多组分，但操作要求高、费用较高且费时。

1.2.2 柱色谱法

柱色谱法（Column Chromatography，CC）主要基于样品在两相中各组分的分配系数差异，因而在流动相中的迁移速度也不同，以实现组分的分离。袁华等人[31]以粗茶多酚为原料，以硅胶为吸附剂，发现茶多酚中儿茶素含量大于90%，其中酯型儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯含量超过60%。罗超华等人[32]优化茶多酚中EGCG分离纯化工艺路线，发现纯品表没食子儿茶素没食子酸酯含量超过90%。朱宇惠等人[33]利用沉淀法去除茶多酚粗品中的杂质，然后采用柱层析法纯化精制茶多酚。提出了沉淀-柱层析法新方法，发现该方法对茶多酚的分离测定有一定的实用性和可行性。

1.2.3 高效薄层色谱法

高效薄层色谱法（High-Performance Thin Layer Chromatographic，HPTLC）则能较好地解决高效液相色谱法每次只能进一个样，待测样品数量大、耗时较多，检测费用也高。王丽丽等人[34]以体积比12.5∶7.5∶2.2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，可较好地分离茶叶中的表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、儿茶素单体。傅冬和等人[35]用乙醇-丙酮-冰醋酸（5∶5∶3）为层析展开剂在聚酞胺薄膜板上进行层析分离，可有效地分离儿茶素单体，是一种较好的分离测定方法。

1.3 电化学分析法

电化学分析法（Electrochemical Analysis，EA）是基于茶叶中茶多酚的电化学性质及其变化规律，通过电化学参数（如电位、电导、电流）与被测物质浓度间的关系进行定性定量的方法。丁亚平等人[36]结合示位法和电位分析法，根据KBrO3和KBr的歧化反应与茶多酚的溴代反应间的速度不同，提出了检测分析痕量茶多酚的方法。朱丹等人[37]比较银电极、碳糊电极和玻碳电极在循环伏安法的基础上，测定茶多酚含量的有效性，发现玻碳电极具有最佳的重复性和准确性，可用于茶多酚的快速检测。

1.4 毛细管电泳法

毛细管电泳（Electrophoresis，EC）是利用不同粒子的迁移速度，最终以不同的速度到达检测器进行检测，产生按时间分布的电泳图谱[38]。夏文娟[39]利用250 mmol/LH3BO4，10 mmol/LKH2PO4、0.75 mmol/L SDS和20%乙腈组成的pH值为7.5的电泳介质，电压、柱温和波长分别为25 kV，20℃，200 nm，发现标样中的4种主要茶黄素类单体可在10 min以内快速分离，具有较高检测灵敏度。马晓年等人[40]在含有10 mmol/L Na2B4O7、5 mmol/Lβ-环糊精和8%乙腈的运行缓冲溶液中，分离电压、毛细管柱温和波长分别为20 kV，25℃和200 nm，儿茶素、表儿茶素、槲皮素、山奈酚和杨梅素的含量可在14 min有效分离和检测，说明可用于分离测定茶叶中的多种成分。

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2 结语

茶多酚是茶叶中主要的活性成分，具有抗癌、抗肿瘤、抗氧化、抑菌等功效，对人体的健康有重要作用，在测定茶叶中的茶多酚含量时，可根据茶多酚的性质采用多种方法测定分析，从而评价茶叶品质和分级。色谱分析法精确度较和灵敏性高，可进行多组分的检测；光谱分析法是近几十年来发展最迅速的分析工具之一，操作相对简便、检测快速、测定结果相对准确，也是传统化学分析方法的替代方法；电化学分析法重复性和准确性好、时间短，可用于快速检测；毛细管电泳法重复性相对较差、分析精度不高、误差大。选取高效合理准确的检测方法，可对茶叶进行品质鉴定和分级，促进其在食品、医疗和工业等领域的应用。