玄黄膏药对急性软组织损伤大鼠损伤组织中IL－1β、TNF－α含量的影响＊

程 延，赵晓芸，王敏娟，范俊超，杨振兴，窦群立

1.陕西省中医医院骨伤二科（西安710003）；2.西电集团医院急诊科（西安710077）；3.陕西中医药大学附属医院骨伤科（咸阳712000）

急性软组织损伤在日常生活中十分常见，不仅影响人们的日常生活和工作，而且还会带来极大的精神痛苦与医疗费用支出［1－2］。更为严重的是，如果此类损伤不及时治疗和后期正规康复，往往会出现慢性、持续性疼痛，影响人们损伤肢体的功能恢复及正常活动，重者甚至导致自理能力障碍［3］。中医药治疗急性软组织损伤具有很多优势，尤其以外用药膏、膏药等最为广泛，效果显著［4］。多年来我们使用纯中药制剂玄黄药膏治疗急性软组织损伤患者，取得明显效果，而且该药使用方法简单，使用中未发生毒副作用及过敏反应等［5］。本课题在前期研究的基础上，通过实验研究玄黄药膏对大鼠急性软组织损伤模型损伤组织中IL－1β、TNF－α含量的变化，进一步探讨其治疗急性软组织损伤的机理。

材料与方法

1 实验动物 SD大鼠72只，雌雄各半，第四军医大学实验动物中心提供（实验动物生产许可证号：SCXK9（陕）：2014－006）。适应性喂养3d，精选合格饲料，每天清洗笼具，保持室内宜温、宜湿及室内清洁。

2 实验药物与试剂 玄黄药膏组成：酒大黄15 g，栀子30g，蒲公英9g，乳香、没药各8g，䗪虫3g。所有药材购于陕西中医药大学附属医院中药房，药物符合国家中草药质量规定。

药膏制备：将以上6味中药按100～120目粉为细末备用，置于500ml圆底烧瓶中，称重。然后按1∶1比例向烧瓶中加入凡士林搅拌均匀，制成玄黄药膏，密封，4℃冰箱保存，备用。药膏制作在陕西中医药大学附属医院制剂中心完成。

实验试剂：扶他林软膏购自诺华制药西安经销商。IL－1β试剂盒购自海克尔生物科技公司西安经销商。TNF－α试剂盒购自图赫实业（上海）有限公司。

3 实验方法

3.1 动物分组与造模：大鼠适应性喂养3d后，随机分为模型对照组（A组）、扶他林组（B组）、玄黄药膏组（C组）三组，每组24只。实验前1天用8%硫化钠涂抹于每组大鼠的右大腿，进行术前脱毛处理，并且对打击部位进行标记处理、编号；实验当天用质量100 g的砝码，从50cm高度的固定位置经由塑料管落下，使砝码准确打击到大鼠肢体的标记处，反复进行3次，观察损伤模型。

3.2 治疗方法：造模成功30min后开始给药，玄黄药膏组、扶他林组分别外敷玄黄药膏和扶他林各3g，空白对照组给予凡士林外敷。24h换药1次，共10d，各组治疗完成后用医用的纱布覆盖创面，胶布固定。

3.3 检测指标：在治疗后第1、3、7、10天，每组分别处死6只动物，取治疗处表皮，组织剪剪下损伤中心处组织，医用盐水漂洗1min，滤纸将其吸收干后用天平称重，取（100±5）mg，10mg组织中配备生理盐水0.5ml，组织在匀浆器里面均匀的研磨，15min后观察并且等到匀浆液看上去呈均匀一致悬浊液时，其容器里面均匀的处理到达15min，等到匀浆液看上去呈上一次处理差不多均匀的液体时，再将组织放于医用盐水漂洗1min，吸干后，再重复称取，配医用盐水，组织匀浆等，等到匀浆的组织又一次呈均匀一致的时候去其液体。再将其放到高速冷冻离心机中进行处理15 min，将上面的液体收集起来，放置于－20℃冰箱中备用。用ELISA（酶联免疫吸附法）测定损伤组织中IL－1β、TNF－α含量，具体操作步骤按照试剂盒操作说明完成。

4 统计学方法 应用SPSS 17.0统计学软件包进行统计学分析，检测结果以表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

治疗后，玄黄药膏组动物损伤组织中IL－1β、TNF－α含量逐渐降低，且随治疗时间延长，降低越明显，在各时间点均低于空白对照组，优于扶他林组（P＜0.05），组内及组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。不同时间各组大鼠损伤组织中IL－1β、TNF－α含量变化比较见表1、2。

表1 各组IL－1β含量比较（pg／ml）

表2 各组TNF－α含量比较（pg／ml）

讨 论

急性软组织损伤属中医“急性筋伤”范畴，指身体遭受外力作用，引起皮肤、筋膜、肌肉、韧带、肌腱等损伤，表现为局部疼痛、肿胀、皮肤青紫瘀斑、肢体活动障碍等。损伤处常常因为出血，组织缺血缺氧等，发生急性无菌性炎症反应，导致疼痛敏感性增加而疼痛明显；炎症致痛因子反过来又使血管收缩，导致缺血缺氧加重，形成恶性循环。其病理变化主要以局部炎症反应和组织修复。研究表明［6］，急性软组织损伤的病理过程，主要是损伤的组织发生无菌性炎症反应，导致炎症介质和促炎细胞因子释放，其中IL－1β是炎性反应过程中一个重要介质，组织受损后，炎症部位及脊髓水平的浓度都会升高，而且还能诱导其他促炎因子释放，促进、维持炎症反应，引发炎性疼痛。外周组织IL－1β的释放，使炎症伤害信息传入敏化，并诱发机械和热痛觉过敏；脊髓水平IL－1β的释放可以通过不同的机制来调节疼痛，这可能与急性疼痛转化为慢性疼痛且慢性疼痛长期持续的存在有关。TNF－α具有广泛的生物学效应，可诱导细胞凋亡，使机体发热，诱导促进炎症反应和诱导产生IL－1、IL－2等多种细胞因子，诱发和扩大炎症反应，通过刺激、生成超氧化物，释放出溶酶体而损伤组织细胞，使炎症介质聚集，TNF含量与创伤严重程度呈正相关。杨进等［7］应用消肿止痛膏治疗角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀，发现血清内IL－1β、TNF－α含量较模型组降低（P＜0.05），说明消肿止痛膏通过调节大鼠角叉菜胶足肿胀血清内炎症因子IL－1β、TNF－α水平抑制急性炎症发生发展过程。

中药外治是中医治疗方法的一种重要形式，也最具特色。清徐大椿的《医学源流论》说：“外科治法，最重外治”。清吴师机的《理瀹骈文》指出：“外治之理，即内治之理；外治之药，即内治之药，所异者法耳”。外治法在中医各科应用广泛，其中药膏在骨伤科使用非常广泛，其制作、使用方便，价格低廉，深受患者信赖和欢迎。一般适用于损伤初中期［8］。中药经过皮肤吸收，直接作用于损伤组织局部，可以在损伤部位维持相对稳定的血药浓度，发挥药物作用，达到活血祛瘀、消肿止痛的作用［9］。中药外治不受口服给药所带来的胃肠道酶及消化液的影响，无明显的毒副作用，是治疗软组织损伤不可或缺的一种治疗方式［10］。

中医学认为，本病病机主要是气滞血瘀、筋脉阻滞，治疗应以活血化瘀、消肿止痛为法。本实验以“活血化瘀、消肿止痛”为法，组外治方“玄黄药膏”，用于治疗急性软组织损伤（急性筋伤）患者，中医证属“气滞血瘀”型，经多年应用，效果显著。方中大黄、䗪虫为君药，用以破瘀通经、消肿止痛，乳香、没药辅助活血、行气、消肿，栀子、蒲公英清热舒筋，助大黄清泄瘀热之力。全方共奏活血祛瘀、消肿止痛之效。现代药理研究表明，大黄中的大黄素可以抑制炎症因子生成，对TNF和IL－1具有十分明显的抑制作用［11］；可降低佐剂性关节炎大鼠致炎关节滑膜细胞中PGE2和TNF－α水平；可提高血浆渗透压，使组织水分向血管内转移，以补充血容量，降低血浆黏度［12］。栀子中格尼帕素及去羟栀子甙对小鼠醋酸扭体反应有明显的抑制作用，同时具有显著的镇痛效果，乳香、没药提取物具有强烈的镇痛作用。蒲公英有明显的抗菌、抗病毒作用，这和其清热解毒的功效联系紧密。资料表明［13］，活血化瘀药可以降低毛细血管通透性，减少炎症渗出及红细胞外漏，对局部血液循环尤其是微循环有修复和恢复作用，从而改善组织缺血缺氧状态，恢复正常的新陈代谢，加快损伤组织修复。能够促进大鼠急性软组织损伤模型损伤部位肿胀、瘀血消散，加快组织修复。这与中医关于筋伤的认识机理及辨证论治是相吻合。

本项目前期研究显示［14］，玄黄药膏能够明显降低损伤组织中IL－6和PGE2含量（P＜0.05）。本次实验结果表明，玄黄药膏组动物损伤组织中IL－1β和TNF－α的含量明显低于空白对照组，并优于扶他林组（P＜0.05），说明玄黄药膏具有明显的抑制局部损伤组织中炎症因子产生的作用，从而减轻局部炎症反应。本实验证实，玄黄药膏可以显著降低损伤组织中IL－1β、TNF－α含量，从而有效减少损伤组织中炎性细胞浸润、组织出血、血管扩张，抑制一系列炎症反应，使痛觉感受器敏感性降低，痛阈升高以镇痛。其机理可能与减少炎性与促炎介质分泌和释放，促进炎性因子代谢，有效降低损伤软组织的炎性反应有关。