河南省玉米品种真实性鉴定的探索与思考

河南省种子管理站 史庆玲 闫瑾 肖琳琳

一、开展玉米种子真实性鉴定的意义

玉米是我国主要的粮食、饲料及能源作物，种子质量问题不仅关系着农民的切身利益，更加关系着我国粮食的安全。当前传统育种与分子育种技术相结合使得玉米新品种不断出现，同时，国家实行育、繁、推一体化，对玉米审定程序的简化，使得近年通过审定的玉米新品种数量井喷式上升。但是我国玉米育种使用的种质资源较为集中，使得新品种的遗传基因比较狭窄，性状雷同，因此，从分子水平上建立准确有效的玉米品种真实性鉴定技术体系显得非常必要。利用分子标记技术可以不受器官、组织、发育阶段及季节和环境因素的制约，直接鉴定不同品种DNA 水平上的差异，较传统田间种植鉴定具有省力、省时等优点。目前，常用的DNA 分子标记方法主要有SSR、SNP 等，其中SSR 分子标记因其具有数量丰富、多态性高、遗传上呈共显性、扩增稳定以及扩增结果易于交流等特点，比较适于玉米品种真实性的检测研究。利用SSR 技术对玉米品种进行真实性检测，可有效地解决种子的质量问题，结合经典的田间种植鉴定能保障我国的种业市场安全，保证农民的合法权益。

二、玉米真实性鉴定存在的主要问题

（一）现有标准指纹库单一

标准样品是玉米种子真实性鉴定的关键，标准样品的准确性对鉴定结果起着很大的导向性作用。目前，玉米品种标准样品交由农业农村部统一保管，建立了完善的保管体系，同时，也建立了SSR 标准指纹库，但是，指纹库的数据上传及更新不及时，导致很多新审定的品种在指纹库中找不到对照品种指纹。指纹库里大部分品种是国审品种，省审的品种不多，建议河南省建立自己的省审品种指纹数据库，可以有效地服务于玉米真实性鉴定。但是，目前来说我们缺乏玉米品种保管经验，导致现在征集的标准样品不全，并且标准样品库的维护及管理需要不断的投入人力物力财力。

（二）现有标准样品指纹图谱不全面

利用SSR 分子标记建立的玉米标准指纹库是目前可以利用的一套有效的玉米真实性鉴定的指纹库，但是该标准指纹库不完全对外开放，使得在使用过程中存在很多问题。如果监督抽查样品的指纹数据与标准指纹库的数据进行比对，从样品的前期处理到DNA 的提取及后续实验的进行都必须按照统一的、规范的、标准的流程进行，否则由于遗传分析仪的灵敏度比较高，及其他实验仪器的不同都会造成微量的数据偏差。随着我国新种子法的实行，新审定的玉米品种数量不断的增多，出现了很多亲缘关系很近的品种，利用现有的40 对引物对目前的品种进行区分存在一定的制约因素。开发新的SSR 引物，增加标准引物的条数，尽快使其使用标准规范化，可以扩大图谱的范围，更有力地进行细致筛查；检测方式的多样化，比如结合SNP 等新的检测方法辅助进行筛查，不仅可以丰富标准样品的图谱，还可以使得鉴定过程中更加高效。

（三）农作物种子检测人员的理论及实践水平有待提高

随着我国农业检测技术的快速发展，种子检验的范围逐渐扩大，从传统的水分、纯度、净度和发芽四项指标逐步扩项到分子检测。新技术新项目的不断出现，就要求种子检验人员与时俱进，不断进行培训学习，掌握新技术新方法。而理论与实际操作总会有差距，所以在理论提高的同时还要不断在实践中增长经验。在玉米真实性的SSR分子检测中，不但要掌握PCR 扩增、遗传分析仪的使用，还要学习后期指纹数据的分析软件，对指纹数据做出正确的分析判断，而对数据的准确分析直接影响最后结果的判断，这些都要求检验员不断进行学习培训，在实际操作中提升业务水平。

三、提升玉米品种真实性鉴定的主要措施

（一）建立有效的玉米标准指纹库

农业农村部对国审、省审品种进行了统一的收集管理，并建立了玉米指纹图谱库，指纹库的高效利用是关键。目前，这个SSR 标准指纹库不能免费对科研工作者开放，指纹数据也得不到及时的更新，造成了指纹数据滞后于新品种的审定，使得很多新品种在真实性鉴定中得不到有效对照。鉴于这个情况，建议地方各省应该紧跟步伐，建立省审品种标准样品资源库，不断更新新审定品种的标准指纹库，完善指纹数据。与此同时，还要尝试新的检测方法SNP，将两者完美结合应用在玉米品种真实性鉴定中。

（二）玉米品种SSR分子鉴定与田间种植鉴定相结合

分子生物学技术的飞速发展，使得大家对玉米的认识从表型认知到分子水平，特别是近年SSR 分子标记技术的快速发展为种业发展提供了有效的辨别真伪的方法手段。但是我们对一个事物的认识，应该从表型到实质，再从实质到表型，要把实质与表型进行完美结合才能准确的认识该事物。单纯地从DNA 的水平来区分玉米品种存在认知的局限性，而且由于我国使用的亲本自交系比较集中，种质遗传基础相对比较狭窄，所以容易由于标准引物数量的限制而不能做出有效的鉴定。登海-先锋公司维权起诉山西大丰公司生产的玉米品种大丰30 涉嫌侵权先玉335 就是一个简单的例子。在40 对标准指纹图谱，显示大丰30 与先玉335 相同或极近似；通过田间种植鉴定在玉米轴颜色上有很大的区别，与先玉335 不是同一个玉米品种。田间种植鉴定作为一种经典的纯度鉴定方法，在真实性鉴定中也有着不可逾越的优越性，因此，将品种的SSR指纹图谱与田间种植鉴定完美的结合，在品种的真伪和纯度检测方面发挥了重要的作用，也是目前对品种进行真实性鉴定最准确而又行之有效的方法。

玉米种子真实性是种子质量检验的重要指标，是控制种子质量、杜绝伪种子流入市场的重要手段。河南省自从开展打击侵犯品种权和制售假种子行为专项行动以来，各地市种子市场秩序明显好转，因种子质量问题而发生的生产事故明显减少。因此，作为检测人员要加强玉米种子四项指标检测的同时，也要加强品种真实性的分子检测技术和相关法律法规条约的学习。无论是田间的种植鉴定技术还是分子生物学鉴定技术都有其优点也有其局限性，将室内检测与室外鉴定完美结合，可以有效地维护我国玉米种子市场安定有序的发展。