血浆热休克蛋白90α在肺癌中表达及临床价值

姜 源，舒 静，陈 敏

(1.西南医科大学附属医院医学检验部,四川泸州 646000；2.西南医科大学检验系,四川泸州 646000)

肺癌是我国目前最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，且其易复发、转移快，早诊断、早治疗是提高患者生存期的关键因素。目前，诊断肺癌常用的方法有支气管镜检查、CT扫描、PET-CT等，但检查均较为繁琐且耗时长。而现有肿瘤标志物对肺癌针对性较差，采用多种肿瘤标志物联合检测可提高肺癌早期诊断及其复发、转移的检出率。热休克蛋白90α(heat shock protein 90alpha，Hsp90α)是由732个氨基酸构成，相对分子质量为87 000，能够辅助蛋白折叠并维持细胞多种信号传导蛋白的稳定，从而促进细胞存活和生长，是构成人体细胞的关键伴侣蛋白[1]。WANG等[2]研究发现血浆Hsp90α表达水平与多种恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关，细胞Hsp90α的分泌量随肿瘤恶性程度增高而升高，并认为其可以作为肿瘤早期检测及疗效评估的一种新型肿瘤标志物。因此，笔者检测肺癌患者血浆Hsp90α表达水平，探讨其在肺癌临床诊断和治疗中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年9月至2018年4月在西南医科大学附属医院就诊的各类癌症患者269例，其中男150例，女119例，年龄44～77岁；其中乳腺癌53例，肝癌 86例，肺癌87 例(小细胞肺癌41例，鳞癌17例，腺癌29例)，白血病43例，均经病理诊断及其他手段确诊且未经放化疗。选取肺部良性疾病患者57 例，年龄48～73岁，其中支气管炎患者22例，慢性阻塞性肺疾病17例，肺炎18例，并排除其他严重系统疾病及恶性肿瘤。另以同期30例健康体检人员作为健康对照组，年龄22～28岁，经证实均无心脏、肝、肾等其他系统疾病。

1.2方法

1.2.1样本采集 采用真空采血管采集待检者空腹静脉血4 mL，2 mL乙二胺四乙酸二钾(ethylene diamine tetraacetic acid-K2，EDTA-K2)抗凝血分离血浆用于Hsp90α测定，2 mL无抗凝剂静脉血分离血清用于其他指标检测[癌胚抗原(CEA)、糖链抗原125(CA125)、细胞角质蛋白19片段(CYFRA21-1)]。均严格按仪器及试剂盒说明进行操作。

1.2.2检测方法 采用烟台普罗吉生物科技发展有限公司生产的血浆Hsp90α酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)检测试剂盒测定待检者血浆Hsp90α水平。选用罗氏Elecsys2010电化学发光仪与原装配套试剂测定血清CEA、CA125及CYFRA21-1。操作步骤严格按仪器及试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1不同恶性肿瘤疾病组血浆Hsp90α表达水平比较 各恶性肿瘤疾病组血浆Hsp90α表达水平均明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图1。

图1 不同恶性肿瘤疾病组血浆Hsp90α表达水平比较

a:P<0.05,与健康对照组比较

2.2肺癌组、肺部良性疾病组、健康对照组血浆Hsp90α水平比较 各组血浆Hsp90α水平分别为：肺癌组(133.61±64.83)ng/mL、肺部良性疾病组(50.28±26.48)ng/mL、健康对照组(47.63±14.98)ng/mL。统计分析显示，与肺部良性疾病组和健康对照组相比，肺癌组血浆Hsp90α水平显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与健康对照组相比，肺部良性疾病组血浆Hsp90α表达水平差异无统计学意义(P=0.271),见图2。

图2 肺癌组、肺部良性疾病组、健康对照组血浆Hsp90α水平比较

a:P<0.05,与健康对照组比较

2.3Hsp90α对肺癌诊断价值评估 ROC曲线分析显示，血浆Hsp90α在肺癌诊断中的最佳临界值为61.37 ng/mL，当以最佳临界值作为cut-off值时，其灵敏度为93.10%，特异度为62.50%，ROC曲线下面积为0.857。表明Hsp90α检测在肺癌诊断中具有较高的灵敏性，在肺癌早期诊断中具有一定临床意义，见图3。

图3 Hsp90α诊断肺癌的ROC曲线分析

2.4多种标志物联合检测对肺癌的灵敏度及特异度的影响 结果显示，CEA、CA125、CYFRA21-1单项检测在肺癌诊断中的灵敏度分别为58.62%、55.17%和51.72%；灵敏度最高的2项联合检测为CEA+CA125(74.71%)；3项联合检测Hsp90α+CEA+CA125的灵敏度最高(86.21%)；Hsp90α+CEA+CA125+CYFRA21-1的4项联合检测在所有联合检测中的灵敏度最高(88.51%)，见表1。

表1 肿瘤标志物联合检测对肺癌的灵敏度和特异度(%)

3 讨 论

肺癌严重威胁着人类生命健康。近年来，我国肺癌的发病率和病死率已居恶性肿瘤之首，预计到2025年，我国新发肺癌病例人数将超过100万，尽管临床已规范化治疗，但预后仍较差，5年生存率仍较低[3-4]。血清CA153、CEA、CA125、CYFRA是辅助诊断肺癌较常用的肿瘤标志物，但早期辅助诊断肺癌的灵敏度和特异度均欠佳[1]。

Hsp90α是机体在应激状态下合成的一组蛋白质分子，主要作为分子伴侣参与蛋白的合成、折叠和调控细胞内多种信号蛋白功能稳定，是细胞内关键信号通路或细胞转录的调控者[5]。新近研究发现：分泌的Hsp90α能够激活基质金属蛋白酶-2(MMP-2)，并能协助MMP-2的成熟，进而促进肿瘤侵袭与转移[6-8]。此外，研究表明，癌症患者血浆中Hsp90α的水平与肿瘤发生发展、生物学行为及预后具有显著的相关性[2]， Hsp90α抑制剂可在肿瘤生长信号通路中降解效应蛋白，阻断肿瘤增殖信号通路的多个靶点，抑制肿瘤的生长，增强癌细胞对抗癌药物的敏感性[9-10]，因此Hsp90α已成为抗癌药物作用的靶点。本研究入组了肺癌、肝癌、白血病、良性肺部疾病和体检者为研究对象，评估各组血浆中Hsp90α水平，以探讨希望评价血浆中Hsp90α是否能作为诊断肺癌的一种新型生物标志物。同时，笔者进一步分析了Hsp90α联合其他肿瘤标记物诊断肺癌的灵敏度及特异度，以提高早期诊断肺癌的效能。

为了检测Hsp90α与恶性肿瘤的相关性，笔者分别检测了恶性肿瘤疾病组(肺癌、白血病、肝癌、乳腺癌)及健康对照组血浆中Hsp90α表达水平。结果显示，恶性肿瘤疾病组血浆Hsp90α水平均显著高于健康对照组(P<0.01)。 此外，本研究还发现，肺癌组血浆Hsp90α水平显著高于肺部良性疾病组和健康对照组(P<0.01)。这些结果表明，Hsp90α水平在恶性肿瘤血浆中明显升高，具有良好的广谱性，可以作为早期诊断恶性肿瘤的通用指标。

此外，本研究构建了ROC曲线，结果显示，血浆Hsp90α在肺癌诊断中的最佳临界值为61.37 ng/mL，当以最佳临界值作为cut-off值时，其灵敏度为93.10%，特异度为62.50%，ROC曲线下面积为0.857，这表明血浆Hsp90α具有较好的灵敏度，但特异度不高，与文献报道一致[2,11]。为进一步提高肺癌的诊断效能，笔者还评估了单项肿瘤标记物及多项联合检测在肺癌诊断中的灵敏度和特异度。CEA是一类具有人类胚胎抗原决定簇的酸性糖蛋白，是最早诊断肺癌的常用肿瘤标志物之一，其作为肺癌标志物的灵敏度为35%～77%[12]；CA125作为一种糖类抗原，是广泛应用于上皮性卵巢癌和子宫内膜癌诊断的肿瘤标志物。研究结果显示，肺癌患者血清CA125水平增高明显，且CA125的增高程度与肺癌组织病理分期呈正相关[13]。CYFRA21-1为细胞角蛋白-19的片段，其水平在上皮组织来源的肿瘤组织中明显增高，是诊断非小细胞肺癌较敏感的肿瘤标志物[14]。本研究结果显示，在肺癌诊断中单项肿瘤标志物检测的灵敏度分别为CEA(58.62%)、CA125(55.17%)和CYFRA21-1(51.72%)；CEA+CA125在2项联合检测中灵敏度最高(74.71%)；在3项联合检测中灵敏度最高的为Hsp90α+CEA+CA125(86.21%)；均低于4项肿瘤标志物(Hsp90α+CEA+CA125+CYFRA21-1)联合检测的敏感性(88.51%)。因此，血浆Hsp90α可以作为一个潜在的肺癌肿瘤标志物，具有辅助诊断肺癌的作用，联合其他肺癌标志物检测可显著提高肺癌的检出率。

研究表明，在肿瘤进展的不同阶段，血浆Hsp90α的表达情况也有相应改变[15]。因此，后续研究将对血浆Hsp90α在肺癌病理分期、治疗及预后判断等方面的应用作进一步探讨。总之，血浆Hsp90α是一个潜在的肺癌肿瘤标志物，具有辅助诊断肺癌的作用，其联合肺癌标志物检测可显著提高肺癌的检出率，为肺癌的早期诊断、治疗和预后判断提供有力的依据。