密度仪在血液制品生产中的应用

马 杰 ，陈 川 ，郭 佳

（1四川大学化学工程学院 四川 成都 610041）

（2成都蓉生药业有限责任公司 四川 成都 610041）

密度仪在血液制品生产中的应用

马 杰1，陈 川2，郭 佳2

（1四川大学化学工程学院 四川 成都 610041）

（2成都蓉生药业有限责任公司 四川 成都 610041）

目的：通过测定供试品密度的物理性质，建立一种密度与蛋白含量相关联的测定方法，使生产过程中蛋白含量测定简便、快速，该方法在生产中质量可控。方法：用凯氏定氮法分别十次测量同一批次人血白蛋白配制后原液、同一批次静注人免疫球蛋白（pH4）配制后原液，分别取平均值，作为工作标准品，建立密度与蛋白含量标准曲线。结果：利用密度仪测定人血白蛋白试验样品，静注人免疫球蛋白（pH4）试验样品，各10个批次，并与凯氏定氮法测定结果对比，发现密度仪法测定结果稳定、重复性好，RSD≤0.5%,与凯氏定氮法法对比，相对标准偏差为99%～101%。人血白蛋白实验品t双尾检验P=0.588，静注人免疫球蛋白（pH4）实验品t双尾检验P=0.820。结论：在生产人血白蛋白、静注人免疫球蛋白过程中，密度仪操作简便快捷，并与凯氏定氮法结果无显著性差异，方便在生产过程中进行质量控制，大大的提高了工作效率，适合推广应用。

密度仪；蛋白含量；凯氏定氮法

1 引言

蛋白质含量的质量控制在人血白蛋白与静注人免疫球蛋白（pH4）生产过程中是非常重要的，测定蛋白质含量的方法主要有凯氏定氮法、福林酚法（Lowry法）、双缩脲法、考马斯亮蓝法、紫外-可见分光光度法等[1]。凯氏定氮法作为药典规定的方法，具有高准确度和高精确度的特点，使该方法在血液制品生产过程中被广泛使用，但凯氏定氮法试验操作复杂、繁琐，周期长、速度慢且使用的硫酸具有一定的腐蚀性会对试验人员具有一定的危害性，故无法满足生产过程中蛋白含量的质量控制。为了解决这一矛盾，笔者通过实验实践，发现密度仪测定蛋白含量可以很好的解决这一问题。

2 设备与材料

2.1 DMA4100M型密度仪，生产厂家：奥地利Anton paar。该密度仪利用U型振荡管在电磁场的作用下，根据振荡频率的强弱测定溶液的密度。

2.2 人血白蛋白超滤配置后原液，通过低温乙醇法分离精制超滤所得。

2.3 静注人免疫球蛋白（pH4）超滤配置后原液，通过低温乙醇法分离精制超滤所得。

2.4 人血白蛋白试验样品。

2.5 静注人免疫球蛋白（pH4）试验样品。

3 方法

3.1 建立标准曲线

将材料1.2和1.3分别进行凯氏定氮法试验10次，得出结果取平均值，作为工作标准品，分别是工作标准品1，工作标准品2。将这两个工作标准品各取50ml，用纯化水1:1稀释，备用。根据密度仪产品说明书，将工作标准品1注入密度仪中，输入已知的蛋白含量值，然后将稀释一倍的工作标准品1注入密度仪中，输入蛋白含量值，这样根据两点确定一条直线的原理就建立了人血白蛋白标准曲线。同理，可用工作标准品2和稀释液建立静注人免疫球蛋白（pH4）标准曲线。

3.2 标准曲线精确度确认

分别将工作标准品1、2用纯化水进行80%、70%、60%梯度稀释，然后用对应的曲线检测蛋白含量，所得结果和理论值对比。

3.3 重复性试验确认

分别用相对应的标准曲线检测同一批次人血白蛋白与静注人免疫球蛋白（pH4）实验样品，各5次，所得结果求其相对标准偏差。

3.4 用相对应的标准曲线分别检测材料1.4和1.5各10个批次，所得结果与凯氏定氮法检测结果相对比。

4 结果

4.1 标准曲线精确度确认，结果如表1，表2。

表1 人血白蛋白标准曲线准确度确认结果

表2 静注人免疫球蛋白（pH4）标准曲线准确度确认结果

表1、表2说明密度仪测定的人血白蛋白与静注人免疫球蛋白（pH4）中间精密度高，回收率均在99%～101%。

4.2 重复性试验确认，实验结果如表3、表4。

表3 人血白蛋白重复性试验确认结果

表4 静注人免疫球蛋白（pH4）重复性试验确认结果

表3、表4说明密度仪测定的人血白蛋白与静注人免疫球蛋白（pH4）重复性好、离散性小。

4.3 人血白蛋白试验样品、静注人免疫球蛋白（pH4）试验样品各10个批次，分别用凯氏定氮法与密度仪法测定蛋白含量，结果如表5、表6。

表5 人血白蛋白两种检测方法检测结果对比

表6 静注人免疫球蛋白（pH4）两种检测方法检测结果对比

表5、表6结果表明：凯氏定氮法检测的人血白蛋白试验样品和静注人免疫球蛋白（pH4）的含量结果与密度仪检测结果的回收率在99%～101%，回收率很好，表明密度仪检测人血白蛋白与静注人免疫球蛋白（pH4）重复性好，精准度高。对实验结果分别进行t检验，人血白蛋白P（双尾）=0.588，静注人免疫球蛋白（pH4）P（双尾）=0.820，P〉0.05，t双尾临界=2.26，说明密度计测定这两种蛋白质含量的结果是准确可靠的。

5 讨论

凯氏定氮法检测蛋白质含量是国际上公认的标准方法，具有准确度高、精准度高的特点，但也有操作复杂繁琐、周期长、速度慢等缺点。密度法测蛋白质含量只需几分钟，可以大大提高蛋白质检测的效率，对血液制品生产过程中的超滤、浓缩、配制等过程质量控制得到显著提高。由于密度仪法精密度非常好，在生产过程中用密度法测定蛋白含量，还可以降低不同批次间的差异性，到达良好的成品分装效果，保证产品不同批次之间的均一性。然而，密度仪法专属性较差，如钠离子含量，辛酸钠含量，以及麦芽糖含量对密度影响较大，即使在相同蛋白含量下，随着这些辅料、稳定剂的增加，密度值也随之增高，所以在制备标准品及标准曲线时，应将各种辅料及稳定剂配制成生产过程中制品配制的相似浓度，使制品除蛋白物质以外其他成分含量一致，以排除非蛋白质物质的对实验、仪器的干扰。

[1]中华人民共和国药典2015年版四部 [S].中国医药科技出版社，2015：96-98.

[2]杨晓东，张金，何彦林，张磷. 密度计在血液制品生产中的应用 [J].现代检验医学杂志，2007，11(3)：72-73.

TQ464.56 【文献标识码】A 【文章编号】1009-5624（2018）01-0229-03