化纤胶囊对脓毒症大鼠凝血功能的影响*

王 丛 梁 群

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨 150040）

脓毒症是感染导致的全身炎症反应综合征，其死亡率逐年增加，给患者及家属带来极大的痛苦，目前已经成为世界瞩目的重大疾病，引起国内外的重视［1］。脓毒症发病机制的研究一直是医学界的研究重点，国内外专家目前已经确定其发病机制并不是单一因素引起的，与炎症、凝血、免疫等多靶点均有关系［2］。西医治疗只能从单方面出发不能实现多靶点治疗，中药复方制剂可以摒弃西药单一治疗靶点的弊端，从整体观念出发实现多靶点治疗。近年来中医不再停留于传统的治疗慢性疾病的模式而是更多地采用中西医结合治疗急危重病，并且得到国内外专家的认可。本文通信作者梁群教授在研究急危重症疾病领域工作20余年，依据脓毒症的病因病机及多年临床经验总结出益气活血解毒方化纤胶囊，应用于临床后疗效显著［3-4］。本实验研究是在此基础上进一步探索化纤胶囊影响脓毒症凝血功能的机制，为中医药治疗脓毒症提供更有力的支持。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级别Wister雄性大鼠40只 ［许可证号 SCXK（京）2016-0006］，体质量 180～220 g，提供单位为黑龙江中医药大学动物实验中心。普通专用饲料喂养于温度（22±4）℃，相对湿度40%～70%，自然光线的实验室，经过1周的适应性饲养后进行实验。

1.2 试药与仪器 1）药物：化纤胶囊（规格0.75 g/粒，药物组成：黄芪 30 g，丹参 15 g，当归 15 g，白术 15 g，党参 15 g，川芎 15 g，茯苓 15 g，熟地黄 15 g，甘草10 g。参照中国药典（2015版）中药胶囊剂制作方法，由黑龙江中医药大学附属第一医院药厂制备），临用前将胶囊内容物取出研磨成细粉末，用蒸馏水稀释至所需浓度，D2＝D1×K2/K1×W1/W2，D 为药物剂量，K 为常数 （大鼠为 9.1人为 1.6），W 为动物体 zhiliang1（kg），经计算每毫升药物含量为化3.5 g（成人2倍）。2）试剂：大鼠抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）ELISA检测试剂盒；大鼠血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒（由Abcam公司提供）。3）仪器：离心机型号SORVALL ST8/8R厂家：Therm电子称，哈尔滨量具厂生产。

1.3 分组与模型制备 Wister雄性大鼠40只按随机数字表法分为：空白组10只、假手术组10只、模型组20只。模型以10%水合氯醛（0.4 mL/100 g）腹腔麻醉后沿腹部正中线切开约2 cm切口，找到盲肠，避开其系膜血管在盲尾端2 cm处结扎，然后在结扎处远端用18号针穿刺盲肠2次，挤出肠内容物后将盲肠还纳关腹。术后大鼠出现竖毛、精神萎靡等症状为造模成功。假手术组：打开腹腔并寻找盲肠，分离其远端与大肠的系膜，不施盲肠结扎术即关闭腹腔。造模成功后随机分为化纤胶囊组与模型组，每组各10只。

1.4 干预方法 化纤胶囊干预组予化纤胶囊（用蒸馏水稀释，质量浓度为3.5 g/mL），剂量0.5 mL/100 g灌胃给药，每日2次，间隔至少6 h，模型组与假手术组分别给予同剂量的0.9%氯化钠注射液。干预时间为3 d。

1.5 标本采集及检测 造模后待大鼠麻醉苏醒后开始进行观察，记为实验第1天，试验周期为3 d，3 d后腹主动脉采血由黑龙江中医药大学附属第一医院检验科进行检测，AT-Ⅲ、PAF应用ELISA试剂盒检测。检测方法为在血中加入乙二胺四乙酸，在4℃的环境中用抗凝管以3000 r/min离心15 min后，在-80℃的冰箱内保存上清液。采血1 h内进行化验。首先将抗凝管中的血液用离心机离心，然后应用ELISA检测进行化验，对各组大鼠的AT-Ⅲ、PAF进行比较。

1.6 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，符合正态分布的采用独立样本t检验，不符合的用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

各组造模给药3 d后AT-Ⅲ、PAF及凝血指标比较 见表1。空白组与假手术组比较差异无统计学意义（P>0.05），说明手术对各项指标没有影响。化纤胶囊组、模型组与空白组比较，活化部分凝血酶原时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、AT-Ⅲ、PAF、纤维蛋白原（FIB）差异具有统计学意义（P＜0.05），说明模型组与化纤胶囊组的凝血功能均比空白组差。 化纤胶囊与模型组比较，APTT、PT、TT、AT-Ⅲ、PAF、FIB差异有统计学意义（P＜0.05），说明化纤胶囊干预组对脓毒症凝血功能障碍有明显的治疗作用。

表1 各组大鼠造模给药3 d后凝血象化验结果比较（±s）

表1 各组大鼠造模给药3 d后凝血象化验结果比较（±s）

与模型组比较，*P＜0.05；与空白组比较，△P＜0.05

组 别 n A P T T（s） P T（s） T T（s）F I B（g/L）A T-Ⅲ（%） P A F（μ g／L）空白组 1 0假手术组 1 0模型组 1 0 2 0.7 6±1.9 3 8.5 8±0.5 7 1 1.0 3±1.2 3 2 0.0 4±1.6 4 8.7 2±0.6 5 1 1.0 6±1.1 8 4 0.6 8±2.6 0△ 1 3.7 0±2.2 6△ 2 0.5 9±1.8 9△2.7 7±0.5 0 2.6 6±0.4 8 1.1 9±0.1 7△1 0 5.0 0±3.1 9 0.9 5±0.1 8 1 0 5.8 0+3.9 7 0.9 1+0.2 3 6 6.7 0+6.8 3△ 1.9 6+0.2 7△化纤胶囊组 1 0 3 1.9 1±4.2 6*△ 1 0.2 0±1.4 8*△ 1 8.0 2±2.7 9*△1.8 7±0.4 1*△8 8.7 0+8.3 6*△ 1.5 7+0.2 9*△

3 讨 论

随着医疗水平的提高许多疾病揭开了神秘的面纱，医学难题正在被逐渐地破解，可是脓毒症作为死亡率最高的疾病之一仍在危害人类的生命［5］。虽然脓毒症的发病机理尚未被完全揭示，但可以确定的是脓毒症发病与炎症、免疫、凝血等病理生理改变有十分密切的关系［6］。目前对脓毒症凝血功能异常的研究已受到国际上的重视，已经成为攻克脓毒症的主要研究方向［7-8］。脓毒症导致的凝血功能异常是多方面原因引起的，既有凝血系统的异常，也有抗凝系统和纤溶系统的异常，并且各因素之间相互促进。

近些年中西医结合治疗急危重病逐渐得到国内外的认可［9-11］。本文通信作者梁群教授从事急危重症研究20多年，在运用中药治疗脓毒症方面提出自己的一些观点［12］。关于脓毒症梁教授认为严重脓毒症阶段的中医基本病机为“瘀血阻络”，基本病因为外感六淫毒邪，脓毒症的毒邪侵犯人体后激发人体正气抗邪从而导致邪正纷争，虚实错杂，最终形成脓毒症之复杂病机［13］。六淫之中属寒邪致病最重，寒邪主收敛凝滞，寒邪侵袭人体，使得血凝脉瘀。脓毒症往往伴随发热，热邪煎熬血液使其变得黏稠，形成热壅血瘀。内热炽盛、热灼津液、灼伤血脉，致使血不能循经运行，溢出脉外成瘀血。疾病发生耗伤正气，正气虚损，不能固摄脉络之血，血不循经导致血溢脉外，出现离经之血即为瘀，最终脓毒症出现瘀血阻络。化纤胶囊是梁教授结合临床经验和中医学的基本理论针对脓毒症正虚毒损、瘀滞络脉的病因病机，运用活血、解毒、扶正的药物可发挥其多靶点治疗的特点，弥补了脓毒症在临床治疗上的不足［14-15］。化纤胶囊中黄芪为君，益气扶正要药；臣以党参、丹参、当归、川芎；佐以白术、茯苓、熟地黄；党参与黄芪合用增加其益气扶正之功，丹参、当归、川芎共奏活血解毒通经之效。茯苓助白术利水，增加健脾益肺之功，熟地黄滋阴养血，加之甘草调和药性，共同调节患者气血与脏腑功能。

AT-Ⅲ的变化影响着血液的凝固情况，AT-Ⅲ含量增加可以控制脓毒症时血液高凝的情况。PAF的含量升高代表血液出现高凝状态。本实验以“气行则血行”的理论为指导，应用益气中药使血液得以按经脉循行，加之活血化瘀解毒中药改善血液高凝状态，维持血液循环稳定使得凝血功能正常。本实验证实益气活血解毒方化纤胶囊使脓毒痛大鼠PAF含量降低、AT-Ⅲ升高，化纤胶囊组的 APTT，PT，TT，AT-Ⅲ，PAF，FIB 均优于模型组，使凝血功能得到改善。应用中药制剂改善凝血安全有效，避免应用常规西药抗凝剂引起的副作用。本实验研究为中药制剂治疗脓毒症凝血功能异常又提供了有力的依据，为中医药治疗急危重症打下坚实基础，且为中药治疗脓毒症的研究做出了贡献。