PPARα激动剂非诺贝特对高血压大鼠心室重构的影响

徐姝　张彦红

[摘要] 目的 觀察过氧化物酶体增殖物激活型受体α（peroxisome proliferator-activated receptor α，PPARα）激动剂非诺贝特对自发性高血压大鼠心室重构的影响。 方法 将20只12周龄自发性高血压大鼠（SHR）随机分为对照组（10只）及非诺贝特组（10只）。非诺贝特组大鼠给予非诺贝特60 mg/（kg·d）灌胃12周，给药期间每4周监测血压。12周后，酶法检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量，放免法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）水平，并检测大鼠的全心重量（HW）、左室重量（LVM）和左室重量指数（LVMI）。电镜观察心肌细胞超微结构的改变。 结果 非诺贝特组小鼠尾动脉血压与对照组相比略有降低，但无统计学意义（P>0.05）。非诺贝特组与对照组相比血脂水平略有降低，但无统计学差异（P>0.05）。与对照组相比，非诺贝特组全心重量（HW）、左室重量（LVM）及左室重量指数（LVMI）均降低（P<0.05）。非诺贝特组心肌细胞超微结构改变较对照组减轻。非诺贝特组血浆AngⅡ浓度与对照组比较无显著性差异，但心肌AngⅡ浓度明显降低（P<0.05）。 结论 非诺贝特能改善SHR的心室重构，其降低心肌AngⅡ浓度、保护心肌细胞结构可能为其机制之一。

[关键词] 非诺贝特；心室重构；血管紧张素Ⅱ；高血压

[中图分类号] R541.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）26-0034-04

Effect of PPARα agonist fenofibrate on ventricular remodeling in hypertensive rats

XU Shu ZHANG Yanhong

The Second Affiliated Hospital of Shenyang Medical College， Shenyang 110000， China

[Abstract] Objective To observe the effect of fenofibrate， a peroxisome proliferator-activated receptor α（PPARα） agonist， on ventricular remodeling in spontaneously hypertensive rats. Methods A total of 20 12-week-old spontaneously hypertensive rats（SHR） were randomly divided into control group（n=10） and fenofibrate group（n=10）. Fenofibrate group was given intragastric administration of fenofibrate 60 mg/（kg·d） for 12 weeks， and blood pressure was monitored every 4 weeks during the administration period. After 12 weeks， serum total cholesterol（TC）， triglyceride（TG）， high-density lipoprotein cholesterol（HDL-C） and low-density lipoprotein cholesterol（LDL-C） were detected by enzymatic method. Plasma and myocardial angiotensin Ⅱ（Ang Ⅱ） levels were detected by radioimmunoassay. The rat's total heart weight（HW）， left ventricular mass（LVW） and left ventricular mass index（LVMI） were measured. The ultrastructural changes of cardiomyocytes were observed by electron microscopy. Results The blood pressure of the tail artery of the fenofibrate group was slightly lower than that of the control group， but the differecne was not statistically significant（P>0.05）. The blood lipid level in fenofibrate group was slightly lower than that of the control group， but there was no statistical difference（P>0.05）. The whole body weight（HW）， left ventricular mass（LVW）， and left ventricular mass index（LVMI） of the fenofibrate group were lower than those in the control group（P<0.05）. The ultrastructural changes of cardiomyocytes in the fenofibrate group were alleviated compared with those in the control group. There was no significant difference in plasma AngⅡ concentration between the fenofibrate group and the control group， but the myocardial AngⅡ concentration in the fenofibrate group was significantly lower（P<0.05）. Conclusion Fenofibrate can improve the ventricular remodeling of SHR， and reducing myocardial AngⅡ concentration and protecting myocardial cell structure may be one of the its mechanisms.

[Key words] Fenofibrate； Ventricular remodeling； Angiotensin Ⅱ； Hypertension

左室肥厚是高血压病的靶器官损害之一，是心肌缺血、心律失常、心力衰竭及猝死的独立危险因素[1]，其病理学表现为心肌细胞的肥大及心肌细胞外基质的改变。近年来有研究表明，过氧化物酶体增殖物激活型受体α（peroxisome proliferator-activated receptor α， PPARα）在高血压病的心肌重构中起着重要作用，其激动剂非诺贝特能够减轻高血压引起的心肌肥厚和心肌纤维化[2-3]。本研究以自发性高血压大鼠（SHR）为研究对象，观察PPARα激动剂非诺贝特对SHR心室肥厚的影响，并探讨其可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料来源

12周雄性自发性高血压大鼠20只，体重260～280 g，购自中国医科大学实验动物中心。大鼠单笼饲养，自由食水，保持室温（20～25）℃，湿度40%～70%。大鼠无创血压仪（softron bp98）；非诺贝特购自利博福尼公司（胶囊，200 mg×10粒，批号：18858）；生理盐水为0.9%氯化钠注射液（华仁药业股份有限公司，100 mL/袋，批号：F1704041）；血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）放免试剂盒（北京奇松生物科技公司）；血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测试剂盒（南京建成生物研究所）。

1.2 分组及用药方法

将SHR随机分为两组，每组10只。非诺贝特组予非诺贝特60 mg/（kg·d）灌胃给药；对照组予等量生理盐水灌胃，每日1次，连续12周。

1.3血压测量

使用大鼠无创血压仪（softron bp98）于给药前及给药后4周、8周及12周测量大鼠尾动脉血压。

1.4 标本采集

（1）实验结束用10%水合氯醛处死大鼠，腹主动脉抽血6 mL。其中3 mL 2000转/min，离心10 min，抽血清用于血脂水平检测。3 mL置入预冷的含抑肽酶及EDTA的抗凝管内混匀，4℃冰箱内静置2 h，以3000 转/min离心20 min，抽取血浆用于AngⅡ含量检测。以上标本置于-40℃冰箱保存待测。（2）取血后迅速取出心脏，生理盐水清洗，去除周围大血管，滤纸吸干，称取全心重量（HW），剪去左右心房及右室游离壁，称取左室重量（LVM），以左室重量指数（左室重量与体重比值，LVMI）反映左室肥厚程度。取左心室游离壁心肌组织0.2 g，加入0.9%生理盐水1.8 mL充分研磨，制成10%的心肌组织匀浆，按3000转/min离心20 min，取上清冷冻保存待测。取左心室心肌组织，0.1 mol/L PBS缓冲液漂洗后，2%戊二醛前固定（pH 7.2），1%四氧化锇溶液（pH 7.2）后固定，经梯度酒精丙酮系列脱水后，环氧树脂浸透、包埋，瑞典LKB超薄切片機切片。心肌切片用醋酸铀及柠檬酸铅染色后， JEOL-100透射电子显微镜观察。

1.5 统计学处理

用SPSS 11.5 软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差表示，两组均数间比较采用t检验。检验水准α=0.05，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 非诺贝特对自发性高血压大鼠血压的影响

实验前两组大鼠间尾动脉血压无差异，实验过程中两组血压逐渐升高，实验结束时非诺贝特组血压较对照组略降低，但无统计学差异，见表1。

2.2非诺贝特对自发性高血压大鼠血脂的影响

实验结束后两组血浆总胆固醇水平（TC）、高密度脂蛋白水平（HDL-C）及低密度脂蛋白水平（LDL-C）无明显差异，非诺贝特组血浆甘油三酯水平（TG）略低，但无统计学差异，见表2。

2.3非诺贝特对自发性高血压大鼠心脏重量的影响

实验结束后非诺贝特组较对照组全心重量（HW）、左室重量（LVM）及左室重量指数（LVMI）均有下降（P<0.05），说明非诺贝特能够改善SHR的心室肥厚。见表3。

2.4 非诺贝特对自发性高血压大鼠AngⅡ的影响

实验结束后非诺贝特组与对照组血浆AngⅡ水平无统计学差异，而心肌AngⅡ水平低于对照组（P<0.05）。见表4。

2.5对心肌细胞超微结构的影响

实验结束后透射电镜观察两组大鼠心肌切片，对照组可见肌丝排列稀疏、紊乱，肌原纤维灶性溶解，间质胶原纤维增生。线粒体增生，大小不一，嵴减少或消失。核呈不规则形，偶见核质边集现象（封三图2）。非诺贝特组心肌超微结构改变较对照组减轻，仅有部分肌原纤维排列紊乱，肌原纤维间间隙增宽，部分线粒体水肿，嵴断裂，无肌原纤维灶性溶解。横纹清楚，间质胶原纤维无明显增生，说明非诺贝特可改善SHR心肌超微结构的改变（封三图3）。

3讨论

心室重构是高血压的重要病理变化，该病理变化主要表现为心肌细胞增殖、肥大及间质纤维化[4]。目前已有多个动物实验[5，6]证实SHR大鼠存在心室重构，在本实验结束后可见24周时SHR心肌细胞核膜不完整，线粒体肿大，紊乱，嵴减少或消失，肌原纤维模糊排列紊乱，横纹不清，间质胶原纤维增生，说明24周SHR心肌细胞已发生心肌重构。有研究发现PPARα激动剂在压力超负荷动物模型短暂应用可减轻心肌肥厚[7]。本研究证实通过PPARα激动剂非诺贝特干预后，SHR左室重量及左室重量指数较对照组减低，且心肌细胞电镜结构变化较对照组减轻，说明非诺贝特能延缓SHR的心肌重构及左室肥厚。

PPARα是核受体超家族成员之一，能够调节脂肪酸和糖类代谢，对细胞的生长、分化、心血管氧化应激和炎性反应都有调控作用[8]。有研究表明在肥厚心肌中PPARα活性减低，说明其参与了心肌重构[9]。通过本实验也证实了PPARα激动剂非诺贝特可干预SHR的心肌重构，其中的具体机制尚不清楚。我们认为线粒体脂肪酸β 氧化是ATP产生的主要来源，PPARα活性降低，将导致脂肪酸β氧化供能能力减低，从而影响心肌的能量代谢。而非诺贝特可通过激活PPARα促进脂肪酸β氧化，增加心肌能量供应，改善心肌细胞重构。

另一方面，目前已證实在高血压病患者中存在血管紧张素醛固酮系统过度激活及AngⅡ过度分泌。高AngⅡ水平不仅有升压作用，同时还可直接促进心肌细胞RNA和蛋白质的合成[10]，促进纤维细胞增殖[11]，引起心肌重构。在本实验中SHR血浆AngⅡ水平无明显变化，而心肌细胞内AngⅡ水平下降，机制不清。但这也符合非诺贝特对SHR血压无影响的实验结果。心肌重构主要是胶原生成和降解两方面的失衡及胶原特性、构型和排列等异常改变的结果。胶原的生成和降解受许多因素的影响和基因调控，受多个通路的调节，主要有AngⅡ系统及其信号传导通路、生长因子及其信号传导通路、儿茶酚胺及其信号传导通路。非诺贝特可能是通过AngⅡ系统影响心肌重构，具体机制需进一步研究。同时我们还注意到，在非诺贝特组及对照组间血脂无明显差异，甘油三酯水平也没有明显下降，考虑这可能与实验时各组大鼠基线血脂水平不高及用药时间偏短有关。但这同时也说明非诺贝特对心室重构的影响与血脂无关。

综上，PPARα激动剂非诺贝特除降低血脂外，还能够调节心肌能量代谢，延缓心室重构，进一步可降低心血管疾病发病率及病死率[12-15]。本研究为PPAR-α激动剂在临床的新用途提供了有力的证据支持。但是，该药物影响心室重构的机制仍需深入研究。

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（收稿日期：2018-04-27）