片姜黄产地加工与传统加工在痛经模型中的等效研究

陶瑛妮 罗云云 杜伟锋 葛卫红⋆

片姜黄为姜黄植物温郁金的干燥根茎。温郁金的不同部位采用不同加工方法可制成的三种不同的中药，原植物温郁金的干燥块根蒸或煮至透心后作温郁金入药，其根茎鲜品蒸或煮至透心后作温莪术入药，其根茎鲜品直接切片则作片姜黄入药［1］，三种不同的中药虽均有活血化瘀的作用，但在临床使用中仍有一定的差异。现代药理认为痛经是前列腺素等相关激素的改变导致子宫强烈痉挛，以前列腺素E2（PGE2）、前列腺素F2α（PGF2α），血管加压素（AVP），β-内啡肽（β-EP）为主，活血化瘀中药能够通过调节诸多激素水平的变化达到改善微循环、扩张血管或加快血流的作用，对于缓解疼痛具有重要意义［2-3］。2017年9月至2018年3月作者通过实验研究，探讨片姜黄产地加工与传统加工在痛经模型中的等效性。

1 材料和方法

1.1 试验药物 片姜黄原药材采自浙江温州瑞安市陶山镇，经浙江中医药大学中药饮片有限公司质检科鉴定为姜科植物温郁金的干燥根茎，为传统趁鲜切制的饮片之一。传统加工方法为植物温郁金冬季茎叶枯萎后采挖，取其主根和侧根，洗净，除去须根，趁鲜切纵厚片，晒干或阴干至恒重，即得；产地鲜切加工方法为植物温郁金冬季茎叶枯萎后采挖，取其主根和侧根，洗净，除去须根，趁鲜切纵厚片，55℃恒温鼓风干燥，即得。

1.2 动物 清洁级雌性ICR小鼠108只，6～8周龄，体重（28±2）g，由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（沪）2013-0016。饲养环境温度20～25℃，湿度40%～60%，12h/12h光亮/黑暗条件。

1.3 试剂 苯甲酸雌二醇（上海创赛科技有限公司），注射用大豆油（上海创赛科技有限公司），缩宫素注射液（上海禾丰制药有限公司），痛经宝颗粒（河南宛西制药股份有限公司），前列腺素E2（PGE2）ELISA检测试剂盒、前列腺素F2α（PGF2α）ELISA检测试剂盒（均购自美国Cayman化学试剂有限公司，血管加压素（AVP）ELISA检测试剂盒，β-内啡肽（β-EP）ELISA检测试剂盒（均购自上海酶联试剂有限公司）。

1.4 仪器 数显电子恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司），Al-204型电子分析天平（瑞士梅特勒托利多仪器有限公司），BP210S型1/10万电子天平（瑞士Sartorius公司），KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司），Powerwave340酶标仪（美国 BIO-TEK公司）；MICROCL17微量离心机（美国Thermo公司）。

1.5 方法 （1）实验样品制备：取不同加工片姜黄饮片各105.3g，加10倍量水，水浴加热回流1h，取滤液，再加10倍量水，水浴加热回流1h，合并滤液，浓缩至300ml，得片姜黄水提液0.39g/ml（高剂量），再加水稀释至0.26g/ml（中剂量）、0.13g/ml（低剂量）；取痛经宝颗粒20g加水51ml，得0.39g/ml阳性药，灌胃量均为0.1ml/15g。（2）痛经模型构建与给药：①分组：108只ICR小鼠适应性喂养1周后，小鼠编号，然后按照随机数字法则分为9组，分别为正常组、模型组、阳性药组［痛经宝颗粒2.6g/（kg·d）］，鲜切片姜黄高剂量组［3.51g/（kg·d）］、鲜切片姜黄中剂量组［2.34g/（kg·d）］，鲜切片姜黄低剂量组［1.17g/（kg·d）］，传统片姜黄高剂量组［3.51g/（kg·d）］，传统片姜黄中剂量组［2.34g/（kg·d）］，传统片姜黄低剂量组［1.17g/（kg·d）］。每组各12只。②造模：除正常组外，其余各组连续15d于上午9时皮下注射苯甲酸雌二醇溶液［第1天和第15天给予2.5mg/（kg·d），第2～14天给予1mg/kg·d］，正常组注射相应剂量大豆油；在第4天给予苯甲酸雌二醇1h后开始给药，各组均灌胃给予受试药，1次/d，连续12d，模型组和正常组给予等体积生理盐水；最后1次灌胃40min后，腹腔注射缩宫素20U/kg，记录30min内扭体次数。（3）子宫匀浆中PGE2、PGF2α和血清中AVP、β-EP活性检测：扭体计数后，小鼠眼眶取血1.5ml，离心取血清，眼眶取血后小鼠脱颈处死，再取0.1g于900μl生理盐水中，匀浆取上清液；按照试剂盒说明书要求分别测定PGE2、PGF2α、AVP、β-EP活性。

1.6 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，多组间比较用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外观区别 传统片姜黄饮片外皮呈灰黄色，粗糙皱缩，有可见的环节及须根痕。切面呈棕灰色，有一圈环纹及多数筋脉小点，质脆而坚实。断面灰白色至棕黄色，略粉质，气香清新特异。鲜切片姜黄饮片外皮呈灰黄色至棕黄色，粗糙皱缩，有可见的环节，须根痕对比传统片姜黄饮片较不明显，切面呈棕黄色，颜色较传统片姜黄饮片更加鲜艳，有一圈环纹及多数静脉小点。断面呈棕黄色，略粉质，气香浓厚［4］。

2.2 姜黄对痛经模型小鼠的镇痛作用 见表1。

表1 各剂量组片姜黄对痛经模型小鼠的镇痛作用（±s）

表1 各剂量组片姜黄对痛经模型小鼠的镇痛作用（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.01；与正常组比较，#P＜0.01

组别 剂量（g/kg） 痛经扭体次数模型组 - 40.125±5.939#阳性药组 2.6 9.250±3.955*#传统片姜黄低剂量 1.3 13.250±5.751*#传统片姜黄中剂量 2.6 10.000±6.590*#传统片姜黄高剂量 3.9 8.375±4.689*#鲜切片姜黄低剂量 1.3 14.125±6.490*#鲜切片姜黄中剂量 2.6 10.375±7.249*#鲜切片姜黄高剂量 3.9 8.875±5.330*#正常组 - 0*

2.3 各组PGE2、PGF2α、AVP、β-EP测定结果比较 见表2、图1、2。

表2 各组PGE2、PGF2α、AVP、β-EP测定结果比较（±s）

表2 各组PGE2、PGF2α、AVP、β-EP测定结果比较（±s）

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与正常组比较#P＜0.05，##P＜0.01

组别 PGE2（pg/ml） PGF2α（pg/ml） PGF2α/PGE2 β-EP（pg/ml） AVP（pg/ml）模型组 22.28±3.10## 85.52±19.11## 4.23±1.08## 5.86±0.70## 17.41±1.77##痛经宝颗粒组 13.78±4.18** 47.08±6.67**## 2.82±0.34**## 9.32±1.27** 10.99±1.14**传统片姜黄低剂量 17.61±1.78**## 59.08±8.41**## 3.19±0.15**## 7.21±0.97*## 14.03±1.32**##传统片姜黄中剂量 17.40±2.42**## 54.99±8.84**## 2.77±0.34**## 7.83±1.18**## 12.95±1.48**##传统片姜黄高剂量 17.11±0.81**## 52.50±7.16**## 3.12±0.23**## 8.84±1.12**# 12.29±0.91**##鲜切片姜黄低剂量 18.84±4.14*## 54.08±13.36**## 3.08±0.55**## 7.81±1.10**## 14.14±1.13**##鲜切片姜黄中剂量 17.21±2.81**## 52.30±6.28**## 3.07±0.32**## 7.72±1.15**## 13.55±1.37**##鲜切片姜黄高剂量 16.35±2.28**## 54.35±12.44**## 3.60±0.36**## 8.21±0.91**## 12.92±1.02**##正常组 11.28±3.89** 28.80±8.47** 2.00±0.15** 9.99±0.93** 7.87±0.95**

图1 PGE2、PGF2α比较

图2 扭体次数与AVP比较

3 讨论

张晓东认为“痛经”有虚实寒热，核心为瘀，因体内气血阴阳的平衡被打破，致气滞、寒凝、热结、湿积、气血阴阳亏虚等证，同致为瘀；瘀阻致阳气运行受阻，胞宫失于阳气的温煦，胞宫阳气不足，内寒自生；瘀则不通，不通则痛［5］。而片姜黄作为常用的活血化瘀药，具有破血行气，通经止痛功效。对于血瘀气滞具有较好的治疗作用。

本资料显示，模型组的扭体次数和PGE2、PGF2α及AVP含量高于正常组和治疗组，而β-EP含量低于治疗组和正常组。文献研究指出前列腺素（PG）合成和分泌过多，一直被医学界认为是原发性痛经的重要机制，子宫内膜上的螺旋动脉壁中含有PGF2α的作用受体，当其与这些受体作用时，可引起子宫血管收缩，子宫体的供血也会受到影响，导致子宫血供减少，也会发生不可避免的疼痛。而PGE2则是让子宫停止收缩和促进子宫舒张，这两者一张一弛，共同调控子宫活动［6-7］。且在经行期间PGF2α/PGE2比值也相对高，使子宫肌层活动加强，但PGF2α增加程度高于PGE2，比值的升高促使子宫平滑肌收缩，子宫血流量降低，继而发生强烈的痉挛性收缩效应，造成疼痛。血管加压素AVP作为子宫肌收缩的必需因子，可作用于子宫 V1 加压素受体，引起子宫肌层活动增强和子宫收缩，尤其可引起子宫肌层小血管收缩，引起缺血和疼痛［9］。刺激原发性痛经患者加压素分泌可导致子宫收缩活性增加，加重痛经症状。另一方面加压素可直接促进 PGs 的生成，增强子宫平滑肌对宫缩药物的敏感性，使子宫血运减少从而引发原发性痛经［8］。β-内啡肽（β-EP）是一类具有吗啡样活性的神经多肽，具有内源性镇痛作用，子宫是其作用的靶器官之一。β-EP浓度的上升可缓解子宫肌痉挛，舒张子宫血管，改善子宫血流变，达到解除或缓解疼痛的目的［9］。

片姜黄作为莪术类药材，莪术油及其莪术醇、莪术二酮、吉马酮、榄香烯及姜黄素等组分是药理作用的物质基础。使其具有较好的抗肿瘤、抗炎镇痛、抗血栓凝血、增强机体免疫等作用［10］。其中莪术二酮能够抑制体内血栓的形成，具有抗凝血的作用，姜黄素具有较好的活血祛瘀的作用。本资料结果表明两种加工方法对片姜黄在通经止痛等效，且产地鲜切加工采用烘干法，节省干燥时间，提高加工效率，降低生产成本，能够减少其长时间暴露在空气中的二次污染，更具安全性。