婴幼儿乳粉和保健食品中肉碱对映体的拆分及HPLC测定

斯菲菲 朱丹丹 黄渭

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L-肉碱与D-肉碱是两种形式不同的肉碱立体对映异构体，前者具有良好的生物活性，后者则能抑制线粒体内的能量形成及脂肪酸氧化，并引起心肌和骨骼肌中的L-肉碱功能性损耗，从而易导致人体出现肌肉无力和心律失常等，并且，其还会降低人体的运动耐力，可见，D-肉碱对人体的生化过程会产生较多的毒副作用，基于此，就有必要对婴幼儿乳粉和保健食品中肉碱对映体进行测定，才能促进其更好的生长发育，免受D-肉碱的侵害[1]。

1 实验仪器及方法

1.1 实验仪器及试剂

实验仪器：安捷伦1260荧光检测器、安捷伦1260高效液相色谱仪、紫外检测器、恒温水浴箱、电子天平(精确度为万分之一)、超声脱气机、电子天平、0.45μm微孔滤膜、移液枪。实验试剂：D-肉碱内盐、L-肉碱标准品、三乙胺、磷酸、乙腈、碳酸氢钠、无水碳酸钠、盐酸、1-(9-芴基)-氯甲酸乙酯、四氢呋喃、甲醇、无水乙醇。

1.2 方法

乳粉测定方法：将15g奶粉样品置入30mL去离子水中溶解，并放入50°C水中进行15分钟水浴，再用超声波处理10分钟，将获取的样品试剂与0.1mol/L盐酸溶液混合均匀，静置10分钟后用自然滤纸过滤，用去离子水洗涤滤渣，然后，用1mol/L碳酸氢钠溶液进行调节，至PH为6左右。完成上述样品预处理后，用10mL容量瓶取60μL样品溶液，并加入30μL碳酸缓冲液及1-（9-芴基）-氯甲酸乙酯试剂，再将容量瓶塞塞上并缓慢旋转，然后，将容量瓶放置在45°水浴中浸泡1小时取出，待样品溶液冷却至室温后，用去离子水将此溶液定容至10mL，再用0.45μm微孔滤膜加压过滤，最后对制备的样品溶液进行HPLC紫外检测。

保健食品测定方法：称取5g保健食品样品，用无水乙醇溶解，再置于100mL容量瓶中，用超声波处理10分钟后，再用无水乙醇定容至100mL，采用3000r/min离心机对样品溶液离心10min，取0.5mL上清液进行衍生化反应。将0.5mLD/L肉碱标准液移取至具塞试管中，再依次将0.5mL5g/L三乙胺三氯甲烷溶液、0.5mL2g/L氯甲酸乙酯三氯甲烷溶液及0.5mL4.5g/LL-Ala-β-NA乙醇溶液加入到试管中，混合均匀后将其放置在35°水浴锅内1小时，取出后，再加入50mmol/L碳酸氢钠水溶液，作离心处理后，将上层水转移至带刻度试管中，用碳酸氢钠溶液定容，并用0.45μm微孔滤膜加压过滤，最后进行高效液相色谱测定。

2 结果

2.1 乳粉样品中肉碱对映体的检测情况

通过分析样品的衍生溶液色谱分析图可知，L-肉碱和D-肉碱衍生物峰的保留时间分别为28min、25min。为证实检测方法的实用性和有效性，笔者根据上述实验方法对三种市售婴幼儿乳粉(贝因美婴儿乳粉、雀巢全脂甜奶粉、多美滋多学一加奶粉)进行了检测，经检测，三种乳粉中均检测出L-肉碱，含量分别为28.5、12.9、29.0（mg/100g），其中，贝因美和多美滋乳粉中的L-肉碱含量均符合营养标签的标识值（≥10mg/100g）,三种乳粉中均未检测出D-肉碱，说明本次检测的三种市售婴幼儿乳粉均符合婴幼儿乳粉食用标准要求。

2.2 保健食品中肉碱对映体的检测情况

为验证检验方法的实用性和有效性，并突出衍生化反应条件及色谱条件对检测方法的应用，笔者分析采用HPLC-UV法对10种婴幼儿保健食品进行检测，保健食品的进样量均为10μL，经检测，10种保健食品中L-肉碱含量分别为10.9、10.6、6.4、25.0、16.6、12.2、8.1、20.8、-、-（g/100g），其中 - 代表未检测到 L- 肉碱，10种保健食品中均未发现D-肉碱，说明检测的10种保健食品均符合婴幼儿保健品要求。

3 讨论

L-肉碱与D-肉碱是两种形式不同的肉碱立体对映异构体，其中，L-肉碱（左旋肉碱）因具有良好的营养保健功效，因此，现已被广泛应用作为婴幼儿配方食品的营养强化剂，而D-肉碱（右旋肉碱）已被证实对人体有害，而在实际提取含肉碱的工业生产过程中，若对L-肉碱提纯不净，便会导致D-肉碱存在食物或人们食用的食品中，从而对人体的健康安全构成一定的威胁，因此，需积极探寻有效的方法测定肉碱对映体的含量[2]。

目前，医学临床常采用HPLC法对肉碱含量进行测定，该种检测方法具有操作简便、可靠性和灵敏度高等特点，能够快速检测和筛选出人体或食品中是否缺乏肉碱，但是，采用HPLC直接分析法不具有立体异构特异性。

本研究中，通过对三种市售婴幼儿乳粉（贝因美婴儿乳粉、雀巢全脂甜奶粉、多美滋多学一加奶粉）进行了检测，经检测，三种乳粉中均检测出L-肉碱，未检测出D-肉碱，说明本次检测的三种市售婴幼儿乳粉均符合婴幼儿乳粉食用标准要求。通过采用HPLC-UV法对10种婴幼儿保健食品检测，均未发现D-肉碱，说明检测的10种保健食品均符合婴幼儿保健品要求，说明HPLC测定方法能有效拆分L-肉碱与D-肉碱，并分别检测其含量，从而为婴幼儿食品安全检测提供有效的参考。