腹腔镜技术与传统手术方法在绵羊胚胎移植中的应用对比

葛守宏，王 斌，张知侠，刘炳琪,*

(1.靖边县草业综合服务中心、靖边县北方牧业开发公司，陕西 靖边 718500；2.西北农林科技大学动物医学院； 3.西北农林科技大学动物科技学院)

胚胎移植又称受精卵移植或借腹怀胎，是指通过一系列技术手段将优良母畜的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他母畜体内，使之继续发育为新个体的技术。提供胚胎的个体称为供体，接受胚胎的个体称为受体，包含同期发情和超数排卵两个关键技术。自1890年英国剑桥大学Walter Heape首次获得兔受精卵移植成功至今，胚胎移植已发展成为一项比较成熟的动物辅助生殖技术。

腹腔镜的组成主要包括硬质套管窥镜、冷光源、摄像系统、气腹机和高频发生器、冲洗/吸引设备六部分，目前兽用腹腔镜主要包含硬质套管窥镜、冷光源、气腹机三个部分。腹腔镜手术，是指利用腹腔镜及其相关器械进行的手术,使用冷光源提供照明，将腹腔镜镜头插入腹腔，根据需要清晰观察定位腹腔内特定各组织和器官，并利用特制器械在腹腔内或者将组织器官夹至体外完成手术目标的过程。国内腹腔镜技术在兽医领域的应用起步较晚，国内动物腹腔镜技术主要应用生殖系统，卵巢、卵泡、黄体及胚胎发育情况观察，或在人工受精、胚胎移植过程中简单地使用而已。

绵羊胚胎移植手术成功率受气候、药物、处理程序、个体差异、术后感染等诸多因素影响，手术操作方法可能也能对试验结果造成一定影响。本试验将传统手术方法与腹腔镜手术方法两者进行对比，将对腹腔镜技术在绵羊胚胎移植中的应用效果进行一较为全面的评价，以期为临床生产提供一定指导。

1 试验材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物 供体羊为20头经产健康体格相近黑头萨福克绵羊，10头一组随机分为两组；受体羊为200头经产健康小尾寒羊，随机分为两组，各100头；种公羊为25头成年健康黑头萨福克羊，由当地种羊场提供。

1.1.2 试验主要仪器设备 腹腔镜及其配套设备(Austvet，澳大利亚生产)、体视显微镜(OLYMPUS，型号SZX7)、常规外科器械、水浴锅、恒温箱、加热板、进口套管针、兽用B超(郑州博祥来，型号BXL-V30)等。

1.1.3 试验所用药品 兽用亚硒酸钠维生素E注射液为天津保灵动物保健品有限公司生产，羊用孕激素阴道缓释装置(CIDR)产自澳大利亚Zoetis有限公司，氯前列醇钠(PG，0.2 mg×10支)、垂体促卵泡素(FSH，100 IU×10支)、促黄体素释放素A3(LHRH-A3，25 μg×10支)均购自宁波第二激素厂，进口FSH为加拿大生产FOLLTROPIN-V，冲胚液和胚胎保存液产自美国ICP公司，速眠新购自吉林康达动物药业有限公司、鹿醒宁购自吉林华牧动物保健品有限公司，酒精、碘酒、新洁尔灭、生理盐水、青霉素、链霉素等用品由兽医室提供。

1.2 试验方法

1.2.1 试验前期准备 将胚胎移植所选供体、受体羊分别进行随机分组、标记，于试验前一周为每头羊颈部肌肉注射5 mL亚硒酸钠维生素E。按照腹腔镜胚胎移植操作和传统胚胎移植操作两种不同操作方法分别标记为A组(腹腔镜组)、B组(传统手术组)，两组所用药品和处理程序均一致，前期处理和手术操作B组均比A组推迟1 d进行。

1.2.2 供体羊的预处理 对供体羊臀部肌肉注射1 mL PG，约36 h后种公羊试情，观察记录供体的发情状况。

1.2.3 同期发情和超数排卵 同期发情过程应用CIDR、FSH、PG完成，CIDR栓在羊阴道内放置11 d，于撤栓前1 d早晚各注射一次FSH，次日撤栓同时注射PG；供体超数排卵主要应用进口FOLLTROPIN-V，采用连续递减注射法进行处理。处理完成后对受体羊早晚各试情一次并标记隔离发情个体，供体羊撤栓后进行试情和配种工作，于第一次发情后约12 h开始配种工作，第一次配种后肌肉注射1 mL LHRH-A3。

1.2.4 术前准备 术前供体、受体羊术部剃毛，试验羊群于手术前禁饲24 h，同时进行手术场地的清洁消毒，手术物品高压灭菌。

1.2.5 供体冲胚 在供体第一次配种后第6 d进行，采用子宫角冲胚法，术前麻醉剃毛后，将供体保定于手术架，麻醉后于乳房前缘腹中线处按常规手术方法打开腹腔，将子宫体和卵巢牵拉至体外进行子宫角冲胚，而后子宫体生理盐水冲洗后还纳至腹腔，缝合创口术部消毒后注射鹿醒宁。两组供体羊冲胚方法和手术人员均相同。

1.2.6 检胚 将冲卵液回收之后，尽快置于体视显微镜下，观察记录收集到的胚胎数量、形态及质量，洗涤后将有效胚胎收集分装备用。

1.2.7 受体胚胎移植

(1) 腹腔镜移植方法。用手术刀或腹腔镜打孔器在距离左右两侧乳房前缘约5 cm，距离腹正中线约3 cm处左右两侧各纵向切开一长度约1 cm的切口，穿透腹膜即可；从左侧切口插入腹腔镜目镜，右侧切口插入腹腔镜，借助腹腔镜和子宫钳的移动配合，在受体体内观察子宫、卵巢形态，将黄体状态良好、适宜移植的一侧的子宫角用子宫钳夹至腹腔外，而后迅速在子宫角注入胚胎。移植结束，用子宫钳将子宫角还纳入腹腔，左右切口各做一针结节缝合，穿透皮肤、肌肉、腹膜即可；术后注射鹿醒宁，术部喷洒碘酊消毒，术后注射3～5 d抗生素。

(2) 传统手术法胚胎移植。术前准备后，按常规手术方法沿乳房前缘腹中线处做一切口打开腹腔，将子宫体和卵巢牵拉至体外，选择黄体状态良好一侧的子宫角移植胚胎，而后还纳子宫至腹腔缝合创口，手术完成后注射鹿醒宁，术部消毒，术后注射3～5 d抗生素。

1.2.8 受体羊术后妊娠诊断 受体羊移植胚胎后，一般采取用种公羊对受体羊试情的方法，连续2个情期不返情的受体羊，即可判定受体羊发生妊娠反应。本次试验采用试情结合兽用B超仪对受体羊进行妊娠诊断。

2 试验结果

2.1 同期发情结果

同期发情处理结束后，利用种公羊对供受体进行试情，记录发情结果如下。

表1 同期发情结果统计

2.2 供体超数排卵结果

于手术当 d进行供体手术冲胚，未受精、发育不良均判定为无效胚胎，两组试验供体检胚获得以下结果：

表2 A组供体超排结果

表3 B组供体超排结果

2.3 受体移植结果

A组受体为腹腔镜移植组，B组为传统手术方法移植组，移植后至产羔完全结束收集两组受体羊创口大小、术后感染、手术用时、受胎率、产羔率等数据，现将结果记录如下：

表4 两组受体胚胎移植结果

3 分析与讨论

本次试验过程中，两组供受体均相同人员使用相同操作方法进行试验，最大程度避免人为误差。由试验结果可知，腹腔镜组受体移植受胎率(68.9%)高于传统手术方法(61.9%)，同时使用腹腔镜技术具有快速、创口小、出血少、应激反应小、手术感染风险低等优势。在绵羊胚胎移植过程中，除自然因素外，人为操作也可对其结果产生较大影响，而腹腔镜操作主要借助医学仪器为工具，只要操作者经过严格培训熟练掌握该技术，在一定程度上可降低人为因素对结果造成影响；由于可以通过目镜直接在体内观察黄体状态，可在最短时间内将移植侧子宫角夹至体外进行胚胎移植，减少胚胎在体外生存时间降低胚胎死亡和污染风险；另外，由于创口小出血少的特点，可有效降低受体移植后子宫黏连发病率，能够提高受体羊的重复使用率和使用年限。但是腹腔镜技术在绵羊胚胎移植手术中使用也有其限制，与子宫角胚胎移植相比，输卵管移植手术中使用腹腔镜技术操作难度较大，笔者将在以后探究腹腔镜手术在输卵管移植中的操作方法和应用效果。

胚胎移植是加快优良种畜繁殖和改良速度的有效手段，在绵羊的繁殖过程中具有重要地位，而随着科学技术的发展，腹腔镜技术在绵羊胚胎移植技术中的应用将更为普遍。本试验通过将腹腔镜和传统手术方法在规模化羊场胚胎移植中进行比较，对于腹腔镜技术的应用具有重要参考意义。