哺乳幼獐大肠杆菌和松鼠葡萄球菌混合感染的病原鉴定及诊治初报

2018-12-20徐海军左瑞华张圣尧杨先保王广林

西北农业学报 2018年11期

徐海军，左瑞华，张圣尧，杨先保，王广林

(1.皖西学院健康养殖与动物疫病监测预警工程技术中心，安徽六安 237012；2.安徽金丰源畜牧科技有限公司，安徽六安 237010；3.皖西学院分析测试中心，安徽六安 237012)

獐，又名河麂、牙獐，是哺乳纲偶蹄目鹿科的一种小型鹿类，主要分布于长江中下游和东南沿海各省，现存数量不多，为中国二类保护野生动物。獐的皮、骨、肉都有很高的食用和药用价值。幼獐吮吸的母乳在胃中结积的奶块(民间俗称“獐宝”)，是数百年来在江浙太湖流域民间广泛应用的名贵药材，主治小儿疳积等消化不良症，功效显著[1-2]。目前在中国已有少量养獐场，养殖效益较好[3-4]。由于獐的人工驯养时间较短，对獐的一些疾病还认识不足，严重影响养獐业的健康发展。本文报告一例哺乳幼獐大肠杆菌和松鼠葡萄球菌混合感染的病原鉴定及诊治过程，供相关人员参考。

1 材料与方法

1.1 试剂和药品

胰大豆蛋白胨琼脂购自北京奥博星生物技术有限责任公司，细菌药敏试纸购自杭州微生物试剂有限公司，革兰氏染色液购自杭州天和微生物试剂有限公司，革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌检测卡购自法国梅里埃诊断产品(上海)有限公司，头孢曲松钠购自齐鲁安替制药有限公司，白龙散购自河南超牧兽药有限公司。

1.2 主要仪器

立式压力蒸汽灭菌器 (上海博迅实业有限公司医疗设备厂)，SW- CJ- RD 双人单面净化工作台(苏州净化设备有限公司)，STT-P-A系列智能生化培养箱(合肥华德利科学器材有限公司)，DGT-G系列电热恒温鼓风干燥箱(合肥华德利科学器材有限公司)，VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪(法国梅里埃诊断产品(上海)有限公司)：电子天平(上海越平科学仪器有限公司)。

1.3 病例来源

六安市某养獐场发病幼獐。

1.4 方法

1.4.1 病史调查 2018-06-13六安市罗集乡某养獐户送检2只哺乳幼獐(1只死亡，1只存活)。通过询问养殖户，对整个发病过程进行调查。

1.4.2 临床症状和病理解剖观察观察送检活獐的临床症状。剖检送检的死獐，观察病变。

1.4.3 细菌分离、鉴定及药敏试验剖检时无菌采集 2 只幼獐的肺脏和肝脏组织，涂擦接种于胰大豆蛋白胨琼脂平板，37 ℃培养18 h。对分离菌进行革兰氏染色镜检，并用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪细菌学专家系统鉴定，然后进行药敏试验。

1.4.4 防治措施根据药敏试验结果选择敏感药物对病獐进行治疗，对同窝幼獐进行预防性给药。在母獐饲料里添加白龙散进行预防。同时做好消毒工作，保持饲养场所卫生良好。

2 结果与分析

2.1 病史调查

经了解，该养殖场共存栏大小獐100多只，采用自繁自养养殖方式。近期有 2 窝幼獐陆续发病，症状主要表现为严重腹泻(但也有个别獐未见腹泻)、腿无力瘫软、侧卧在地，常抽搐。按照乡村兽医的建议给2 头病獐肌注恩诺沙星进行治疗，但注射恩诺沙星后不久1 头幼獐死亡，另1 头幼獐病情没有好转，遂带来送检。次日又出现2 头幼獐发病。发病幼獐还未断奶，但给其哺乳的母獐均无发病。

2.2 临床症状和病理剖检

送检死獐的主要病变为心内膜有一小出血斑；肺部有数个散在小出血斑，直径约1 mm。其他未见明显异常。因为每只幼獐价值4 000元以上，比较贵重，所以对另1 只存活的幼獐没有立即剖检，而是采用静脉滴注葡萄糖酸钙(曾怀疑可能患有缺钙)、50 g/L葡萄糖生理盐水、胃复安、西米替丁、地塞米松和头孢曲松钠进行抢救。但次日早上，该只幼獐仍然死亡。死前体温降低，并多次出现角弓反张样神经症状(图1)。对其进行剖检，但未观察到明显病变。

2.3 细菌分离、鉴定及药敏试验

从第1只幼獐的肺脏和肝脏分离到较多细菌，且从肺脏中分离到的细菌数量明显多于肝脏(图2)，经涂片染色镜检发现，肝脏组织和肺脏组织中分离到的细菌形态相同，且药敏试验结果相似(图3)，说明从2种组织中分离到的细菌为同一种细菌；第2只幼獐肝脏组织接种区在培养18 h 后仅长出2个灰白色菌落，与从第1只幼獐2种组织中分离细菌的菌落、菌体形态一致，但肺脏组织接种区在培养18 h后只长出较多细小菌落(图4)，延长培养时间至42 h后菌落才较大。

图2 从第1只幼獐肝脏组织和肺脏组织中分离到的细菌(37 ℃培养18 h)Fig.2 Bacteria isolated from liver and lung tissue of first young Chinese water deer(37 ℃, 18 h)

菌.头孢曲松 Ceftriaxone；丁.丁胺卡那 Amikacin；多.粘杆菌素 Colistin；恩.恩诺沙星 Enrofloxacin；强.强力霉素 Doxycycline ；尼.氟苯尼考 Florfenicol

图3从第1只幼獐肝脏组织和肺脏组织中分离到的细菌的药敏试验结果
Fig.3ResultsofdrugsensitivitytestofbacteriaisolatedfromliverandlungtissueoffirstyoungChinesewaterdeer

因此，从第1头獐和第2头獐上分别分离到1种和2种细菌。将第1头獐肺脏、肝脏和第2头獐肝脏组织中分离到的细菌命名为细菌1，将第2头獐肺脏组织中分离到的细菌命名为细菌2。2种细菌传代培养后菌落形态相似，为圆形、边缘整齐、隆起、表面光滑湿润、不透明、灰白色，但细菌2的菌落在培养时间延长后变为浅黄色。2种细菌分别制成细菌涂片，革兰氏染色后镜检，发现细菌1为革兰氏阴性短杆菌(图5)，细菌2为革兰氏阳性球菌(图6)。

使用革兰氏阳性和阴性细菌生化鉴定卡，用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪细菌学专家系统鉴定，根据细菌64 种生化反应结果，并结合细菌革兰氏染色特点，细菌1被鉴定为大肠杆菌(鉴定正确率为99 %)，细菌2被鉴定为松鼠葡萄球菌(鉴定正确率为97%)。药敏试验结果显示细菌1对头孢曲松和丁胺卡那中敏，对恩诺沙星、粘杆菌素低敏，对氟苯尼考、强力霉素耐药；细菌2对磷霉素和头孢曲松高敏，对恩诺沙星、丁胺卡那中敏，对粘杆菌素低敏，对强力霉素和氟苯尼考耐药(图7)。

图4 从第2只幼獐肺脏组织中分离到的细菌培养菌落(37 ℃培养18 h)Fig.4 Bacterial isolated from lung tissue of second young Chinese water deer (37 ℃ 18 h )

图5 鉴定出的大肠杆菌革兰氏染色结果(1 000×)Fig.5 Gram staining result of identified Escherichia coli (1 000×)

图6 鉴定出的松鼠葡萄球菌革兰氏染色结果(1 000×)Fig.6 Gram staining result of identified Staphylococcus sciuri (1 000×)

磷.磷霉素 Antibacterial drugs；其他同图3 The same as ones used in Fig.3 besides fosfomycin

图7从第2只幼獐肺脏组织中分离到的细菌药敏试验结果
Fig.7ResultofdrugsensitivitytestofbacteriaisolatedfromlungtissueofsecondyoungChinesewaterdeer

2.4 诊治措施及效果

由于幼獐还在哺乳期，不方便全群口服给药，所以根据药敏试验结果，建议养殖户对同窝其他未发病幼獐采用头孢曲松钠(按体质量20 mg/kg，每日2次)连续肌注3 d进行预防，母獐饲料中添加白龙散(主要成分为白头翁、龙胆、黄连)，同时做好圈舍消毒。对已发病幼獐隔离治疗，人工喂牛奶，肌注头孢曲松钠(按体质量20 mg/kg，每日2次)，并灌服白龙散煎剂，连用4 d。1周后回访得知，病情已得到控制，2头病獐经治疗后康复，未再出现新发病例。此次疫情累计发病4头，死亡2头，治愈2头。

3 讨论

獐是一种驯养时间较短的动物，目前对其一些疾病特点还认识不足。本病例中，獐的病情较为严重，发病幼獐表现腿脚瘫软，无法站立，非常虚弱，且常有抽搐症状，但剖检病变却非常轻微，甚至观察不到明显病变。然而细菌分离时却又分离到较多细菌，说明体内细菌感染较为严重。第2只獐由于进行头孢曲松钠静脉滴注治疗，所以初次分离时从肺脏分离到的松鼠葡萄球菌在培养18 h时菌落非常细小，直至42 h菌落才较大。可能是体内残留的头孢曲松钠对该菌生长起到一定的抑制作用。分离到的松鼠葡萄球菌在传代培养时生长速度恢复正常。但从第2只獐肝脏中分离到的大肠杆菌在分离培养18 h就长成较大菌落，可能是因为它对头孢曲松钠的敏感性低于松鼠葡萄球菌，药敏试验结果证实这一推测。细菌分离结果还表明2种细菌在肺脏和肝脏中的分布存在较大差异。例如，第1只獐的肺脏中细菌数量大大高于肝脏中的数量；从第2只獐的肺脏中没有分离到大肠杆菌，但有较多松鼠葡萄球菌，而从肝脏中只分离到2个大肠杆菌，但没有分离到松鼠葡萄球菌。另一个值得注意的现象是给病獐哺乳的母獐均未发病，说明母獐对本病有较强抵抗力或这2种菌的感染能力不强。有待进一步探讨的是，细菌感染和临床症状如此严重却没有导致脏器出现严重的病理变化(如脏器出血、坏死等)。

VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪鉴定系统是根据细菌的生化代谢特点进行菌种鉴定，准确率和重复性极高,非常适合临床快速、准确鉴定病原菌[5-6]。因此，本病例中的细菌鉴定结果比较可靠。大肠杆菌是一种常见的病原菌，在其他动物上(如仔猪等)也经常引起腹泻。所以本病例中的腹泻症状可能也是大肠杆菌引起的。松鼠葡萄球菌是一种环境性病原菌，在环境中广泛存在，该菌可感染多种动物，如鱼类[7]、龟[8]、竹鼠[9]、人[10-11]。该菌也是仔猪渗出性皮炎的病原之一[12-13]。本病例中第1头獐只感染大肠杆菌，但第2头獐同时感染大肠杆菌和松鼠葡萄球菌，这可能也是导致发病獐临床症状不完全相同的原因之一。据养殖户介绍，哺乳幼獐一般在40日龄断奶，但在14日龄时就表现出尝试吃少量草料的行为。而这次发病獐的日龄恰好是15～16日龄。因此，这次发病可能是因为幼獐吃一些没清理干净的不新鲜草料或粪便，从而引起细菌感染。以往养殖户在这个阶段会在哺乳母獐饲料中添加白龙散来预防母獐和幼獐发病。今年因为没有及时买到白龙散，就忽视预防。