羟基红花黄色素A纳米乳在大鼠体内的药动学研究

黄钰茹，郭 绮，石明芯，张 杉，张景勍，赵 华

(1. 重庆医科大学药学院重庆药物高校工程研究中心，重庆 400016；2. 重庆市药品技术审评认证中心，重庆 401120；3.四川大学华西第二医院药剂科，四川 成都 610041)

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是红花中的主要成分，作用广泛，可降低血压、保护心肌、抗肿瘤等，尤其对心脑血管疾病有较好的治疗效果[1-3]。HSYA具有高水溶性，但肠膜通透性特别差，稳定性低，导致口服生物利用度很低[4]。目前，只有HSYA氯化钠注射剂已被批准临床使用，但作为治疗慢性疾病药物，长期使用注射剂使用不便，又因其具有安全性差、制备复杂、成本高等缺点，因此迫切需要口服制剂。磷脂属于两亲脂质，其脂溶性和生物膜相容性均较好，药物可与磷脂结合制备成磷脂复合物，从而提高其生物利用度[5]。文献报道[6]，药物与羟丙基-β-环糊精结合后，稳定性增加且生物利用度提高；纳米乳剂可以增强口服药物渗透性，减缓药物释放，促进胃肠道对药物的吸收，应用前景广阔[7]。本实验将HSYA制备成HSYA羟丙基-β-环糊精磷脂复合物后，再将复合物制备成油包水型HSYA复合物纳米乳(HSYA complex nanoemulsion，HCNE)，期望结合磷脂复合物和纳米乳的优点，在低剂量给药条件下，提高HSYA的口服生物利用度。

1 材料与方法

1.1仪器AB204S电子分析天平(瑞士Mettler Toledo仪器公司)；QL-901型旋涡混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；高效液相仪(日本SHIMADZU公司)。

1.2试药HSYA(纯度98%，浙江永宁药业股份有限公司)；HCNE(实验室自制)；芦丁(纯度98%，成都曼思特生物科技有限公司)；甲醇、乙腈(色谱纯，美国天地有限公司)，其余试剂均为分析纯。

1.3实验动物18只SD大鼠，♂，体质量(230±20)g，购自重庆医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(渝)2016-0001。

2 方法

2.1血浆样品处理方法精密量取100 μL血浆，加入1 mmol·L-1高氯酸50 μL和50 mg·L-1芦丁内标溶液10 μL，12 000 r·min-1离心10 min，取上清液进样测定。

2.2色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长：403 nm；流动相：乙腈(A)-20 mmol·L-1磷酸缓冲溶液(B，pH=3.5)，梯度洗脱：0～3 min，10% A～20% A；3～13 min，20% A；流速：1 mL·min-1；进样量：20 μL。

2.3给药方案与样品采集、处理18只SD大鼠随机分成3组，禁食12 h。其中，1、2组分别灌胃HSYA生理盐水溶液和HCNE，第3组尾静脉注射HSYA生理盐水溶液(等同于HSYA 6 mg·kg-1)。1、2组分别于给药后5、15、30、45 min，以及1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24、48、72 h(第3组给药后0 min，其余时间点同1、2组)眼眶采血0.3～0.5 mL于肝素化EP管中，6 000 r·min-1离心10 min后，取上清液于-80℃保存待测。

2.4药动学研究将药代动力学数据用DAS软件(2.1.1版)进行处理，得到主要药代动力学参数，并将HSYA和HCNE的血药浓度-时间曲线下面积(area under concentration-time curve,AUC(0-72 h))和峰浓度(peak concentration,Cmax)经对数转化后，进行[1-2α] 90%可信区间考察，运用统计学分析AUC(0-72 h)、Cmax和达峰时间(peak time,Tmax)(非参数统计的Wilcoxon符号秩和检验)，评价HSYA和HCNE是否具有生物等效性，检验标准α=0.05[8]。

3 结果

3.1HCNE药动学研究静脉注射的HSYA血药浓度与时间变化曲线图见Fig 1，经药代曲线从0 h开始呈下降趋势，4 h左右几乎消除殆尽。口服给予HSYA和HCNE后药代曲线如Fig 2所示，在整个药物代谢期间，HSYA血药浓度偏低，HCNE的整体血药浓度值均高于HSYA，HCNE达到最大血药浓度时间比HSYA晚约0.5 h，其中最大约为HSYA的3倍。

经DAS 软件(2.1.1 版)对HSYA和HCNE数据计算后，得出非室模型主要药动学参数见Tab 1。分析数据可看出，给药方式为静脉注射时，HSYA的AUC和Cmax均较大，Tmax为0.03 h，说明HSYA在体内迅速达到最大血药浓度；给药方式为口服灌胃时，HSYA与HCNE相比，Cmax和AUC(0-72 h)分别增加了164.38 ng·L-1和449.28 ng·L-1·h-1，证明口服吸收增加；清除率(clearance,Cl)和表观分布容积(apparent volume of distribution,V)分别减少了1.4 L·h-1·kg-1和15.6 L·kg-1，表明体内停留时间增加。房室模型主要药动学参数见Tab 2，从AUC(0-72 h)的比较看出，与HSYA相比，HCNE的相对生物利用度约为131.71%(非房室模型)或157.14%(房室模型)，HSYA的绝对生物利用度为5.94%(非房室模型)或4.99%(房室模型)。非房室模型和房室模型得出的结果几乎一致。对两种分析结果进行对比，HCNE均提高了HSYA的血药浓度，降低了清除率，提高了HSYA的口服生物利用度。

3.2生物等效性评价生物等效性比较结果见Tab 3，AUC(0-72h)和Cmax分别超出规定范围80%～125%和70%～143%。统计学分别分析AUC(0-72h)、Cmax和Tmax，得出AUC(0-72h)和Tmax的P>0.05，差异无显著性，Cmax的P<0.05，差异有显著性。综合结果表明，HSYA与HCNE二者生物不等效，后者具有较高的生物利用度。

Tab 1 Non-compartment pharmacokinetic model parameters with single dose injection HSYA, oral HSYA and HCNE in rats n=6)

C0: the initial concentration of injection; Fr: relative bioavailability; Fa: absolute bioavailablity

Tab 2 Compartment pharmacokinetic model parameters with single dose injection HSYA, oral HSYA and HCNE in rats n=6)

Tab 3 The bioequivalence comparison of HSYA and HCNE after intragastric administration (at the identical dose of 6 mg·kg-1 of HSYA, n=6)

Fig 1 Mean plasma concentration-time curve of HSYAafter a single intravenous injection administration n=6)

Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of HSYA and HCNE after a single oral administration n=6)

4 讨论

将中药制备成羟丙基-β-环糊精磷脂复合物，较单一的磷脂复合物或羟丙基-β-环糊精包合物更能促进药物的吸收，更有利于提高药物的生物利用度[9-11]。目前，生物药剂学III类药物HSYA的研究中，暂无单独将其制备成羟丙基-β-环糊精磷脂复合物后的药代动力学文献报道，但生物药剂学II类药物如姜黄素有相关研究。本团队前期研究了姜黄素羟丙基-β-环糊精磷脂复合物、姜黄素羟丙基-β-环糊精包合物、姜黄素磷脂复合物、姜黄素原料药在大鼠体内的药动学特征，结果表明，前三者姜黄素制剂的AUC分别为姜黄素原料药的5.89、1.49、1.17倍，证实复合制剂效果优于单一制剂[12]。故在此基础上，本研究制备了HCNE，药动学结果表明，HCNE提高了HSYA的口服生物利用度。

Lv等[13]选用自双重乳化药物递送系统(self-double-emulsifying drug delivery systems, SDEDDS)来改善HSYA的吸收，其将大豆磷脂、中链甘油三酯、油酸等辅料与HSYA混合，制备成w/o/w双层自微乳，HSYA双层自微乳相对于HSYA的生物利用度为217%。本研究制备的HCNE相对于HSYA的生物利用度为132%，两者差异可能是由于剂型与给药剂量不同。在药动学研究中，Lv等[13]制备的HSYA双层自微乳，不到10 h血药浓度几乎为零，HCNE在24 h仍保持较高血药浓度，说明HCNE缓释效应更好。再与HCNE制备工艺相比，HSYA双层自微乳制备更复杂，且SDEDDS可引起肠黏膜损伤，致一定程度的毒性，安全性有待改善；而HCNE制备简单，易于产业化。周鹏等[14]研究证明，HSYA的转运与其质量浓度和时间呈正相关，HCNE的生物利用度提高不够明显，可能与给药剂量较低有关。本实验可为后期加大给药剂量的剂型研究提供参考。

(致谢: 本实验在重庆医科大学重庆高校药物工程研究中心完成，在此真诚感谢实验室的所有老师和同学。)