药用植物双参中环烯醚萜类成分研究

大理大学药学与化学学院，云南 大理 671000

川续断科植物包括12属约300种，我国共有川续断属、刺续断属、蓝盆花属、翼首花属、双参属等5属[1]。双参(Triplostegiaglandulifera)为川续断科双参属植物，产于云南、西藏、四川、陕西南部、湖北西部、甘肃南部及台湾玉山，生于海拔1500～4000m的林下、溪旁、山坡草地、草甸及林缘路旁[2]。因其具有益气健脾、调经活血的功效，云南民间常用于久病体虚的治疗；并且在长期的临床应用及药理实验中表明高海拔地区产双参具有较好的降血糖作用[3]。双参属植物中主要含有三萜皂苷、环烯醚萜、生物碱等类型的化合物。但到目前为止，关于该种植物的化学成分研究还鲜有报道。实验在本课题组前期研究的基础上继续对双参提取物进行纯化，鉴定了7个化合物，分别为马钱苷元(1)、马钱子苷(2)、马钱苷酸(3)、6’-O-β-吡喃葡萄糖马钱苷(4)、大花双参苷A(5)、3’-O-β-D-glucopyranosylsweroside(6)、secologanol(7)。化合物结构如图1所示。

1 仪器与材料

1.1 药材 实验用植物于2017年10月采自于云南省大理州云龙县五宝山，经大理大学段宝忠副教授鉴定为川续断科双参属植物双参(TriplostegiaglanduliferaWall.exDC)的地下根，植物样本(编号:WFS-20171017)存放于大理大学药学与化学学院王福生教授课题组。

1.2 仪器 核磁共振仪(Bruker AM-400M)；旋转蒸发仪RE-52AA(上海亚荣生化仪器厂)。

1.3 材料 薄层硅胶GF254与柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂分厂)；Sephadex LH-20；ODS；AB-8型大孔吸附树脂；石油醚(Petroleum ether)、氯仿(chloroform)、乙酸乙酯(ethyl acetate)、甲醇(methanol)、乙醇(ethanol)等溶剂需重蒸后使用。

2 提取与分离

取双参地下干燥根3 kg，粉碎、用95%乙醇提取3次，每次24 h，浓缩成浸膏。将浸膏207 g溶解至水中，通过AB-8型大孔吸附树脂(水-甲醇系统)洗脱，得到A～H 8个组分。Fr.D经硅胶柱层析(氯仿-甲醇系统)、凝胶柱层析和ODS柱层析多次纯化，得到化合物1(43 mg)、化合物2(29 mg)、化合物3(19 mg)、化合物4(15 mg)。Fr.E经硅胶柱层析(氯仿-甲醇系统和石油醚-乙酸乙酯系统)、凝胶柱层析纯化得化合物5(12 mg)、化合物6(17 mg)、化合物7(9 mg)。

3 结果

化合物1 白色粉末。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：4.87(d,J=5.9 Hz 1H, H-1), 7.43(d,J=1.4 Hz, 1H, H-3), 3.12(m, 1H, H-5), 2.27(ddd,J= 13.6, 7.3, 1.6 Hz, 1H, H-6a), 1.50(ddd,J=13.9, 9.4, 4.7 Hz, 1H, H-6b), 4.05(ddd,J=6.3,3.1,1.3Hz,1H,H-7), 1.87(m,1H,H-8),1.81(m,1H,H-9),1.12(d,J=6.8Hz,3H,-CH3), 3.70(s,3H,-OCH3);13CNMR(100MHz,MeOD)δ:97.24(C-1), 153.50(C-3), 112.41(C-4), 33.14(C-5), 43.47(C-6), 74.85(C-7), 42.95(C-8), 47.83(C-9), 14.00(-CH3), 169.80(C=O), 51.61(-OCH3)。上述波谱数据与文献[4]报道的数据基本相同，故鉴定化合物1为马钱苷元。

化合物2 无色透明晶体。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：5.25(d,J=4.5 Hz, 1H,H-1), 7.36(d,J=1.2 Hz, 1H, H-3), 3.08(m, 1H, H-5), 2.20(ddd,J= 14.1, 7.9, 1.6 Hz, 1H, H-6a), 1.59(ddd,J=14.0, 7.7, 5.0 Hz, 1H, H-6b), 4.01(td,J=4.8, 1.4 Hz, 1H, H-7), 1.84(ddd,J= 9.5, 6.9, 4.6 Hz, 1H, H-8), 2.00(td,J=9.2, 4.5 Hz, 1H, H-9), 1.07(d,J=6.9 Hz, 3H, -CH3), 3.66(s, 3H, -OCH3), 4.62(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′), 3.17(dd,J=9.2, 7.9 Hz, 1H, H-2′), 3.33(m, 1H, H-3′), 3.27(m 1H, H-4′), 3.26(m, 1H, H-5′), 3.63(m, 1H, H-6′a), 3.87(dd,J=11.9, 1.9 Hz, 1H, H-6′b)；13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：97.67(C-1), 152.10(C-3), 114.00(C-4), 32.16(C-5), 42.69(C-6), 75.05(C-7), 42.16(C-8), 46.45(C-9),169.50(C=O), 13.44(-CH3), 51.63(-OCH3), 100.01(C-1′), 74.70(C-2′), 77.99(C-3′), 71.56(C-4′), 78.35(C-5′), 62.74(C-6′)。上述波谱数据与文献[5]报道的数据基本相同，故鉴定化合物2为马钱子苷。

化合物3 无色透明晶体。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：5.29(d,J=4.4 Hz, 1H,H-1), 7.41(d,J=1.3 Hz, 1H, H-3), 3.11(m, 1H, H-5), 2.26(ddd,J= 14.1, 7.8, 1.7 Hz, 1H, H-6a), 1.67(ddd,J=14.0, 7.5, 5.0 Hz, 1H, H-6b), 4.06(m, 1H, H-7), 1.89(m, 1H, H-8), 2.05(td,J=9.2, 4.4 Hz, 1H, H-9), 1.11(d,J=6.9 Hz, 3H, -CH3), 4.68(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′), 3.22(dd,J=9.1, 7.9 Hz, 1H, H-2′), 3.38(m, 1H, H-3′), 3.33(m 1H, H-4′), 3.32(m, 1H, H-5′), 3.69(m, 1H, H-6′a), 3.91(dd,J=11.9, 1.8 Hz, 1H, H-6′b)；13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：96.27(C-1), 150.75(C-3), 112.75(C-4), 30.73(C-5), 41.30(C-6), 73.71(C-7), 40.74(C-8), 45.16(C-9), 169.50(C=O), 12.06(-CH3), 98.65(C-1′), 73.34(C-2′), 76.91(C-3′), 70.20(C-4′), 76.62(C-5′), 61.38(C-6′)。上述波谱数据与文献[6]报道的数据基本相同，故鉴定化合物3为马钱苷酸。

化合物4 白色粉末。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：5.34(d,J=4.3 Hz, 1H,H-1), 7.46(d,J=1.2 Hz, 1H, H-3), 3.18(m, 1H, H-5), 2.30(ddd,J= 14.0, 7.8, 1.7 Hz, 1H, H-6a), 1.69(ddd,J=14.1, 7.6, 5.1 Hz, 1H, H-6b), 4.11(td,J=4.9, 2.5 Hz, 1H, H-7), 1.94(ddd,J= 9.5, 7.0, 4.6 Hz, 1H, H-8), 2.11(td,J=9.1, 4.4 Hz, 1H, H-9), 1.17(d,J=6.8 Hz, 3H, -CH3), 3.77(s, 3H, -OCH3), 4.79(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′glu), 4.65(d,J=7.8 Hz, 1H, H-1′′glu)；13C NMR (100 MHz, MeOD)δ：97.77(C-1), 152.05(C-3), 114.01(C-4), 32.07(C-5), 42.65(C-6), 74.99(C-7), 42.08(C-8), 46.46(C-9), 169.48(C=O),13.04(-CH3), 51.67(-OCH3), 99.71(C-1′), 74.03(C-2′), 78.07(C-3′), 71.48(C-4′), 77.72(C-5′), 69.98(C-6′)，105.12(C-1′′), 75.42(C-2′′), 78.09(C-3′′), 71.48(C-4′′), 77.92(C-5′′), 62.60(C-6′′)。上述波谱数据与文献[7]报道的数据基本相同，故鉴定化合物4为6′-O-β-吡喃葡萄糖马钱苷。

化合物5 白色粉末。1H NMR (400 MHz, MeOD)δ：unit A 5.59(d,J=5.5 Hz,1H，H-1), 7.51(s, 1H, H-3), 3.27(m, 1H, H-5), 2.14(m 1H, H-6a), 1.73(m, 1H, H-6b), 4.59(m, 1H, H-7), 5.82(m, 1H, H-8), 2.99(m, 1H, H-9), 5.34(m, 2H, H-10), 3.76(m, 6H, 2×-OCH3), 5.39(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′glu)；unit B 5.27(d,J=4.9 Hz, 1H,H-1), 7.49(s, 1H, H-3), 3.27(m, 1H, H-5), 2.38(m, 1H, H-6a), 1.82(m, 1H, H-6b), 5.33(m, 1H, H-7), 2.14(m, 1H, H-8), 2.19(m, 1H, H-9), 1.14(d,J=6.1 Hz, 3H, -CH3), 3.43(m, 3H, -OCH3), 5.31(d,J=8.0Hz, 1H, H-1′glu)；13C NMR (100 MHz, MeOD) δ：unit A 97.90(C-1), 153.23(C-3), 112.07(C-4), 29.53(C-5), 33.34(C-6), 104.33(C-7), 135.85(C-8), 45.42(C-9),119.76(C-10),169.35(C=O), 53.64(-OCH3), 52.82(-OCH3), 100.14(C-1′), 74.76(C-2′), 78.39(C-3′), 71.57(C-4′), 78.05(C-5′), 62.79(C-6′)；unit B 97.50(C-1), 152.48(C-3), 113.30(C-4), 32.54(C-5), 40.30(C-6), 78.33(C-7),41.00(C-8),47.15(C-9),13.77(-CH3),168.28(C=O),51.72(-OCH3),100.23(C-1′),74.65(C-2′),78.38(C-3′), 71.63(C-4′), 78.03(C-5′), 62.78(C-6′)。上述波谱数据与文献[8]报道的数据基本相同，故鉴定化合物5为大花双参苷A。

化合物6 无色透明晶体。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ：5.61(d,J=7.1 Hz, 1H, H-1), 7.66(d,J=2.5 Hz,1H, H-3), 3.18(m, 1H, H-5), 1.81(m, 2H, H-6), 4.43(m, 1H,H-7a), 4.51(m, 1H, H-7b), 5.61(m, 1H, H-8),2.77(ddd,J=9.7, 5.4, 1.7 Hz, 1H, H-9), 5.36(m, 2H, H-10), 4.80(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′glu), 4.63(d,J=7.8 Hz, 1H, H-1′′glu)；13C NMR (100 MHz, MeOD) δ：98.09(C-1), 153.95(C-3), 105.16(C-4), 28.45(C-5), 25.90(C-6), 69.69(C-7), 133.27(C-8), 43.79(C-9), 120.86(C-10), 168.45(C-11), 99.46(C-1′), 74.08(C-2′), 87.37(C-3′),69.69(C-4′), 77.80(C-5′), 62.55(C-6′), 105.97(C-1′′), 75.47(C-2′′), 78.02(C-3′′),71.54(C-4′′), 78.15(C-5′′), 62.61(C-6′′)。上述波谱数据与文献[9]报道的数据基本相同，故鉴定化合物6为3′-O-β-D-glucopyranosylsweroside。

化合物7 无色透明晶体。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ：5.56(d,J=6.7Hz, 1H,H-1), 7.52(s, 1H, H-3), 2.84(m, 1H, H-5), 1.70(m 1H, H-6a), 1.88(dt,J= 13.8, 6.9Hz, 1H, H-6b), 3.60(m, 2H, H-7), 5.81(ddd,J=17.3, 10.4, 8.5Hz, 1H, H-8), 2.65(m, 1H, H-9), 5.28(m, 2H, H-10), 3.69(m, 3H, -OCH3), 4.72(d,J=7.9 Hz, 1H, H-1′), 3.22(dd,J=9.2, 7.9 Hz, 1H, H-2′), 3.40(m, 1H, H-3′), 3.30(m 1H, H-4′), 3.33(m, 1H, H-5′), 3.69(dd,J=11.9, 5.6 Hz, 1H, H-6′a), 3.92(dd,J=11.9, 2.0 Hz, 1H, H-6′b)；13C NMR (100 MHz, MeOD) δ：97.72(C-1), 153.68(C-3), 111.72(C-4),31.05(C-5),33.91(C-6),61.17(C-7),135.98(C-8),45.46(C-9),119.13(C-10),171.02(C=O),49.85(-OCH3),100.13(C-1′),74.66(C-2′),77.97(C-3′),71.58(C-4′),78.36(C-5′), 62.78(C-6′)。上述波谱数据与文献[10]报道的数据基本相同，故鉴定化合物7为secologanol。

4 小结

糖尿病作为一种常见的内分泌代谢障碍性疾病，其发病的主要原因是胰岛素B细胞受损而引起胰岛素分泌不足或因细胞膜上胰岛素受体缺陷导致胰岛素不敏感，不能发挥作用，进而造成糖代谢紊乱。药理研究表明双参提取物能使外源性葡萄糖、肾上腺素所致的高血糖小鼠的血糖水平明显下降，改善小鼠对高血糖的耐受能力，而对正常小鼠的血糖水平无明显影响，从而在一定程度上缓解临床症状[11-13]。双参作为云南民间用药，因其具有补肾健脾、益气活血的功效，用于治疗久病体虚，并能补气补血。但是到目前为止，对其降血糖的生物活性成分的研究还少有报道。该实验在课题组前期研究的基础上继续对双参提取物进行分离纯化，希望进一步深化对双参降血糖生物活性成分的认识，为该植物的开发利用奠定基础。