养阴通里方剂预防术后粘连性肠梗阻药效学研究
2018-12-11邹丽园杨振倪赛宏傅水莲付萌何丽明刘玉梅洪铁
邹丽园,杨振,倪赛宏,傅水莲,付萌,何丽明,刘玉梅※,洪铁※
(1.吉林大学中日联谊医院,长春 130000;2.吉林农业大学,长春 130000;3.吉林大学药学院,长春 130000)
术后粘连性肠梗阻是临床非常常见的一种术后并发症,是指因腹部或非腹部手术而引起的术后胃肠动力障碍性疾病,发病率较高。因此,临床急需研制一种能预防术后粘连性肠梗阻的药物[1~3]。我国于20世纪 70年代起应用叶舜宾教授研制的养阴通里方剂,大量临床实践证实,其对预防术后粘连性肠梗阻具有显著疗效。该方由大黄、莱菔子、赤芍、木香等4味中药构成,有破阻化瘀、消积、止痛的功效[4]。本研究采用擦拭法构建大鼠粘连性肠梗阻模型及小鼠离体肠管培养,探讨其作用机制。
1 动物、材料及仪器
1.1 动物
清洁级SD大鼠69只,体重180g~220g,昆明小鼠20只,18g~20g,购自辽宁长生生物技术有限公司,生产许可证号:SCXK(辽)2015-0001。
1.2 材料与仪器
养阴通里药液、硫酸阿托品注射液(上海浦津林州制药有限公司);BL-420E+生物技能实验系统(成都泰盟科技有限公司);肌张力换能器(JH-2,50g,北京航天医学工程研究所);超级恒温器(SHC-501,上海沪粤明科学仪器有限公司);平滑肌槽(ML110,ADInstruments公司);全自动血流变快测仪(FASCO-3010,重庆大学维多生物工程研究所)。
2 方法
2.1 体内实验
2.1.1 实验分组 实验分为正常组(Normal group,N)、假手术组(Sham operated group,SO)、模型组(Model group,M)、养阴通里高剂量组(Yangyintongli high does group,YHD)、养阴通里中剂量组(Yangyintongli medium does group,YMD)、养阴通里低剂量组(Yangyintongli low does group,YLD)、莫沙必利组(Mosapride group,MO)、地塞米松组(Dexamethasone group,D)。养阴通里各剂量组每组9只大鼠,其余各组每组8只。养阴通里高、中、低剂量组给药剂量分别为 3.150 0g/kg、1.575 0g/kg、0.787 5g/kg(按成人处方日用量 17.500 0g/70kg计算),莫沙必利组1.35mg/kg,地塞米松组10mg/kg。各组大鼠每日灌胃给药1次,于造模前连续给药5d,造模后给药2d。
2.1.2 造模 根据文献[5]报道方法造模。大鼠术前禁食不禁水18h,除正常组外,其余各组大鼠均以10%水合氯醛(0.3mL/100g)腹腔注射麻醉,腹部备皮后碘伏消毒铺巾。于下腹部正中线做一个长约3cm的切口,取出全部小肠外置于湿纱布上,用湿棉球由小肠末端自下而上反复擦拭肠管6次。然后将全部肠管放回,关腹。其中假手术组只打开腹腔,立即缝合关闭。全部大鼠于造模48h后行腹部立位X线检查。
2.1.3 对胃肠动力的影响 上述各组大鼠于造模后末次给药2h后,灌胃给予0.04%酚红溶液(含10%明胶)2mL,15min后,腹腔注射水合氯醛麻醉,开腹观察肠管形态并对小肠粘连程度进行评级。取出胃和小肠(幽门至回盲部),小肠平铺于湿滑平面上,测量小肠全长及酚红在小肠的推进距离。将胃沿胃大弯剪开,于5%NaOH中充分洗净,取5mL,3 000r/min离心10min,取上清液,于560nm测其吸光度值OD;另取2只正常大鼠,给予酚红后立即处死,按照上述方法测其吸光度值,其均值作为胃排空速度的标准。胃排空率=(1-实验组OD/标准组OD)100%。
2.1.4 全血及血浆粘度 各组大鼠行腹主动脉取血,取3.6mL全血置于含0.4mL肝素的真空管中,测定全血粘度,3 000r/min离心10min,取上层血浆测定血浆粘度。
2.1.5 肠管形态及粘连程度结果 观察各组大鼠肠管形态,并参考Nair[6]制定的5级分类法进行粘连程度分级,统计每组各级粘连程度大鼠数量。0级:完全无粘连;Ⅰ级:内脏间或内脏与腹壁间 1条粘连带;Ⅱ级:内脏间或内脏与腹壁间二条粘连带;Ⅲ级:多于2条粘连带,而内脏未直接粘连到腹壁;Ⅳ级:内脏直接粘连到腹壁,而不管粘连多少。
2.2 体外实验
2.2.1 实验分组 考查不同浓度养阴通里药液对离体肠管收缩能力的影响,实验分为台氏液对照组、养阴通里高剂量组(1mg/mL)、养阴通里中剂量组(0.50mg/mL)、养阴通里低剂量组(0.25mg/mL);考查不同浓度养阴通里药液对阿托品抑制作用的影响,实验分为台氏液对照组、阿托品组(A)(0.10mg/mL)、阿托品+养阴通里高剂量组(A+YHD)、阿托品+养阴通里中剂量组(A+YMD)、阿托品+养阴通里低剂量组(A+YLD)。
2.2.2 不同浓度养阴通里药液对离体肠管收缩能力的影响 取小鼠幽门以下1cm~5cm处肠管,用台氏液将内容物冲洗干净,剪成1cm~2cm数段,肠段上端接肌张力换能器,下端固定在金属钩上置于装满台氏液的恒温平滑肌浴槽内,并通入 O2+CO2混合氧气(95∶5),待肠管自发收缩活动平稳后,记录肠管正常舒缩曲线,然后向浴槽中滴加0.25mL养阴通里各浓度药液或台氏液,继续描记舒缩曲线。
2.2.3 不同浓度养阴通里药液对阿托品抑制作用的影响 离体肠管平滑肌稳定后,先向浴槽内加入阿托品,描记舒缩曲线5min,然后用台氏液冲洗3遍,待肠管收缩稳定后先加入阿托品,待其作用明显时再分别加入上述养阴通里各浓度药液,继续记录肠管舒缩曲线。
计算给药前后1min内肠管收缩幅度、频率及运动指数差值的平均值和标准差。肠的运动指数=肠的收缩频率 收缩幅度。
2.3 统计学分析
3 结果与分析
3.1 体内实验
3.1.1 腹部立位X线检查结果 X线检查结果显示,正常组与假手术组大鼠腹腔未见异常;模型组大鼠出现明显肠梗阻征象,肠管有大量积气、积液,可见气液平面;养阴通里各给药组大鼠积气、积液明显减少,高剂量效果为最好,中剂量组次之;阳性药莫沙必利与地塞米松组积气、积液在一定程度上减少,但治疗效果次于养阴通里给药组。见图1。
3.1.2 对各组大鼠胃肠动力的影响 实验结果显示,与假手术组相比,模型组胃排空率与小肠推进率明显降低(P<0.01,P<0.01);与模型组相比,养阴通里高剂量组胃排空率与小肠推进率显著提高(P<0.01,P<0.01);中剂量组胃排空率与小肠推进率明显提高(P<0.05,P<0.05);低剂量组胃排空率明显提高(P<0.05),但对于小肠推进率并无影响。结果见表1。
表1 各组大鼠胃排空率及小肠推进率Table 1 The gastric emptying rate and small intestinal propulsive rate of rats in each group (%)
3.1.3 对各组大鼠血粘度的影响 各组大鼠全血及 血浆粘度无统计学差异(P>0.05)。见表2。
表2 各组大鼠全血及血浆粘度Table 2 Whole blood and plasma viscosity of rats in each group (mpas)
3.1.4 各组大鼠小肠粘连程度 实验结果显示,假手术组并未形成肠梗阻;模型组大鼠小肠粘连程度较重,大部分处于Ⅲ级粘连程度,小部分处于Ⅳ级粘连程度;养阴通里各给药组与模型组相比,粘连程度明显降低,大部分处于Ⅰ级、Ⅱ级粘连程度,小部分处于Ⅲ级粘连程度。各级粘连程度示意图见图2,各组大鼠粘连程度统计结果见表3。
图2 各级粘连程度示意图Fig.2 Schematic view of the degree of adhesion levels
表3 各组大鼠粘连程度统计表Table 3 Statistics of adhesion degree of rats in each group (a)
3.2 体外实验结果
1mg/mL、0.5mg/mL的养阴通里给药组能明显增加体外肠管的收缩幅度,并降低振动频率,且能够逆转阿托品对肠道蠕动的抑制作用。见图3、图4。
图3 不同浓度养阴通里药液对小鼠离体肠管收缩能力的影响Fig.3 Effects of different concentrations of Yangyintongli liquid on contractility of isolated intestine in mice
图4 不同浓度养阴通里药液对阿托品抑制作用的影响Fig.4 Effects of different concentrations of YangyinTongli liquid on atropine inhibition
4 讨论
术后肠梗阻是一种因手术造成的一种胃肠功能障碍性并发症,主要表现为术后腹痛、腹胀、肛门不排气、不能进食、甚至恶心呕吐等症状。它不能单纯地等同于机械性肠梗阻或术后麻痹性肠梗阻,而是指术后胃肠道所经历的一个功能障碍阶段[7]。
养阴通里方剂由大黄、莱菔子、赤芍、木香等4味中药构成。其中大黄攻下为主药,辅之以行气通滞之木香,化积行滞之莱菔子为辅。方中尚配以赤芍祛瘀止痛为佐,减轻峻烈攻下行气破阻药物作用下产生的不适感觉,故而4药配伍即可使梗阻得开,又不致由于药力太强而致患者痛苦。所以,4药配合共奏,有破阻化瘀、消积、止痛之功。
本研究结果显示,养阴通里可以明显提高大鼠胃排空率及小肠推进率,由此减短术后胃肠麻痹期,使胃肠快速恢复蠕动;在体外能够明显提高离体肠管的收缩幅度,并降低振动频率,利于术后肠道功能的恢复且不影响伤口愈合。此外,养阴通里可以逆转阿托品对于肠道平滑肌的抑制作用,推测其作用机制可能是通过刺激肠道平滑肌上的M受体。