猴头养胃颗粒对急性胃粘膜损伤的保护作用

李志满，李珊珊，陈丽雪，2，祁玉丽，2，孙印石，2※

（1.中国农业科学院特产研究所，长春 130112；2.吉林农业大学中药材学院，长春 130118）

猴头菇（Hericium erinaceus）隶属猴头菌科猴头菌属。据本草纲目记载，其性平、味甘，具有利五脏、助消化的功能，是一种营养丰富的药、食同源菌类，具有极高的医疗和保健价值。近年来研究证明，其活性成分具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、增强机体免疫力等多种保健和养生功能[1，2]。本实验以猴头菇为主要原料，辅以黄芪、山楂、党参进行活性成分提取和制粒，最终获得猴头养胃颗粒。采用大鼠急性胃粘膜损伤实验模型，观察猴头养胃颗粒对胃粘膜保护作用的效果，为猴头养胃颗粒产品的研发奠定基础。

1 材料与仪器

1.1 试剂

猴头养胃颗粒（中国农业科学院特产研究所产品加工实验室自制）；无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲醛、二甲苯（北京化工厂）；苏木素溶液、伊红溶液（Sigma-Aldrich公司）；石蜡（徕卡仪器有限公司）；中性树胶（上海华灵康复器械厂）。

1.2 实验动物

清洁级 SD健康雄性大鼠 48只，体重为180g～200g，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，生产许可证SCXK（辽）2015-0001，合格编号211002300023526。实验动物在温度 20°C～25°C、相对湿度为40%～70%的环境中饲养，自由进食、饮水。

1.3 仪器

IX53光学显微镜（奥林巴斯有限公司）；Epoch2酶标仪（美国博腾仪器有限公司）；EG115生物组织包埋机、EG1150C冷动机、RM2255切片机、HI1220病理组织漂烘仪（徕卡仪器有限公司）；电子数显卡尺605（哈尔滨量具刃具集团有限责任公司）；Heraeus Megafuge 8R高速冷冻离心机（赛默飞世尔科技有限公司）；MS204S电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；DHG-9123A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；CPA225D电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；WP-UP-WF-40微量分析型超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）。

2 实验方法

2.1 急性胃黏膜损伤模型

参照《保健食品检验与评价技术规范》（2012版）[3]中对胃粘膜损伤有辅助保护功能的检验方法。将清洁级SD健康雄性大鼠随机分为正常组，模型组，猴头养胃颗粒 500mg/kg、800mg/kg、1 600mg/kg 3 个组（分别相当于受试样品人体推荐量的3倍、5倍、10倍），每组8只。每天按10mL/（kg·bw）灌胃1次，连续30d，正常组和模型组每天给予等量的生理盐水。末次灌胃后，严格禁食不禁水24h，除正常组外，所有大鼠给予无水乙醇1.0mL/只，1h后处死大鼠。

2.2 检测指标的测定

暴露大鼠完整胃，结扎幽门，灌注10%中性福尔马林溶液10mL，固定20min，沿胃大弯剪开，用生理盐水冲去内容物，展开胃粘膜，记录出血点，用游标卡尺测量出血带的长度和宽度。因宽度代表损伤的程度较长度大，故双倍积分，并计算实验组胃粘膜损伤积分指数和损伤抑制率。

损伤积分指数=组损伤评分总和/组动物数量；

损伤抑制率=（模型组损伤积分-给药组损伤积分）/模型组损伤积分 100%

表1 急性酒精损伤肉眼观察评分标准Table1 Acute alcohol injury visual criteria

2.3 病理组织学观察

选取胃粘膜损伤最严重的部位，经10%中性福尔马林固定、脱水、透明，常规石蜡包埋厚度连续切片，经H & E染色后，镜下观察大鼠胃组织病理学变化。

2.4 统计学处理

3 实验结果

3.1 猴头养胃颗粒对大鼠体重的影响

在急性胃粘膜损伤模型中，给予不同浓度的猴头养胃颗粒30d后，各剂量组大鼠的体重增长良好，呈持续增长状态，但各时期的体重与正常组相比无显著性差异（P＞0.05）。结果见表2。

表2 猴头养胃颗粒对大鼠体重的影响Table 2 Effect of Houtou Yangwei Granules on rat body weight ()

表2 猴头养胃颗粒对大鼠体重的影响Table 2 Effect of Houtou Yangwei Granules on rat body weight ()

组别 剂量（mg/kg） 初始体重（g）15d 后体重（g）30d后体重（g）SetDoseBody weightBody weightBody weight正常组 Normal group 0 184.35±3.65 273.75±11.95 343.65±17.85模型组 Model group 0 187.07±4.69 275.70±10.10 348.55±12.95低剂量组 Low-dose group 500 185.82±3.44 271.11±6.75 339.80±14.42中剂量组 Middle-dose group 800 186.28±2.81 281.04±9.01 357.70±14.94高剂量组 High-dose group 1 600 184.66±10.15 274.75±15.55 345.35±18.45

3.2 猴头养胃颗粒对急性胃粘膜损伤中胃重量的影响

经无水乙醇刺激胃粘膜后，模型组大鼠胃组织明显水肿，胃重量较正常组呈明显增加趋势，差异有统计学意义（P＜0.001），说明造模成功（表3）。不同浓度的猴头养胃颗粒剂量组，在给予急性乙醇灌胃后，肿胀程度明显减轻，胃组织重量较模型组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.001）。见表3。

表3 猴头养胃颗粒对大鼠胃部重量的影响Table3 Effect of Houtou Yangwei Granules on the weight of rat's stomach ()

表3 猴头养胃颗粒对大鼠胃部重量的影响Table3 Effect of Houtou Yangwei Granules on the weight of rat's stomach ()

注：与正常组比较，###.P＜0.001；与模型组比较，**.P＜0.01，***.P＜0.001。下表同。Note：Compare with the normal group，###.P ＜ 0.001；Compare with the model group，**.P ＜ 0.01，***.P ＜ 0.001.The same below.

组别 剂量（mg/kg） 胃重量（g）SetDoseStomach weight正常组 Normal group 0 1.80模型组 Model group 0 2.61###低剂量组 Low-dose group 500 2.14**中剂量组 Middle-dose group 800 2.11**高剂量组 High-dose group 1 600 2.06***

3.3 猴头养胃颗粒对乙醇诱导的胃粘膜损伤的病理形态学的影响

正常组大鼠胃粘膜腺体排列整齐、均匀、致密；模型组大鼠胃粘膜损伤非常明显，粘膜表面呈现多条条索状出血面；不同浓度的给药组大鼠粘膜损伤较轻，猴头养胃颗粒能够明显减轻乙醇对胃粘膜的损伤，出血程度较轻，高剂量时只出现充血而无出血带。结果见图1。

图1 猴头养胃颗粒对大鼠胃粘膜病理学的影响Fig1 Effect of Houtou Yangwei Granules on pathology of gastric mucosa in rats

3.4 猴头养胃颗粒对急性胃粘膜损伤的保护作用

模型组大鼠胃粘膜各观察指标中出血带数、出血带面积和出血带发生率均高于正常组，差异有统计学意义（###P＜0.001），表明造模成功。低剂量、中剂量、高剂量实验组的出血带数、出血带面积和出血发生率较模型组明显降低，有统计学意义（P＜0.01），出血抑制率分别为19.42%、37.41%、61.87%，表明猴头养胃颗粒对急性胃粘膜损伤有明显的保护作用。结果见表 4。

表4 猴头养胃颗粒对大鼠胃粘膜损伤指数和抑制率的影响Table 4 Effect of Houtou Yangwei Granules onrat gastric mucosal lesion indexand inhibition rate()

表4 猴头养胃颗粒对大鼠胃粘膜损伤指数和抑制率的影响Table 4 Effect of Houtou Yangwei Granules onrat gastric mucosal lesion indexand inhibition rate()

组别 剂量（mg/kg） 损伤指数 损伤抑制率（%）SetDoseLesion indexLesion inhibition rate正常组 Normal group 0 0 0模型组 Model group 0 139### 0低剂量组 Low-dose group 500 112*** 19.42中剂量组 Middle-dose group 800 87*** 37.41高剂量组 High-dose group 1 600 53*** 61.87

3.5 大鼠胃粘膜组织H & E染色的病理学观察

正常组大鼠胃组织细胞排列紧密、有序，细胞结构清晰，腺体完整，未见明显异常；模型组大鼠胃粘膜上皮细胞脱落、坏死，腺体排列紊乱，腺体扩张，粘膜下层水肿，炎性细胞浸润；各剂量猴头养胃颗粒组仅见少量上皮细胞脱落，损伤情况均轻于模型组，其中高剂量组效果最佳。见图2。

4 讨论

胃粘膜损伤可能由多种原因引起，如药物、酗酒、细菌感染、情绪变化等。近年来，随着人们生活水平的提高，嗜酒人群日益增多，诱发的组织器官损害引起了广泛关注。选用急性胃粘膜损伤模型研究药物对胃粘膜的保护作用是评价胃粘膜自身防御机制对外来刺激的应激能力和对抗强度的主要内容。乙醇对胃粘膜具有很强的腐蚀性，能使表面粘膜层和粘液细胞受损，导致胃粘膜正常代谢的生理环境遭受破坏。乙醇进入胃后，经过代谢转化为乙醛，其与胃蛋白结合破坏胃粘膜结构，使中性粒细胞浸润于胃粘膜，并释放髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）、氧自由基、活性氧化代谢产物、蛋白酶，并粘附于血管内皮导致粘膜损伤[4]。高浓度的乙醇可以破坏胃黏膜屏障的结构，导致粘膜充血、糜烂、上皮细胞坏死、脱落。由于乙醇具有脂溶性，过量饮用易造成不良后果，如胃炎、胃出血、胃溃疡等胃粘膜损伤类疾病[5～7]。乙醇致大鼠胃粘膜损伤模型已作为探讨胃粘膜损伤病理生理机制的一种普遍的动物实验模型[8～11]。

现已有研究表明，猴头菇多糖对大鼠急性、慢性溃疡有明显的抑制作用，对乙醇和消炎痛所致胃粘膜损伤亦有保护作用[12]。猴头菌片通过升高氨基己糖含量起到保护胃粘膜损伤的作用[13]。猴头菌多糖对无水乙醇诱导的胃溃疡具有很好的抑制作用[14]。本实验以不同剂量猴头养胃颗粒连续灌胃雄性 SD大鼠30d后，观察用无水乙醇诱导的急性胃粘膜损伤的预防作用。实验结果显示，模型组大鼠胃的总重量明显升高、出血点增加、胃粘膜损伤指数升高；病理切片观察，可见明显的胃粘膜上皮细胞脱落、坏死，腺体排列紊乱，腺体扩张，粘膜下层水肿，炎性细胞浸润。与模型组相比，猴头养胃颗粒低剂量、中剂量、高剂量组大鼠胃组织肿胀均有不同程度地减轻，出血抑制率升高，且病理结果显示，大鼠胃粘膜病变程度也明显得到改善。综上述结果说明，猴头养胃颗粒对胃粘膜损伤确实具有辅助保护作用，猴头养胃颗粒的研制可作为开发胃粘膜保护作用的功能食品的一个方向。