海南4种茶水提物的抗氧化及抑菌活性比较

,,培征,,*

(1.海南大学热带农林学院,海南海口 570228; 2.海南省林业科学研究所通什分所,海南五指山 572200)

海南苦丁茶(IlexkudingchaC. J. Tseng)属冬青科苦丁茶冬青种,主要分布在我国南方等省[1]。海南苦丁茶含有苦丁皂甙、黄酮类、萜类、多酚类和多糖类等多种次生代谢产物,具有抗氧化、降血压以及降脂减肥等多种功效[2-3]。Thuong等[4]发现4种茶冬青的乙酸乙酯组分中含有丰富的酚类化合物,与水提物相比具有显著的自由基清除活性。农朝赞等[5]研究了4种茶熊果酸对鼻咽癌细胞增殖的抑制作用。王新等[6]研究4种茶冬青的粗多糖KPS II 以及2种精多糖,具有浓度依赖性的羟基自由基清除活性。

白沙绿茶(Baisha green tea),属山茶科山茶属。据报道白沙绿茶富含维生素C、咖啡因、茶氨酸、表儿茶素、表没食子儿茶素、没食子酸酯等多种有效成分[7-8]。田博岩等[9]发现白沙绿茶具有一定的降血脂及护肝作用。李杰等[10]研究了海南白沙绿茶的甲醇提取物、乙醇提取物及水提物的抗氧化活性,认为70%乙醇提取物的体外抗氧化能力较强。

海南大叶种(Camelliaassamicavar.assamicacv. Hainan-dayezhong),为五指山本地品种,于1985年全国农作物品种审定委员会认定。该品种发芽早、产量高,内含物质丰富[11]。目前有关大叶种茶的研究甚少。

鹧鸪茶(MallotusoblongifoliusMuell. Arg.),属大戟科(Euphorbiaceae)野桐属(Mallotus)植物,又名山苦茶,禾姑茶,毛茶,是海南的一种极具民族特色和地域特色的代茶饮料植物和药用植物[12]。苏冰霞等[13]发现鹧鸪茶多糖含量高,并优化了多糖的最佳提取工艺。李彦军等[14]发现鹧鸪茶提取物对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌的抑菌作用显著。李晓彤等[15]发现鹧鸪茶乙醇提取物的自由基清除活性较强。

可见,除海南大叶种茶外,其他不同茶水提物的抗氧化和抑菌活性有较少报道,但是海南4种茶之间的抗氧化活性和抑菌活性强弱对比目前还未见报道。且利用酿酒酵母作为模式细胞进行抗氧化能力对比目前研究甚少。本实验通过对4种茶水提物的体外抗氧化活性、以及对野生型酿酒酵母及基因缺陷型酿酒酵母菌株的抗氧化能力及抑菌实验进行分析,比较不同茶水提物之间的活性,为进一步开发利用四种茶提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

海南苦丁茶 海南省海口市,产地五指山;海南白沙绿茶 海南省海口市,产地白沙县;海南大叶种茶 海南省五指山市,产地五指山;海南鹧鸪茶 海南省海口市,产地万宁;供试菌种致病细菌:金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、绿脓杆菌(Pseudomonasaerugino)、蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus.Frankland)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) 海南大学热带农林学院提供;供试酿酒酵母菌株:野生型WT及其同源性基因缺陷型菌株sod1Δ、ctt1Δ、gsh1Δ、gtt1Δ 由天津商业大学生物技术与食品科学学院提供(其中sod1Δ编码细胞质超氧化物歧化酶,ctt1Δ编码过氧化氢酶,gsh1Δ编码谷胱甘肽,gtt1Δ编码谷胱甘肽硫转移酶的同工酶);1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) Sigma公司;2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、水解酪蛋白培养基(MH培养基) 中国索莱宝公司;没食子酸、芦丁、TBHQ、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)标准品 上海麦克林生化科技有限公司;其它试剂 均为市售分析纯。

723N可见光分光光度计 上海菁华科技仪器有限公司;U-1800紫外分光光度计 HITACHI;LRH-250F恒温生化培养箱 苏州江东;HS-1300-U超净工作台 AIRTECH; Laborota 4000 efficient旋蒸蒸发仪 HEIDOLPH;CAV213C 型电子天平 OHAUS;10、100、1000 μL型移液 Eppendorf;DKZ系列电热恒温振荡水槽 上海一恒科学仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 4种茶水提物的制备 将4种茶叶粉碎,过60目筛,取50 g干粉用500 mL的蒸馏水于电磁锅中煮沸45 min,冷却,抽滤得到水提液;反复煮沸3次,合并水提液,于60 ℃减压浓缩得浸膏,置于冷冻干燥机干燥,得4种茶水提物干粉,计算其提取率。

1.2.2 4种茶水提物总酚、总黄酮含量的测定 总酚含量[16]:分别将80 μL水提物样品(1 mg/mL)和3720 μL 2%的Na2CO3接种在管中,然后加入200 μL Folin-Ciocalteau试剂。将反应液在40 ℃下孵育,60 min后,在760 nm波长处测量吸光度。以没食子酸代替样品制作标准曲线。

黄酮含量[17]:分别将0.5 mL水提物样品加入2.5 mL去离子水和150 μL 5%亚硝酸钠溶液中,反应6 min后,加入300 μL 10% AlCl3,5 min后,加入1 mL 1 mol/L NaOH溶液和550 μL去离子水,混合后立即在510 nm波长处测量吸光度。以芦丁代替样品制作标准曲线。

1.2.3 4种茶水提物抗氧化活性的测定

1.2.3.1 对DPPH自由基的清除作用 参考文献[18]的方法并稍作修改。用95%甲醇配制0.15 mmol/L DPPH溶液,在试管中加入2 mL水提物样品(3.125、6.25、12.5、25、50 μg/mL)和2 mL DPPH溶液,室温条件下孵育30 min,混匀后在517 nm测量吸光度Ai,蒸馏水代替DPPH的吸光度为Aj,蒸馏水代替样品的吸光度为A0,以芦丁作为阳性对照。每个样品测定3次,取平均值。

1.2.3.2 对FRAP高价铁离子的还原作用 参考文献[19]的方法并稍作修改。将0.2 mL水提物样品(50 μg/mL)加入到3.8 mL FRAP试剂(10份pH=3.6的300 mmol/L乙酸钠溶液,1份10 mmol/L TPTZ溶液和1份20 mmol/L FeCl3溶液),混合后在37 ℃下孵育30 min,593 nm波长处测量吸光度。以七水合硫酸亚铁代替样品制作标准曲线。每个样品测定3次,取平均值。

1.2.3.3 对ABTS自由基的清除作用 参考文献[17]的方法并稍作修改。通过混合10 mL 7 mmol/L ABTS溶液和10 mL的2.45 mmol/L过硫酸钾溶液,来制备ABTS自由基溶液,并在室温下黑暗中静置12～16 h。在使用前,将该ABTS自由基溶液用无水乙醇调节至734 nm处的吸光度为(0.7±0.02)。将100 μL水提物样品(12.5、25、50、100、150 μg/mL)加入到3.9 mL的ABTS自由基溶液中,并使其反应6 min,混匀于734 nm波长处测量吸光度Ai,蒸馏水代替ABTS的吸光度为Aj,蒸馏水代替样品的吸光度为A0。以TBHQ作为阳性对照。每个样品测定3 次,取平均值。

1.2.3.4 对羟基自由基的清除作用 参考文献[20]的方法并稍作修改。将2 mL水提物样品(31.25、62.5、125、250、500 μg/mL)依次加入2 mL 6 mmol/L的FeSO4和H2O2,混匀后静置10 min,再加入2 mL 6 mmol/L水杨酸,混匀静置30 min,测其510 nm波长处吸光度记为Ai,用去离子水代替水杨酸的吸光度记为Aj,用去离子水代替样品的吸光度记为A0。以TBHQ作为阳性对照。每个样品测定3次,取平均值。

1.2.3.5 对超氧阴离子自由基的清除作用 参考文献[21]的方法并稍作修改。取4.5 mL的 Tris-HCl缓冲溶液,加入3 mL去离子水混合均匀后,于25 ℃的恒温水浴锅中预热20 min,再加入邻苯三酚溶液0.4 mL,立即混匀后加入1 mL水提物样品(62.5、125、250、500、1000 μg/mL),于25 ℃恒温水浴锅中反应4 min后,迅速加入0.1 mL 8 mol/L的盐酸溶液终止反应。混匀后在325 nm波长处测定吸光度记为Ai。用去离子水代替邻苯三酚的吸光度记为Ai,用Tris-HCl缓冲溶液代替样品的吸光度记为A0。每个样品测定3次,取平均值。

1.2.3.6 总还原能力 参考文献[22]的方法并稍作修改。将1 mL水提物样品(6.25、12.5、25、50、100 μg/mL)加入含有2.5 mL pH=6.6的磷酸盐缓冲液和2.5 mL 1%铁氰化钾溶液中,混合均匀后于50 ℃水浴中保温20 min,之后加入2.5 mL 10%三氯乙酸,混匀后以3000 r/min离心10 min,移取上清液2.5 mL并加入2.5 mL去离子水和0.5 mL 0.1% FeCl3,常温反应5 min后于700 nm波长处测吸光度。用 BHT做阳性对照。每个样品测定3次,取平均值。

1.2.4 基于酿酒酵母评价4种茶水提物的抗氧化能力 参考Dani等[23]的方法,在酵母细胞生境中添加终浓度为2.0 mmol/L的H2O2作为额外氧化应激诱导物,诱导酵母细胞体内氧化还原状态失衡。实验前,先验证细胞毒性,得到4种茶对5株酵母菌的存活率与空白对照组无明显差异,证明4种茶对5株酵母菌均无细胞毒性后进一步进行抗氧化能力测定。

通过菌落计数法检测4种茶水提物的抗氧化能力,以细胞存活率作为评价抗氧化能力的标准[23]。将1 mL OD600=1的菌悬液与新鲜YPD(Yeast extract peptone dextrose medium)液体培养基(9 mL)充分混匀,再加入海南4种茶水提物(母液为50 mg/mL)至终浓度为100 μg/mL。振荡混匀后,摇床培养2 h(28 ℃,200 r/min)。接着向含有酵母细胞的YPD液体培养基中加入H2O2,使其终浓度为2.0 mmol/L,涡旋振荡均匀后,再摇床培养1 h(28 ℃和200 r/min)。接着用无菌水将酵母菌悬液稀释103倍,取100 μL的菌悬液涂布均匀,然后放置于28 ℃培养箱中,倒置培养,72 h后,计算细胞存活率。计算公式如下:

细胞存活率(%)=(N1/N)×100

其中,N1-经过氧化剂或海南4种茶水提物处理后的生长菌落数;N-未经过氧化剂和海南4种茶水提物处理的空白对照组的菌落总数。

1.2.5 4种茶水提物对5种致病细菌的抑菌作用 采用二倍稀释法[24],测定4种茶水提物抑制菌株的最小抑制浓度MIC值。5种细菌浓度约为1.0×108cfu/mL(麦氏比浊管)。实验重复3次。置于37 ℃恒温培养箱中培养24 h。分别取0.05 mL混合液涂布于MH固体培养基上,于37 ℃恒温培养箱培养24 h,如无细菌生长的该药液浓度最低者,即为对该菌株的最小抑菌浓度MIC。

1.3 数据统计分析

2 结果与分析

2.1 4种茶水提物中总多酚和总黄酮的含量

根据没食子酸的浓度拟合回归方程为Y=0.0014X+0.0016,R2=0.9967。总多酚通过4种茶水提物(1 mg/mL)的吸光度计算得到每克干重茶中茶水提物的没食子酸当量,单位为mg GAE/g DW。根据芦丁的拟合回归方程为Y=0.001X+0.0134,R2=0.9998。总黄酮通过4种茶水提物(1 mg/mL)的吸光度计算出每克干重茶中茶水提物的芦丁当量,单位为mg RE/g DW。

如表1可知,在总多酚的测定结果中,鹧鸪茶的总多酚含量最高,为(420.05±25.65) mg GAE/g DW,苦丁茶的总多酚含量最低,为(251.48±12.30) mg GAE/g DW;而在总黄酮含量测定结果中,苦丁茶的总黄酮含量最高,为(691.60±19.47) mg RE/g DW,鹧鸪茶的总黄酮含量最低,为(217.60±7.00) RE/g DW。

表1 4种茶水提物总多酚和总黄酮的含量(n=3)Table 1 Total polyphenols contents and total flavonoids contents of four kinds of tea extracts(n=3)

2.2 4种茶水提物对DPPH自由基的清除作用

由图1可看出,4种茶水提物和芦丁对DPPH自由基均具有清除作用,且呈一定的量效关系。当浓度小于25 μg/mL时,4种茶的清除率增加趋势较快;当浓度在25～50μg/mL时,各个清除率反而增加较慢,除苦丁茶抑制率为79.10%之外,另外三种茶提物的抑制率均达到80%,其中鹧鸪茶最高,为85.31%,可知鹧鸪茶对DPPH自由基的清除效果最好;同时芦丁对DPPH自由基清除率为80.09%,与4种茶提物的清除率相比,其低于鹧鸪茶、大叶种茶及白沙绿茶,而高于苦丁茶。根据表2中五者的IC50值比较其对DPPH自由基清除率,由强至弱的顺序为:鹧鸪茶>大叶种茶>芦丁>白沙绿茶>苦丁茶。

表2 4种茶水提物对DPPH自由基清除作用的量效拟合方程Table 2 Dose-effect relationship simulated equations of the DPPH radical scavenging activity of four kinds of tea extracts

图1 4种茶水提物对DPPH自由基的清除作用Fig.1 Scavenging effects of four kinds of tea extracts on DPPH radical

2.3 4种茶水提物对ABTS自由基的清除作用

由图2可看出,4种茶水提物和TBHQ对ABTS自由基均具有清除作用,且浓度12.5～25 μg/mL时,4种茶的清除率增加较缓慢,而随着浓度的增加,清除率均增加较快。当浓度达到150 μg/mL时,鹧鸪茶与大叶种茶的清除率分别为94.03%、90.98%,可知鹧鸪茶对ABTS自由基的清除效果最好;而白沙绿茶和苦丁茶的清除率分别为79.53%、38.19%,可知苦丁茶对ABTS自由基的清除效果最差;同时标准品TBHQ对ABTS自由基抑制率为62.00%,与4种茶提物的清除率相比,其抑制率均低于鹧鸪茶、大叶种茶和白沙绿茶。根据表3中五者的IC50值比较其对ABTS自由基清除率,由强至弱顺序为:鹧鸪茶>大叶种茶>白沙绿茶>TBHQ>苦丁茶。

表3 4种茶水提物对ABTS自由基清除作用的量效拟合方程Table 3 Dose-effect relationship simulated equations of the ABTS radical scavenging activity of four kind of tea extracts

图2 4种茶水提物对ABTS自由基的清除作用Fig.2 Scavenging effects of four kinds of tea extracts on ABTS radical

2.4 4种茶水提物的FRAP作用

以FeSO4质量浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,FeSO4为标准物质绘制标准曲线,拟合回归方程为Y=0.0062X+0.0327,R2=0.9986。样品的抗氧化能力以FRAP值表示(FRAP单位=1 mmol/L FeSO4),FRAP值越大,表明由抗氧化物质还原的Fe3+越多,即抗氧化物质的抗氧化活性越强。因此样品的抗氧化能力取决于FeSO4的毫摩尔数[25]。由表4可知,4种茶水提物对高价铁离子的还原作用由强至弱的顺序为:鹧鸪茶>苦丁茶>大叶种茶>白沙绿茶。可知,4种茶中鹧鸪茶的高价铁离子还原作用最强,而苦丁茶的还原作用也较高。

表4 4种茶水提物的FRAP作用结果比较(50 μg/mL)Table 4 Comparison of FRAP effects of four kind of tea extracts(50 μg/mL)

2.5 4种茶水提物的羟基自由基清除作用

由图3可看出,4种茶水提物和标准品TBHQ对羟基自由基均具有清除作用,且呈一定的量效关系。当浓度31.5～125 μg/mL时,TBHQ标准品的清除率最高,且随着浓度增加增长较快,而4种茶的清除率较低,且随着浓度增加增长较慢;但当浓度在250～500 μg/mL时,鹧鸪茶和大叶种茶的清除率增长较快,两者分别为88.07%、86.67%,说明高浓度的鹧鸪茶和大叶种茶对羟基自由基具有较高的清除率;其次是白沙绿茶和苦丁茶,两者的清除率分别为76.45%和67.92%,可知苦丁茶清除率较低;同时TBHQ对羟基自由基的清除率为88.48%,与4种茶提物相比,其清除率最高,说明标准品TBHQ对羟基自由基的清除效果最好。根据表5中五者的IC50值比较其对羟基自由基清除率,由强至弱的顺序为:TBHQ>大叶种茶>鹧鸪茶>白沙绿茶>苦丁茶。

表5 4种茶水提物对羟基自由基清除作用的量效拟合方程Table 5 Dose-effect relationship simulated equations of hydroxyl radical scavenging activity of four kind of tea extracts

图3 4种茶水提物对羟自由基的清除作用Fig.3 Scavenging effects of four kinds of tea extracts on hydroxy radical

2.6 4种茶水提物对超氧阴离子自由基的清除作用

由图4可看出,4种茶水提物和标准品TBHQ对超氧阴离子自由基均具有清除作用,且呈一定的量效关系。当浓度在250 μg/mL以内,4种茶和标准品的清除率增加较缓慢;但当浓度为500 μg/mL以上时,各个清除率均大幅度增加,且清除率趋于接近。鹧鸪茶和大叶种茶两者在1000 μg/mL时的清除率分别为84.86%和78.32%,可知鹧鸪茶对超氧阴离子自由基的清除效果最好;其次是白沙绿茶和苦丁茶,两者的清除率分别为77.31%和73.27%,可知苦丁茶对超氧阴离子自由基的清除效果最差;同时4种茶提物与标准品TBHQ相比,TBHQ的清除率最低,为72.60%,说明TBHQ对超氧阴离子自由基的清除效果均不如以上4种茶提物。根据表6中五者的IC50值比较其对超氧阴离子自由基清除率,由强至弱的顺序为:大叶种茶>鹧鸪茶>白沙绿茶>苦丁茶>TBHQ。

图4 4种茶水提物对超氧阴离子自由基的清除作用Fig.4 Scavenging effects of four kinds of tea extracts on superoxide anion radical

表6 4种茶水提物对超氧阴离子自由基清除作用的量效拟合方程Table 6 Dose-effect relationship simulated equations of superoxide anion radical scavenging activity of four kinds of tea extracts

2.7 4种茶水提物的总抗氧化能力

由图5看出,4种茶水提物和标准品BHT的总还原能力通过吸光度值进行比较,可知五者均有总还原能力,且总还原能力随着浓度的增加而增加,呈一定的量效关系。大叶种茶在5个浓度中均比另外三种茶水提物的吸光度值高,说明大叶种茶的总还原能力最强,其次是鹧鸪茶的总还原能力较强,白沙绿茶和苦丁茶的总还原能力较弱;同时4种茶水提物与标准品BHT相比,BHT的总还原能力较高,但低于大叶种茶;而鹧鸪茶在前4个浓度中其总还原能力都高于标准品BHT,但当浓度升为100 μg/mL时,总还原能力低于标准品BHT。根据表7中五者的IC50值比较其总抗氧化能力,由强至弱的顺序为:大叶种茶>BHT>鹧鸪茶>白沙绿茶>苦丁茶。

表7 4种茶水提物总抗氧化能力的量效拟合方程Table 7 Dose-effect relationship simulated equations of total antioxidant capacity of four kinds of tea extracts

图5 4种茶水提物的总抗氧化能力Fig.5 Total antioxidant capacity offour kinds of tea extracts 注:*代表同浓度组之间各处理与BHT处理相比具有显著差异(p<0.05)。

2.8 基于酿酒酵母评价4种茶水提物的抗氧化能力

基于酿酒酵母评价4种茶水提物的抗氧化能力结果如图6所示,空白对照组各株酵母菌在受到H2O2氧化应激后,细胞存活率下降明显,尤其是基因缺陷型酵母ctt1Δ受到H2O2氧化应激后存活率仅剩2.87%。当分别加入4种茶水提物之后,各株酵母菌的存活率均明显有所提高,其中基因缺陷型菌株gsh1Δ在加入苦丁茶时存活率最高,其存活率为43.61%,提高了30.21%;其次为基因缺型菌株sod1Δ加入白沙绿茶后存活率最高,菌株sod1Δ存活率提高了20.59%;对于基因缺陷型菌株gtt1Δ加入苦丁茶后存活率最高,且提高了16.43%;最敏感的基因缺陷型酵母菌株ctt1Δ,在加入鹧鸪茶后存活率最高,且提高了15.71%;而野生型菌株WT,分别加入苦丁茶、白沙绿茶、大叶种茶和鹧鸪茶后，发现这4种茶对菌株WT的存活率作用并不理想,其中鹧鸪茶最高仅提高了6.49%。以上结果可说明,4种茶对5株酿酒酵母的抗氧化能力具有一定的选择性,其中苦丁茶对于基因缺陷型菌株gsh1Δ的抗氧化活性最强。4种茶对野生型菌株WT的抗氧化活性较差,其原因可能与野生型菌株WT本身的抗氧化防御机制相关,其防御机制完善，因而对于外源物质会产生抵抗效果，使得茶提物成分未进入细胞内起作用;而4株基因缺陷型菌株，通过加入茶提取物之后，其活性成分有助于补充基因缺陷型菌株的防御功能;且抗氧化能力较差的茶提取物更有可能与该菌株基因缺陷表达相关[26]。

图6 H2O2胁迫下4种茶水提物对酿酒酵母的抗氧化能力Fig.6 Antioxidant capacity of four kind of tea extracts under H2O2 stress to Saccharomyces cerevisiae注:*代表同菌种组之间各处理与H2O2+水处理相比有显著差异(p<0.05),* *代表极显著(p<0.01)。

2.9 4种茶水提物对5种致病菌的抑菌作用

由表8可知,4种茶对致病菌有一定的抑制活性,但不如阳性对照链霉素抑菌效果强。苦丁茶对绿脓杆菌和枯草芽孢杆菌没有明显抑制效果,但是对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌效果,其MIC为3.13 mg/mL;其次是蜡样芽孢杆菌,其MIC为6.25 mg/mL;而大肠杆菌有较低的抑菌效果,其MIC为12.50 mg/mL。白沙绿茶对绿脓杆菌、蜡样芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌均没有明显抑制效果,同时对大肠杆菌的抑制效果也很低,而对枯草芽孢杆菌具有较强的抑制效果,其MIC为6.25 mg/mL。大叶种茶对枯草芽孢杆菌也没有明显抑菌效果,而对金黄色葡萄球菌具有很强的抑菌效果,其MIC为1.56 mg/mL;其次是对蜡样芽孢杆菌具有较强的抑菌效果,其MIC为6.25 mg/mL;而对大肠杆菌和绿脓杆菌效果较低,其MIC均为12.50 mg/mL。鹧鸪茶对金黄色葡萄球菌也具有较强的抑制活性,MIC为3.13 mg/mL;且对另外4种致病菌的MIC均为6.25 mg/mL。由此可知,4种茶对5种致病菌的抑制具有一定的选择性,且大叶种茶对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,鹧鸪茶的抑菌活性较为广谱。

表8 4种茶水提物对5种致病菌的生长情况Table 8 Growth of four kind of tea extracts against five kind of pathogenic bacteria

3 讨论

通过对海南4种茶水提物的总多酚和总黄酮含量测定,由结果可知,鹧鸪茶的总多酚最多,为(420.05±25.65 mg) GAE/g DW,远远大于李晓彤等[15]的鹧鸪茶水提物研究结果((25.085±0.196) mg CE/g DW),其主要原因为与方法不同以及所选的标准品不同,同时样品提取方法也不相同,其有效成分含量也有一定的差异。而4种茶中苦丁茶的总黄酮含量最多,为(691.60±19.47) mg RE/g DW。同时通过4种茶水提物对6种体外抗氧化能力的测定,综合测定结果得知鹧鸪茶的体外抗氧化能力最强,说明体外抗氧化活性与总多酚具有一定的相关性,通过与Kwon等[27]报道相比,自由基清除能力与酚含量增加成正相关关系,其结果是一致的。

通过对5株酿酒酵母的抗氧化活性测定,得知4种茶对5株酿酒酵母的抗氧化能力具有一定的选择性,其中苦丁茶对于基因缺陷型菌株gsh1Δ的抗氧化能力最强,而4种茶中苦丁茶的黄酮含量最高,因此可进一步猜测基因缺陷型菌株gsh1Δ的抗氧化机制是否与黄酮相关。

通过对5种致病菌的活性测试,得到海南大叶种茶对于金黄色葡萄球菌的抑制效果最佳,其MIC值为1.56 mg/mL,可为食品防腐剂提供理论依据;同时鹧鸪茶对大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、绿脓杆菌以及枯草芽孢杆菌均有一定的抑制作用,其MIC值均为6.25 mg/mL,表明鹧鸪茶的抑菌活性较为广谱。以上对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的实验结果与吕平等[28]4种茶不同提取物的体外抑菌作用研究结果相近。

4 结论

通过对海南苦丁茶、白沙绿茶、大叶种茶及鹧鸪茶的水提物体外抗氧化活性和抑菌活性比较发现,4种茶提物中,鹧鸪茶的总酚含量((420.05±25.65) mg GAE/g DW)最高;苦丁茶的黄酮含量((691.60±19.47) mg RE/g DW)最高;鹧鸪茶对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基清除作用以及对高价铁离子还原能力最强,而大叶种茶的总还原能力最强。4种茶水提物分别对H2O2氧化应激胁迫下的5株酿酒酵母有一定的抗氧化能力,其中,经过苦丁茶水提物处理后基因缺陷型菌株gsh1Δ的存活率提高了30.21%,其抗氧化能力最强;4种茶水提物分别对5种致病细菌有一定的抑制作用,其中大叶种茶对于金黄色葡萄球菌的抑制效果最好,其MIC值为1.56 mg/mL。鹧鸪茶对大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、绿脓杆菌以及枯草芽孢杆菌均有抑制作用,其MIC值均为6.25 mg/mL。以上的研究结果表明,海南4种茶水提物具有不同的抗氧化活性及抑菌活性,其活性与总酚含量存在一定相关,鹧鸪茶总酚含量较高,抗氧化活性和抑菌活性较好。该结果能否有广泛的适应性还需要进一步验证。