扎布耶盐山羊金黄色葡萄球菌分离鉴定及药敏试验

何冰梅，马弘财，德 吉

（1.西藏自治区农牧科学院，西藏 拉萨 850000；2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏 拉萨 850009）

葡萄球菌是自然界分布最广的致病菌，镜检时呈球形，革兰染色呈阳性，常聚集成葡萄串样，感染动物后以体表、皮肤和肌肉出现结节性脓疱为特征［1］。羊葡萄球菌病由金黄色葡萄球菌引起羊的葡萄球菌病，损害部位不同，病情不完全一致，经破裂和损伤的皮肤、黏膜、汗腺、毛囊感染的羊一般表现毛囊炎、皮下脓肿、脱毛或乳腺炎等，经消化道感染可引起食物中毒和胃肠炎，经呼吸道感染可引起气管炎、肺炎［2］。

扎布耶盐山羊是一种具有耐粗饲、耐高寒、抗缺氧、抗病力强、适应性好等独特的生理学特性，其主要生活在西藏仲巴县帕江乡海拔为4 400 m左右的扎布耶盐湖周围［3-4］。该调查采集仲巴县帕江乡羊场的疑似感染葡萄球菌的病扎布耶盐山羊脓汁、乳汁、血样及部分病变组织进行金黄色葡萄球菌分离鉴定及药敏试验，以期为地处高海拔的仲巴县帕江乡羊场金黄色葡萄球菌病诊治提供了诊断方法和治疗用药方案。

1 材料与方法

1.1 试验材料与地点

1.1.1 病料来源：据仲巴县帕江乡兽防站工作人员介绍，该乡帕江乡羊场放牧羊群中有部分个体出现消瘦、掉队、跛行、关节肿胀等症状。

2018年5月，针对仲巴县帕江乡羊场的扎布耶盐山羊开展金黄色葡萄球菌调查。采集疑似感染金黄色葡萄球菌的病羊局部化脓灶脓汁或羔羊败血症的血液［5］、肝脏、脾脏、母羊乳汁［6］，共 117头份。

1.1.2 主要培养基

1.1.2.1 营养肉汤培养基［7］：取牛肉膏粉3.0 g、蛋白胨10.0 g、NaCl 5.0 g，加热溶解于1 000 mL蒸馏水中，调pH值至7.2～7.4，121℃高温高压灭菌20 min。备用。

1.1.2.2 血琼脂平皿：取牛肉膏粉3.0 g、蛋白胨10.0 g、NaCl 5.0 g、琼脂粉 15.0 g，加热溶解于1 000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，晾至50～55℃时，无菌操作加入100 mL无菌脱纤维羊血，混匀，倾入无菌平皿。

1.1.2.3 却浦曼琼脂培养基：取明胶30.0 g、氯化钠 75.0 g、胰蛋白胨 10.0 g、D-甘露醇 10.0 g、酵母浸膏2.5 g、磷酸氢二钾 5.0 g、硫酸铵75.0 g、琼脂15.0 g，加热溶解于 1 000 mL蒸馏水中，调pH至6.8～7.2，121℃高温高压灭菌20 min。备用。

1.1.2.4 BHI培养基［7］：取牛脑浸粉 4.0 g、牛心浸粉4.0 g、蛋白胨 5.0 g、酪蛋白胨 16.0 g、葡萄糖 2.0 g、NaCl 5.0 g、磷酸氢二钠 2.5 g、琼脂 15.0 g，加热搅拌溶解于1 000 mL蒸馏水中，调pH至7.2～7.6，121℃高温高压灭菌20 min。备用。

1.2 试验方法

1.2.1 临床检查：触诊检查消瘦、掉队、跛行的发病羊的肿胀部位。剖检疑似金黄色葡萄球菌感染的发病羊，观察其肝脏、脾脏、肾脏和、股前淋巴结和肠系膜淋巴结病变，并无菌采集肝脏、脾脏、肾脏和股前淋巴结、肠系膜淋巴结于实验室进行病原菌分离鉴定。

1.2.2 镜检：将采集的病羊局部化脓灶脓汁或羔羊败血症的血液、肝脏、脾脏、乳汁，经初步涂片镜检。

1.2.3 培养：将病料无菌接种于却浦曼琼脂培养基，于（37±1）℃恒温箱中培养 24 h，将较小的黄色菌落划线接种于血平板，培养24 h，挑取可疑菌落1个以上，分别接种到营养肉汤培养基和BHI培养基平板，置于恒温箱（37±1）℃中培养24 h。

1.2.4 生化鉴定：使用法国梅里埃VITEK 2 Compact细菌全自动微生物鉴定系统对分离菌株进行生化鉴定。

1.2.5 药敏试验：使用药物诺氟沙星、氯霉素、庆大霉素、苯唑西林、头孢西丁、万古霉素、氨苄西林、头孢唑林、头孢拉定、复方新诺明、恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星进行药敏试验。药物敏感实验判定标准如表1。

2 结果与分析

2.1 临床症状

病羊消瘦、掉队、跛行，关节肿胀，触诊肿胀部位有波动感。

表1 药物敏感实验判定标准

2.2 剖检症状

疑似金黄色葡萄球菌感染羔羊，其肝脏、脾脏和肾脏表面有灰白色的坏死点；股前淋巴结和肠系膜淋巴结肿大；有大理石样病变；关节肿胀部有脓包。

2.3 病原菌分离

从117头份样品中分离出29头份样品有如下共性的病原菌：营养肉汤培养基和BHI培养基平板划线出现圆形隆起、光滑、湿润菌落。从平板上挑取可疑菌落进行革兰氏染色，结果如图1所示，该菌呈革兰氏阳性，且无芽胞、荚膜，圆形，直径0.5～1 μm，显微镜下呈葡萄状排列，也有个别2个或3个球菌相连。初步判断该羊场的病羊为金黄色葡萄球菌感染。

图1 葡萄球菌镜检结果（100×10油镜）

2.4 病原菌生化鉴定

将上述分离的菌株经梅里埃VITEK 2 Compact细菌全自动微生物鉴定系统生化鉴定结果与金黄色葡萄球菌符合率97%［8］，表明该羊场为金黄色葡萄球菌感染。

2.5 药敏试验

药敏结果显示，对13种抗生素抑菌圈直径均为15～20 mm，表明该羊场分离出的金黄色葡萄球菌对这些抗生素均高度敏感。

3 讨论

金黄色葡萄球菌作为一种条件致病菌，在自然界广泛存在，生活在适宜的条件下，可大量繁殖，引起人和动物致病［9］。在临床上常表现多种类型的感染，如关节炎、腱鞘炎、脐炎和葡萄球菌性败血症等，给养羊业造成较大的损失［8］。该调查研究针对仲巴县帕江乡羊场的扎布耶盐病羊开展金黄色葡萄球菌调查，采集的样品具有针对性，分离鉴定出的金黄色葡萄球菌检出率16.24%（19/117），说明海拔4 400 m仲巴县帕江乡羊场5月存在金黄色葡萄球菌，并能在较为寒冷的季节繁殖［10］。

生化鉴定的金黄色葡萄球菌，药敏试验对诺氟沙星、氯霉素、庆大霉素、苯唑西林、头孢西丁、万古霉素、氨苄西林、头孢唑林、头孢拉定、复方新诺明、恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星13种抗生素均高度敏感，说明在藏西北养羊生产过程抗生素使用较少，更没有滥用药物治疗。

此外，羔羊患有金黄色葡萄球菌病的脓肿较多，大多与羔羊出生时断脐不消毒或消毒不彻底，或与橡皮筋断尾和去势引起的转移性脓灶有关。因此，羔羊出生时断脐时要彻底消毒，对荆棘丛划伤的皮肤创伤、顶架创伤等应及时处理，合理用药，避免滥用抗生素。建议对发病羊只进行庆大霉素肌肉注射，连用1周。