胶体金免疫层析技术在羊布鲁氏菌病的检测应用

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青海省是我国布病流行的重疫区，根据我国动物布鲁氏菌病的诊断技术标准(GB/T18646-2002),通常采用虎红平板凝集试验进行牲畜布病筛选,采用试管凝集试验进行布病的确诊,但由于SAT有时出现前带现象和封闭现象，所以有时也出现假阴性结果，必要时需要和其他方法联合应用。胶体金免疫层析技术(GICA)是将胶体金标记技术、免疫检测技术和蛋白层析技术相结合的以硝酸纤维膜为载体的固相膜免疫分析技术，适用于现场快速检测。GICA已被广泛应用于动物病毒、细菌、寄生虫等兽医病原学检测和临床诊断中[1]。为了解GICA灵敏度和特异度，特将GICA与RBPT、 SAT进行了对比研究。

1 材料与方法

1.1一般材料 样本取自格尔木地区送检的羊血清299份。

1.2实验试剂 虎红凝集抗原、试管凝集抗原、兽用阴阳性标准血清均由中国兽医药品监察所提供，有效期为2018年10月12日，羊布鲁氏杆菌病抗体快速试剂盒为广州悦洋生物技术有限公司提供，有效期为2018年11月9日。

1.3 试验方法

1.3.1虎红凝集试验和试管凝集试验以《动物布鲁氏菌病诊断技术(GB/T18646-2002)》为标准进行。

1.3.2胶体金免疫层析技术按照产品说明书的操作，取待检血清10 μL滴入试纸条的样品孔中，再滴入缓冲液4滴，20 min内判定结果，C为质控线，T为检测线，C有显示T才有效。

1.4统计学方法 运用SPSS19.0统计软件进行统计分析。

1.5Kappa值判断标准：Kappa值<0，一致性强度弱；Kappa值为0～0.2，一致性强度为轻；Kappa值为0.21～0.40,一致性强度为尚好；Kappa值为0.41～0.60,一致性强度为中度；Kappa值为0.61～0.80,一致性强度为高度；Kappa值为0.81～1,一致性强度为最强。

2 结 果

2.1299份羊血清样本3种方法检测结果 RBPT、SAT和GICA 3种方法进行检测见表1。

表1 3种实验方法布病检测结果Tab.1 Three experimental methods of testing results about brucellosis

2.2RBPT与SAT进行对比 RBPT与 SAT进行对比有统计学意义(χ2=282.563，P<0.001)，检测结果灵敏度为100%，特异度为99.23%，Kappa=0.972，两种方法的一致性强度为最强(Kappa值>0.81)，说明一致性好(表2)。

2.3GICA与SAT进行对比 GICA与SAT进行对比有统计学意义(χ2=256.577，P<0.001)，检测结果灵敏度为90%，特异度为100%，一致性都量Kappa=0.940，两种方法的一致性强度为最强(Kappa值>0.81)，说明一致性好(表3)。

表2 RBPT与SAT布病检测结果符合率对比Tab.2 Comparison of coincidence rate about RBPT and SAT brucellosis testing

表3 GICA与SAT布病检测结果符合率对比Tab.3 Comparison of coincidence rate about GICA and SAT brucellosis testing

3 讨 论

胶体金免疫层析技术因为具有特异、使用简便、快速检测的特征在兽医临床上其发展潜力和应用前景是非常巨大的[2]，此次将GICA应用于羊布鲁氏菌病的检测，通过与SAT、RBPT两种检测方法，进行比较得出3种方法的检测结果基本一致，均为阳性的有36份。运用Kappa值一致性强度判断分析得出，GICA特异度指标略高于RBPT，与SAT一致。动物布鲁氏菌病诊断标准中通常采用RBPT进行筛选,采用SAT进行确诊。SAT具有敏感性强，特异性高等优点,但其操作步骤繁琐，所需器械多，样本消耗量大，观察结果用时长等因素的影响[3-4]，致使在现场工作中受限。而GICA刚好弥补了以上缺点，它样本用量低，试验条件要求不高，操作方法便捷、观察结果快速、便于保存等优点[5]，使胶体金免疫层析技术更适用于布病现场快速筛检工作，有巨大的发展潜力和广阔的应用前景，从而促进青海省人、畜间布病预防控制工作健康、有序的发展。