盐酸倍他司汀片溶出度测定方法的研究

周敏 丁云晖 李德祥

上海上药中西制药有限公司 （上海 201806）

盐酸倍他司汀化学名为N-甲基-2-吡啶乙胺二盐酸盐，属于组胺类药物，是一种常用的血管扩张药物。盐酸倍他司汀主要用于治疗椎基底动脉供血不足、美尼尔氏综合症、脑动脉硬化、不稳定心绞痛，取得了一定的治疗效果；对高血压所致直立性眩晕、耳鸣等亦有效[1-4]。

印度药典[5]收载有盐酸倍他司汀片溶出度的测定方法，也有文献[6]研究了盐酸倍他司汀片溶出度的检测方法，但是未对溶出度方法进行筛选。本文参照印度药典及日本橙皮书《医疗用药品品质情报集》的相关内容，建立了简便、准确、可行、精密度高的方法来测定盐酸倍他司汀的溶出度。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

仪器：Agilent 1260型高效液相色谱仪、紫外检测器和色谱工作站，美国安捷伦科技公司；SOTAX AT7 smart自动溶出仪，瑞士SOTAX公司；Mettle xpe105电子天平，梅特勒-托利多国际有限公司。

试剂与药品：甲醇（色谱纯），Merck公司；纯化水、无水乙酸钠（分析纯）、1-庚烷磺酸钠（分析纯）、三乙胺（色谱纯）、冰乙酸（分析纯）、盐酸（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；盐酸倍他司汀工作用对照品（批号为：100265-201203，w=99.6%）、盐酸倍他司汀片 （批号为：T171251，T171252，T171253，4 mg/片），上海上药中西制药有限公司。

1.2 样品处理

1.2.1 供试品溶液

取样品适量，采用2015年版《中华人民共和国药典》（四部）“溶出度与释放度测定”第二法（浆法），以盐酸溶液(pH=1.2)为溶出介质，体积为900 mL，转速为50 r/min，温度为（37±5）℃。依法操作，于30 min时取溶出液适量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

1.2.2 对照品溶液

取盐酸倍他司汀对照品适量，精密称定，加盐酸溶液(pH=1.2)溶解并定量稀释制成每1 mL中约含4 μg盐酸倍他司汀的溶液，作为对照品溶液。

1.3 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；

流动相：0.01 mol/L的醋酸钠缓冲液（含0.004 mol/L庚烷磺酸钠，0.2%三乙胺，用冰醋酸调节pH=3.3)-甲醇（体积比为 70∶30）；流速：1.0 mL/min；紫外检测波长：261 nm；进样量：20μL；柱温：25 ℃。

2 色谱条件选择

2.1 检测波长的选择

采用紫外分光光度法，在200～400 nm范围内对对照品溶液进行扫描，盐酸倍他司汀的最大吸收峰在261 nm处，故选择261 nm为检测波长。

2.2 系统适用性试验

精密量取对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，连续进样5次，考察重复性，结果见表1。

表1 对照品溶出度重复性试验结果

溶出度重复性实验结果表明，该方法系统适用性良好。

2.3 辅料干扰

空白辅料不干扰主药的测定。

2.4 检测限与定量限

取盐酸倍他司汀对照品0.02216 g，置于50 mL量瓶中，加适量盐酸溶液（pH=1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。量取上述贮备液，用盐酸溶液（pH=1.2）逐级稀释，以主成分峰与基线噪音的信噪比约为10时的浓度为定量限浓度，进样20μL，定量限为12.409 6 ng/mL；将定量限浓度稀释约3倍后，此时仪器的信噪比约为3∶1，定为检测限质量浓度，则检测限为3.4769 ng/mL。

2.5 线性范围

取盐酸倍他司汀对照品0.022 32 g，置于100 mL量瓶中，用盐酸溶液(pH=1.2)溶解并定量稀释制成一系列不同质量浓度的溶液，参照上述色谱条件，精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果见表2。

表2 盐酸倍他司汀线性关系表

2.6 重复性实验

取同一批样品的供试品溶液6份进行HPLC测定，结果见表3。

经过计算，溶出度平均为95.88%，相对标准偏差（RSD）为1.47%，表明实验方法重复性良好。

表3 盐酸倍他司汀溶出度重复性实验%

2.7 中间精密度

由不同分析人员在不同时间取同一批样品的供试品溶液6份进行HPLC测定，结果见表4。经计算，溶出度平均为96.06%，RSD为1.17%，表明该方法具有良好的中间精密度。

表4 盐酸倍他司汀溶出度中间精密度实验 %

2.8 稳定性实验

取同一批号供试品溶液，在 0，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h 进样测定，考察供试品中盐酸倍他司汀峰面积的稳定性。结果显示盐酸倍他司汀峰面积的RSD为0.37%，表明供试品溶液在24 h内保持稳定。

2.9 回收率实验

精密称取盐酸倍他司汀对照品适量，按处方量加入辅料，加盐酸溶液(pH=1.2)溶解并定量稀释。精密量取20μL注入液相色谱仪中，按外标法以峰面积计算盐酸倍他司汀的测得量和回收率，结果见表5。由表5可知，平均回收率为9.73%，RSD为0.7%。表明盐酸倍他司汀的回收率良好。

2.1 0 耐用性实验

取同一批供试品溶液各20μL，分别于0.8，1.0，1.2 mL/min流速下进样，测定的溶出度平均值分别为95.80%，95.88%，95.90%；调节流动相比例分别为 68∶32与 75∶25，在该条件下进样，所测定的溶出度平均值分别为97.09%，95.70%；调节温度分别为20，30℃，测定的溶出度平均值分别为95.73%，95.82%；将色谱柱更换为Phenomenex C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm），测定的溶出度平均值为95.90%。一系列实验结果表明该方法的系统耐用性良好。

表5 回收率及RSD结果汇总

3 溶出条件筛选

3.1 溶出介质的选择

取市售品（SERCTABLETS，批号为 640198），对其在水、盐酸溶液（pH=1.2）、醋酸盐缓冲液（pH=4.0）、磷酸盐缓冲液（pH=6.8）等溶出介质中的溶出曲线进行测定。测定方法参考文献(采用桨法、50 r/min、900 mL溶出介质)，在 5，10，15，20，30，45，60 min 时取样，按1.3节中色谱条件进样测定。结果见表6。

表6 溶出度相似度评价及溶出介质的选择试验结果

表6表明，市售盐酸倍他司汀在上述溶出介质中的溶出行为均相似。盐酸倍他司汀片为胃溶型制剂，盐酸溶液更接近人体胃中的环境，为了更好地模拟体内环境，故选择盐酸溶液为溶出介质。

3.2 溶出介质体积的选择

本品拟采用大杯法，而大杯法常用介质体积为500～1 000 mL，实验选择常用的900 mL。为考察在选定的体积下，盐酸倍他司汀在各溶出介质中的溶解度是否理想，设计了原料的饱和溶解度实验。

饱和供试品溶液的制备：取盐酸倍他司汀原料（批号：170107）过量，分置于4个10 mL的容量瓶中，分别加pH=1.2的盐酸溶液、pH=4.0的醋酸盐缓冲液、pH=6.8的磷酸盐缓冲液、水至刻度，置于37℃的水浴中振荡，使之形成过饱和溶液（以盐酸倍他司汀原料在上述各溶剂中未完全溶解作为判断依据）；过滤，取续滤液即得饱和供试品溶液。经HPLC法测得饱和溶液的准确质量浓度，计算溶解度并绘制pH-溶解度曲线。

对照品溶液的制备：另取盐酸倍他司汀对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含盐酸倍他司汀40μg的溶液。

按上述拟定的HPLC的色谱条件，取对照品溶液与饱和供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以盐酸倍他司汀的峰面积计算各溶出介质中的溶解量，结果见表7。从表7可以看出，溶解量最低的醋酸中盐酸倍他司汀的溶解度为980.733 312 mg/mL，远大于溶出度测定时的最高浓度（4 mg/900 mL=0.0044 mg/mL），因此，900 mL的体积完全可以满足漏槽条件。

表7 盐酸倍他司汀饱和溶解度试验结果

3.3 溶出转速的选择

采用桨法-转速为75 r/min在选定的盐酸溶液(pH=1.2)中测定溶出度，绘制溶出曲线，与桨法-转速为50 r/min时在相同介质中的溶出曲线进行比较，结果见图1。

由图1可见，适宜的转速为50 r/min。

3.4 取样时间的确定

根据表6市售品在4种介质中不同时间点的平均累积溶出数据，在30 min时，盐酸倍他司汀溶出基本达到平衡，故确定取样时间为30 min。

图1 溶出度-转速选择溶出曲线

3.5 样品溶出度测定及溶出限度的确定

取3批样品各适量，按1.2节中方法制备供试品溶液，再按1.3中色谱条件进样测定，记录峰面积并计算溶出度，结果见表8。

表8 盐酸倍他司汀片溶出度试验结果

3批样品的主成分在30 min时的溶出度在97%～103%之间，依据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，限度拟订为80%。

4 结论

（1）实验色谱条件参考了2015版《中华人民共和国药典》（二部）[7]中收载的盐酸倍他司汀片含量的色谱条件，方法学验证表明，该色谱条件下理论塔板数高，出峰快，灵敏度高。

（2）溶出条件的选择参考了印度药典以及日本橙皮书，经条件筛选，以pH=1.2的盐酸溶液为溶出介质，溶出体积为900 mL，取样时间点为30 min，转速为50 r/min。

溶出度试验是评价口服固体制剂质量的一种重要手段，故有必要增加溶出度检查。