仔猪复方中草药饲料添加剂的抑菌及急性毒理学研究

杨猛，黄亚东，张二飞,郑琪

（江苏食品药品职业技术学院，江苏淮安223005）

仔猪断奶时容易产生腹泻、营养不良，进而影响仔猪生长性能，长期使用抗菌药和激素的滥用，产生了细菌耐药性增加、环境污染等一系列问题，严重威胁规模化猪场的健康养殖和人类健康[1]。以我国产量丰富的中草药为原料研制饲料添加剂，代替抗生素防治仔猪腹泻，具有抗病促生长显著效果、作用方式独特、无有害残留、不易产生抗药性等优点[2]。

1 材料

1.1 中草药复方制剂

根据单味中草药的抑菌效果和病原菌种类，结合中医药理论，配制出2剂“止泻散”仔猪复方中草药饲料添加剂。

1.2 试验动物

试验动物为昆明种小白鼠，体重为18～22g，用常规方式饲养，自由采食。购于扬州大学。

2 方法

2.1 抑菌试验方法

2.1.1 药敏性试验 采用牛津杯加注药液的体外抑菌法。将12cm灭菌培养皿分成6个扇区。中草药及复方的醇提物按照同样的方法进行体外抑菌试验[3]。

2.1.2 最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定 依据水提物、醇提物抑菌结果，采用10倍稀释法及2倍稀释法，测定MIC和MBC。

10倍稀释法：用无菌营养肉汤倍比稀释药液（终体积5mL），37℃培养24h。以不显示浊度、细菌未生长时的药物浓度作为MIC，并取该管中0.05mL肉汤，接种于营养琼脂平板；37℃培养24h，平板上无菌落或菌落生长数≤10的药物浓度为MBC[3]。

2倍稀释法：根据10倍稀释法结果，进一步确定MIC和MBC，MIC和MBC判定同10倍稀释法[3]。

2.2 急性毒性试验（LD50的测定）

根据此前预试验结果，设 20000mg/kg，29000mg/kg，42050mg/kg和60973mg/kg4个剂量组（等比级数1.45）和一个空白对照组。取18～22g小白鼠，每组10只，雌雄各半，连续给药7d，每天观察小白鼠精神、食欲、饮水、活动及中毒情况，并记录小白鼠的死亡数目[4]。

2.3 数据统计分析

表1 中草药复方制剂水提物对6种病原菌的抑菌效果比较（抑菌）

表2 中草药复方制剂的水浸提物对6种病原菌的MIC和MBC（g/mL）

试验值以平均数±标准差表示，并采用SPSS17.0进行单因素方差分析。

3 结果与分析

3.1 抑菌试验结果

3.1.1 中草药复方制剂水提物对6种相关病原菌的抑菌直径

3.1.2 中草药复方制剂水提物对6种病原菌的MIC和MBC

由表1和表2，抑菌直径、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分析可知，根据单味中草药的抑菌效果和病原菌种类，结合中医药理论，配制的2剂中草药复方制剂都有较好的抑菌和杀菌效果，并且复方制剂与单味中草药相比抑菌和杀菌效果均优于单味中草药。

3.2 毒理学试验结果

经7d观察，全部小白鼠的精神、食欲、饮水等情况和对照组比较均无异常。据此确定小白鼠灌服中草药饲料60973mg/kg后，仍没有出现中毒死亡。按毒理学评价标准，可不必测定半数致死量（LD50），即 LD50＞60973mg/kg。结果表明，中草药饲料添加剂属于实际无毒类物质。

4 结论

据抑菌直径、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分析可知，依据单味中草药的抑菌效果和病原菌种类，结合中医药理论，配制的2剂中草药复方制剂都有较好的抑菌和杀菌效果，并且复方制剂抑菌和杀菌效果均优于单味中草药。

急性毒理学试验、蓄积毒性试验结果显示，复方中草药饲料添加剂是一种无毒副作用的纯天然的绿色药物。