苦豆子总生物碱对溃疡性结肠炎大鼠中HSP70的影响*

李 华，骆文婷，陈泽伟，郑慰武，谢文源，龙亚秋，邓虹珠△

(1.南方医科大学南方医院药学部，广州 510515；2.广东省中医院急诊科，广州 510120)

溃疡性结肠炎(UC)为慢性非特异性自身免疫性疾病，是一种发生于结肠部位的慢性溃疡性病变，与遗传、免疫、感染、环境等多种因素有关，以腹泻、黏液、脓血便、腹痛和里急后重等为主要症状。流行病学表明，我国UC年患病率为11.6/10万[1]。近年来随着人们生活水平的提高，饮食结构、生活习惯的改变，环境的变化，该病在我国的发病率有逐年增高。由于UC病程长，病变范围广，患者生活质量严重受限，且有5%～10%的UC患者易发生癌变，临床上至今尚无特异性根治措施，被WHO列为现代难治病之一。因该病西药治疗不良反应多或价格昂贵，患者不易坚持长期用药，且复发率较高，而中医疗法不良反应较小，具有简捷、长效、价廉、安全的特点，显示出独特优势，具有广阔的应用前景[2]。

据笔者前期研究，苦豆子总生物碱(TASA)能改善三硝基苯磺酸(TNBS)致UC的动物模型的结肠炎性反应[3-6]。本研究采用TNBS诱导的UC大鼠，随机分组、造模处理，从热休克蛋白70(HSP70)探讨TASA对TNBS诱导的UC的影响。

1 材料与方法

1.1材料 选取SPF 级 SD 大鼠55只，雄性，购自南方医科大学实验动物中心,饲养于南方医科大学南方医院药学部动物所。将大鼠分为 5 组,每组11只：即空白对照组(A组)、模型组(B组)、柳氮磺吡啶(SASP)组(C组)、TASA高剂量组(D组)，TASA低剂量组(E组)，B组、C组、D组、E组采用TNBS复制UC大鼠模型。

1.2主要试剂 TNBS(批号2016715)购自南方医科大学试剂中心，0.80 mL TNBS+0.25 mL 50%乙醇备用造模。SASP(批号151201)购自广东省中医院；TASA(含槐定碱25.17%)由广东医科大学药学院提供；联苯胺(批号060201)购自中国远航试剂厂；过氧化氢(批号151217)购自广东恒健制药有限公司；冰醋酸(批号20160423)购自南方医科大学试剂中心。

1.3方法

1.3.1模型复制及处理 采用TNBS/乙醇法造模。造模前大鼠禁食24 h(不禁水)，经10水合氯醛腹腔麻醉后，将TNBS/乙醇液(TNBS 100 mg/kg+50% 乙醇0．25 mL)用橡胶输液管由大鼠肛门轻缓注入深约8 cm肠腔内留置，次日即出现症状，大鼠懒动、厌食，出现血便和体质量减轻等，与临床症状极为相似，空白对照组注入等量生理盐水。造模同时：C组灌胃给予SASP(400 mg/kg)，D组灌胃给予TASA(60 mg/kg)，E组灌胃给予TASA (15 mg/kg)。

1.3.2观察指标 每天在给予处理前观察大鼠精神状态、毛发光泽、活动状态等变化并记录体质量变化、大便性状和便血情况(邻联苯胺法FOB试纸检测)。对后3项指标进行DAI评分。DAI= (体质量下降分数+大便性状分数+便血分数)/3。HSP70检测：处死动物，腹主动脉采血，1 500 r/min离心5 min留血清，酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清HSP70水平。

2 结 果

2.1各组大便隐血评分比较 实验中期隐血评分：与A组比较，B组、C组、D组、E组差异有统计学意义(P<0.05)；实验后期隐血评分：与B组比较，A组、C组、D组、E组差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2各组DAI评分比较 实验中期DAI评分：与A组比较，B组、D组、E组差异有统计学意义(P<0.05)；与B组比较，A组、C组、D组差异有统计学意义(P<0.05)。后期DAI评分：与B组比较，A组、C组、D组、E组差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3各组HSP70水平比较 与A组比较，B组、C组、D组、E组差异有统计学意义(P<0.05)，与B比较，A组、C组、D组、E组差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表1 大鼠大便隐血评分比较分)

注：与A组比较，*P<0.05；与B组比较，△P<0.05

表2 大鼠DAI评分比较分)

注：与A组比较，*P<0.05；与B组比较，△P<0.05

表3 5组大鼠HSP70水平比较

注：与A组比较，*P<0.05；与B组比较，△P<0.05

3 讨 论

苦豆子别名苦豆根、苦甘草、布亚(维吾尔语)等，是豆科槐属植物苦豆子的干燥全草、根及种子，生长于中亚、西亚一带和我国西北省区荒漠区内较潮湿的地段。在我国主要分布于新疆、内蒙古、陕西、山西、宁夏、甘肃、西藏等地区。苦豆子始载于我国最早的药学文献《神农本草经》，现收载于《中国药典》《全国中草药汇编》《新疆中草药》《维吾尔药志》等。全株味苦性寒，具有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等作用。苦豆子主要成分为生物碱，有槐果碱、苦参碱、氧化苦 参碱、槐定碱、槐胺碱等；民间常用于菌痢、肠炎。

据笔者前期研究，TASA能显著改善TNBS和葡聚糖硫酸钠(DSS)致UC的动物模型的一般体征，抑制患鼠体质量下降，减轻结肠病理学改变，能够使免疫抑制患鼠体质量增加，胸腺指数、脾脏指数增加；初步作用机制研究说明主要通过抗炎和免疫调节等多种途径抑制结肠炎性反应[3-6]。TASA是苦豆子治疗UC的主要活性部位，已取得国家专利“TASA在制备治疗UC药物中的应用及结肠靶向制剂的制备方法”(ZL200410052029.0)，拥有自主知识产权。

HSP是一组在结构上高度保守的多肽，每种应激均可诱导产生HSP，因此HSP又称为应激蛋白[7-8]。HSP的功能:(1)HSP是高度保守的蛋白质，参与广泛的生物过程。HSP70作为分子伴侣在许多细胞过程发挥作用，包括蛋白生物活性的调节、分泌蛋白的跨膜转位等[9]。(2)提高细胞抗应激能力。(3)调节细胞凋亡。(4)HSP的抗氧化作用。(5)HSP的免疫学作用：包括参与抗原加工递呈；参与抗感染免疫(HSP能够明显减弱炎症过程中蛋白的渗出，抑制炎性反应)；参与自身免疫等。

本研究结果表明，模型组HSP70下降，治疗组HSP70升高，提示TASA可能通过提高保护性蛋白水平，维持促炎因子与抗炎因子处于平衡状态，从而调节肠道局部免疫应答和缓解炎症程度。本研究进一步丰富了TASA治疗UC的作用机制。

HSP作为生物体在非正常刺激下所产生的蛋白质，其研究已成当今生命科学的热点。HSP的功能十分广泛，在疾病中的意义重大。总之，HSP以不同的形式在免疫中有免疫效果，其在疾病中的应用前景广阔。因为生命在应对环境变化的过程中，机体产生HSP来适应生存，所以开展对HSP的研究是有意义的[8]。