蛹虫草菌丝液体培养基中碳氮源的研究试验

代勇

蛹虫草（Cordceps milharisc（L）Linr）又称北冬虫夏草，属子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。天然虫草资源十分匮乏，半人工栽培生产周期长，技术不易掌握。通过液体深层培养法可获得与天然虫草化学成分相近的菌丝体，还可获得次生代谢产物，还能大大缩短生产周期。所以，通过液体发酵培养虫草菌丝是获得虫草产品的重要手段，现将碳氮源对蛹虫草菌丝生长影响的试验报告如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 蛹虫草斜面固体菌种，辽东学院实验中心微生物实验室提供。

1.1.2 主要仪器 LDZX-F50立式电热高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，Hps-160bs-Ⅱ恒温恒湿培养箱等。

1.1.3 培养基 （1）种子平板培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。（2）液体发酵基础培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，盐酸硫胺素15mg，水1000ml， pH自然。

1.2 试验方法

1.2.1 菌种活化 将斜面固体菌种接种在种子平板培养基上，在恒温培养箱内20～22℃培养一周，菌丝长满后转色备用。

1.2.2 不同碳源对菌丝生长量的影响试验 分别以葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉等量替代基础培养基中的葡萄糖制备培养基，液体培养基分装在250ml三角瓶内，每瓶100ml，各处理五次重复，所有培养基常规灭菌。在无菌条件下，用打孔器取活化菌种接到液体培养基内，20～22℃，130r/min，震荡培养一周后将发酵液过滤，菌丝用蒸馏水冲洗干净与60℃条件下烘干后称重。

1.2.3 碳源浓度试验 选定可溶性淀粉为最佳碳源，分别以10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L浓度制备培养基。与1.2.2相同方法接种、培养、过滤、烘干、称重。

1.2.4 氮源试验 以蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏、柠檬酸氢二铵为氮源。方法与碳源相同。

2 结果分析

2.1 不同碳源对菌丝生长量的影响试验

通过表1可知，不同碳源对蛹虫草菌丝产量有较大影响。其中以可溶性淀粉培养菌丝产量最高，干重为0.2091g/100mL，蔗糖次之，麦芽糖产量最低。对结果进行方差分析后可知，各处理除麦芽糖和乳糖之间差异不显著外，其余都表现为极显著。

2.2 碳源浓度试验

在以菌丝干重为指标确定以可溶性淀粉为最佳碳源后，分别以10g/L，15g/L，20g/L，25g/L，30g/L五个同浓度培养了蛹虫草菌丝，试验结果表明，在试验浓度范围内菌丝的产量随可溶性淀粉浓度的升高而增多。到20g/L浓度时菌丝产量最高，到25g/L浓度时菌丝产量增加不明显，以后浓度菌丝生长均呈停滞趋势。

2.3 不同氮源對菌丝生长量的影响

由表3可看出，以酵母膏为氮源培养蛹虫草菌丝与其他氮源相比菌丝产量最高。各处理之间除蛋白胨和牛肉膏之间差异不显著外，其余个处理均达到了极显著。对菌丝产量的影响由大到小依次是：酵母膏﹥蛋白胨﹥牛肉膏﹥柠檬酸氢二铵。

2.4 氮源浓度试验

酵母膏浓度试验结果表明：在试验浓度范围内，菌丝产量随酵母膏浓度升高而增加，在浓度为5g/L时菌丝产量出现高峰值，其后产量稍有下降但不明显，所以将最佳浓度确定为5g/L。

试验结果表明在蛹虫草菌丝液体发酵培养培养基中，碳源以可溶性淀粉最为适宜，且适宜浓度为20g/ L；氮源以酵母膏最为适宜，适宜浓度为5g/L；本试验结果虽经本人重复验证，但也仅供读者参考之用。

（作者单位：113006抚顺市农业技术推广中心）