加米霉素对大鼠的经口急性毒性(LD50)试验

冯言言 魏秀丽 郑 莉 林 红 孟 芳 李龙飞孔 梅* 吴连勇 卜仕金

（①齐鲁动物保健品有限公司 山东 济南 250100 ②山东省兽药质量检验所 山东省畜产品质量安全监测与风险评估重点实验室 山东 济南 ③扬州大学兽医学院 江苏 扬州）

加米霉素(Gamithromycin)为半合成的大环内酯类兽用抗生素，由法国梅里亚有限公司开发，其制剂为Zactran®注射液，可用于治疗牛和猪由敏感菌引起的呼吸道疾病以及羊的蹄皮炎，临床治疗中具有吸收快、分布广、安全高效等优点[1～8]。

加米霉素的化学名为(2R, 3S, 4R, 5S, 8R, 10R, 11R,12S, 13S, 14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-Ο-甲基-α-L-核-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,8,10,12,14-六甲基-7-丙基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲氨基)- β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-7-氮杂环十五烷-15-酮，分子式为C40H76N2Ο12，分子量777.04g/mol，加米霉素为白色或类白色结晶性粉末，在二氯甲烷中极易溶解，在甲醇中易溶，在无水乙醇中溶解，在水中几乎不溶，加米霉素略有引湿性，为同一种稳定晶型[9,10]。为考察研制的加米霉素原料的急性毒性，特进行了加米霉素对大鼠经口染毒的急性毒性试验，以期为加米霉素制剂产品的开发以及临床应用提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及饲养管理 清洁级健康Wistar大鼠，体重180～220g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2012-0004，使用许可证号：SYXK(苏)2012-0004。大鼠饲养于扬州大学比较医学中心动物房内，每日饲喂苏杭公司双狮牌经60Co照射的全价鼠用配合饲料，自由采食和饮水。饮用水为符合城市饮用水标准的自来水。

1.1.2 受试物、试剂及器材 加米霉素原料药，含量为98.2%，批号为20110315S，由齐鲁动物保健品有限公司提供；实验前称取适量的加米霉素原料药用8%丁二酸溶液配制成各个浓度加米霉素溶液备用。丁二酸(含量＞99.5%，批号：20140114)，国药集团化学试剂有限公司。电子天平(感量0.1g)、无菌注射器(1ml)、灌胃器等。

1.2 方法[11,12]

1.2.1 预试验 每组设4只大鼠(雌、雄各半)进行预试验，测定0/4致死剂量(a)和4/4致死剂量(b)。预试验测得该药对大鼠的0/4致死剂量a=1000mg/kg b.w.，4/4致死剂量b=4000mg/kg b.w.。以预试验获得的4/4致死剂量(b)作为正式试验高剂量组的剂量，求得比值r=1.4，按r值等比求得其它各剂量组的剂量。

1.2.2 正式试验 （1）实验动物称重、标记编号和分组：清洁级健康Wistar大鼠50只，采用完全随机法随机分为5组，每组10只，雌雄各半，雌、雄动物分开饲养。染毒前分别对雌、雄动物进行编号标记及称重。（2）染毒剂量：根据预实验结果，1～5组大鼠经口染毒剂量分别为1000mg/kgb.w.、1414mg/kgb.w.、2000mg/kgb.w.、2828mg/kgb.w.、4000mg/kgb.w.。（3）受试药物溶液配制及染毒：染毒前按等容量配制各剂量组所需的受试物溶液，使受试物染毒体积控制在0.5～1.0ml/100g b.w.内。据此将高剂量组的药物浓度配制为40%，其余各剂量组按等容量法配制由高到低浓度依次约为28%、20%、15%和10%。各组根据每只大鼠体重，计算给予相应的受试物体积，之后分别经口染毒受试物。染毒前禁食12 h，不限制饮水。染毒后2h正常饲喂。（4）试验观察：染毒结束后持续观察30min，最初6h内每2h观察1次，之后观察2次/d。观察期内记录大鼠的一般状况，如精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮水、食欲、粪便、口鼻分泌物以及中毒症状和死亡情况等。对观察期内死亡大鼠进行大体解剖学检查，并记录相关大体病理变化。整个实验观察期为14d。观察期结束后将所有存活大鼠处死，进行眼观病理学检查。

1.2.3 数据处理 采用改良寇氏法用下式计算LD50值及其95%可信限。

LD50的95%可信限=lg-1(lg LD50±1.96×Sx50)。注：i—组距，即相邻两组剂量对数剂量之差，Xm—最大剂量对数，P—各剂量组死亡率(死亡率均用小数表示)，q—各剂量组存活率，q=1-p，∑p—各剂量组死亡率之和，n—各组动物数，Sx50—lgLD50的标准误。

2 结果

2.1 中毒及死亡情况

大鼠经口染毒后30min，无明显中毒症状，高剂量组大鼠即开始表现精神沉郁，并逐渐转入抑制，反应迟钝、麻痹，被毛粗乱无光、厌食。2.5h后高剂量组中毒症状加剧，3h后大鼠表现动作震颤，运动失调，出现惊厥。4000mg/kg组于4h后死亡3只，9h和11h后又分别死亡2只，28h内4000mg/kg组全部死亡；2828mg/kg组分别于6h死亡2只，11h死亡1只，23h死亡2只，28h死亡2只，共死亡7只，死亡时间亦稍后于4000mg/kg组；2000mg/kg组于30h有3只出现濒死症状，不久死亡；1414mg/kg剂量组死亡一只，1000mg/kg组未出现动物死亡。连续观察14d，之后未见死亡。死亡大鼠解剖可见可视黏膜苍白，胃肠管充盈膨胀，肠壁有散在出血点，肺出血严重情况不一，胃肿胀充盈，个别肝有少许淤血。大鼠经口毒性最终观察结果见附表。

2.2 急性经口LD50

观察期结束后各剂量组死亡率统计结果见附表。采用改良寇氏法计算出受试物对大鼠的急性经口LD50为2219.14mg/kg b.w.， 其 LD5095% 可 信 限 为 1918.28～2567.18mg/kg b.w.。

附表 经口急性毒性试验动物死亡率统计

3 讨论及结论

（1）EMA(欧洲药物管理局)报道[1,13]，对试验大鼠单次口服给药，致死剂量高于2000mg/kg b.w，同时加米霉素对大鼠的呼吸速率、体温、血压及心率无作用，表明加米霉素具有较低的急性毒性。（2）梅里亚动物保健品有限公司在加米霉素的MSDS(Material Safety Data Sheet，物质安全性数据)[14]中指出加米霉素对试验动物的口服LD50为5216mg/kg，皮肤LD50高于2000mg/kg，显示加米霉素属于实际无毒化合物。（3）张倩等[15]报道了加米霉素对小鼠的急性毒性，结果显示，加米霉素对小鼠的半数致死量(LD50)为1094.2mg/kg b.w.，表明加米霉素属于低毒性药物。（4）本研究中加米霉素对大鼠经口染毒的LD50为2219.14mg/kg b.w.，95%可信限为1918.28～2567.18mg/kg b.w，同EMA[1,13]报道结果一致，本研究可得出结论，加米霉素属于低毒化合物，其作为活性成分的相关制剂可用于靶动物牛、猪以及羊等的疾病治疗。