中药多糖的提取、分离纯化及其含量测定方法研究

廖爽，杨朦朦

摘 要：中药多糖的提取、分离纯化及其测定方法的有效研究，一方面能够凭借完善的制备流程，增强传统中药在药效方面的制药水准，以此完善临床医疗体系的构建；另一方面则能够凭借多糖提取的措施，巩固中药在降血脂、降血糖、抗衰老等方面的效果。本文基于中药多糖的提取方法分类深入研究，在明确分离纯化与含量测定方法的同时，期望能为后续中药医疗体系的构建提供良好参照。

关键词：中药多糖；提取；分离纯化；含量测定；方法分析

1 中药多糖的提取分析

1.1 溶剂提取法

溶剂提取法是从植物组织中提取多糖的常见方法，其中利用了多糖不容于乙醇的性质，将多糖从植物组织中沉淀出来，以达到初步纯化的目的。根据溶剂选择的不同，可分为以下几种方法：

（1）水提纯沉法

水提纯沉法是根据多糖大分子化合物的特性，选择水与醇等极性强的溶剂。期间可用热水与冷水两种浸提方法，而后再将提取液弄错，待加入乙醇后便能将多糖从提取液中沉淀出来。其中，多糖提取率与水用量、提取温度、固液比、提取时间与提取次数等具备关联性。

（2）酸提法

此种方法是在水提纯沉法的基础上，为提升多糖提取率而提供的方法。期间，酸提法应当严格控制酸度，以便在酸性较强的环境中避免多糖中糖苷键断裂，所以除弱酸外，一般强酸不适用于酸提法。另外，此种方法的提取时间宜短，且温度最好保持在50度以下。

（3）碱提法

部分多糖在碱液中具备更优异的提取率，为避免在酸性溶液中造成多糖损失，通常碱提法会防止多糖降解，并加入氮气或硼氢化钠等药品，以此控制碱性浓度，避免碱性较强发生多糖水解状况。

1.2 酶解法提取

（1）单一酶解法

单一酶解法是指使用单种酶对多糖进行提取，以确保提取率有效提升，同时排除多余元素干扰的状况。其中，经常使用的试剂有蛋白酶与纤维素酶等。

（2）复合酶解法

复合酶解法是通过一定比例的纤维素酶、蛋白酶与果胶酶混合提供的溶剂，在此种溶剂使用期间，能够使植物组织细胞的细胞壁劈裂，释放出细胞壁内活性多糖，而后再与复合酶溶液反应，确保多糖被有效提取。此种酶解法与溶剂含量、酶解温度、酶解时间、PH值等数据有直接影响。

1.3 物理强化法

（1）微波提取法

微波提取法是根据不同物质吸收微波能力差异性，促使植物萃取体系中某些组分被加入，以此从物质体系中被分离，融入萃取剂环境中，以此实现多糖提取的目的。比较溶剂与酶解法而言，微波提取法不宜造成多糖损失，且环境影响干扰较低。

（2）超声提取法

超声波是通过机械效能增加介质运动，促使生物细胞组织破碎，从而将多糖成分融入溶剂内，再利用空化效应将多糖析溶出，以此确保多糖提取有效，且生物活性能够保持不变。此种方法在提取时间方面具备效率性优势，且多糖提取率较高。

2 中药多糖的分离纯化分析

2.1 除蛋白分析

中药多糖中除蛋白的分离纯化方法中包括三氟三氯乙烷法、酶解法、三氯乙酸法与具备氯仿有机溶剂变性特点的Sevage法。其中，Sevage法除蛋白效果優良，且实验方法简单便捷，但无法有效去除多糖中的脂蛋白。期间，有实验以三氯乙酸法与Sevage法进行比照分析，可知三氯乙酸法在脱蛋白质方面的效果优于Sevage法，且多糖损失率较低。

2.2 脱色分析

脱色反应是指在重要多糖提取过程中，由于氧化反应会导致有色素生成，从而依据有色素的含量会影响多糖色谱分析与性质测定的准确性。故而，在分离纯化过程中，脱色工艺流程是非常重要的处理步骤。

2.3 多糖分解

多糖分解在现阶段实验环境中，有分级沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离法、膜分离法、电渗析法、超滤法等多种分解方法。目前在中药多糖分离纯化过程中，多采用凝胶柱层或离子交换色谱法两种形式。

3 中药多糖的含量测定方法

3.1 比色法

比色法包括咔唑一硫酸法、葸酮-硫酸法和苯酚一硫酸法测定多糖含量。目前比色法已广泛应用于多糖含量测定，特别是苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法应用最广。其原理是根据多糖在硫酸的作用下水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，再将其与苯酚或葸酮缩合成有色化合物，在适当波长下和一定浓度范围内，吸收值与糖浓度呈线性关系，从而可比色测定其含量。

3.2 滴定法

滴定法是多糖经乙醇沉淀分离后，加酸、加热水解成单糖，以次甲基兰等做指示剂，滴定经标定过的碱性酒石酸铜溶液，根据样液消耗的体积，计算其含量。本方法需在沸腾状态下滴定，温度和滴定速度对结果影响较大，且本法是一种还原滴定法，不能排除还原糖的干扰。后来陆续有人报道采用间接碘量法测定多糖的含量。间接碘量法可消除样品中还原性杂质对多糖含量测定的干扰，所测结果更接近实际多糖含量。如某实验中采用高锰酸钾滴定法测定多糖含量，还原剂为斐林试剂，滴定剂为0.02mol/L高锰酸钾，并进行方法专属性考察。结果为阴性对照试验相对标准差为4.6%，精密度试验相对标准差为3.9%，平均回收率为102.8%。得出结论本方法简单、准确，精密高、重现性好，可用于肝速康胶囊中云芝多糖的含量检测。

3.3 高效液相色谱法

国内近年来在中草药多糖含量测定方面亦使用HPLC法。如选用凝胶排斥色谱柱为分离柱及示差折光检测器，以不同分子量的右旋糖酐作标准，同时测定香菇、猪苓多糖制剂和金耳提取液多糖的分子量分布及含量，简化了操作步骤，提高了检测效率，具有分析速度快，分离效能、选择性、灵敏度高等方面的优点的。

3.4 气相色谱法

气相色谱法测定多糖可通过衍生物法增加其挥发性，一般将多糖酸水解物或甲醇醇解转化为硅烷化产物或乙酰化产物，常以甘露醇或肌醇为内标，用已知的各种单糖作标准。与其它方法比较，该法所需样品极少，较灵敏可靠。如某实验中，用气相色谱法测定了芦荟及芦荟干粉样品中的多糖。实验以木糖醇为内标物，采用0V-225，0S-138为固定液的色谱柱，使多糖水解为单糖后的衍生物得到分离。结果表明：未经水解的芦荟中含有少量的单糖，主要为葡萄糖；水解后的单糖主要为甘露糖和葡萄糖。这与用乙醇沉淀多糖后的测定结果（即芦荟及芦荟干粉中的多糖主要为甘露聚糖和葡甘露聚糖）是一致的。

3.5 高效毛细血管电泳法

高效毛细血管电泳法是近十几年来发展的一种快速、高效、简便、高分辨率及样品和溶剂消耗少，分离和分析生物活性物质的方法。本法原主要应用于蛋白质、多肽核酸等大分子物质的分析，而在糖分析中应用较少。近年来人们利用高效毛细血管电泳，通过柱前衍生或不经衍生直接或间接的紫外检测、荧光检测、电极脉冲安培检测对多糖进行分析，取得一定效果。

4 结束语

不同种类的多糖在现阶段中药临床中，不但能够作为抗肿瘤药物进行研究，同时还能抑制细胞分裂，调节细胞生长速率，为医疗体系的构建提供更加优异的药用价值，并且通过多糖类药品的制备，也可以优化传统中药研制流程，从而向更加便捷的方向发展，提升中药在临床医学中的地位。

参考文献

[1]李翠丽，王炜，张英，等.中药多糖提取、分离纯化方法的研究进展[J].中国药房，2016，27（19）：2700-2703.

[2]杨景明，姜华，王紫玮，等.防风多糖的提取分离与含量测定方法研究[J].吉林中医药，2016，36（5）：513-516.

[3]张杰.中药新药研究中多糖含量测定方法的研究[J].中国民康医学，2016，28（19）：56-56.

[4]文喜艳，邵晶，王兰霞，等.膜技术在中药多糖分离纯化中的研究进展[J].中国药房，2016，27（28）：4002-4005.