HPLC法测定蒙药妇灵丸中羟基红花黄色素A的含量

朱艳红 王明新

(1.内蒙古自治区通辽市食品药品检验所，内蒙古 通辽 028000； 2.内蒙古自治区呼伦贝尔市人民医院， 内蒙古 呼伦贝尔 021000)

本品是由地丁、黄连、姜黄、闹阳花、紫檀香、 瞿麦、 红花、白蔻、 全石榴、熊胆粉10味药组成的复方制剂。功能：祛寒、粘，主治妇女赤白带下，月经淋漓。红花为该方中主要成份之一，对本方的临床疗效有重要作用，以红花中有效成分羟基红花黄色素A为定量指标，可有效地控制产品质量[1-6]。本文采用HPLC法测定其中羟基红花黄色素A的含量，方法简单、准确、重现性好。可作为质量控制的方法。

1 仪器、试剂和药品

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-20Avp检测器。甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，磷酸为分析纯。羟基红花黄色素A(批号：111637-200905购自中国药品生物制品检定所。妇灵丸批号：20171208 20170606 20170612由呼伦贝尔市人民医院制剂室提供。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-4 (250mm×4.6mm,5μm),流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26：2：72),检测波长：403.0nm,流速为1.0mL/min，柱温：40℃，进样量10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25%甲醇制成每1mL含羟基红花黄色素A 0.1305mg·mL-1，精密量取3mL对照品贮备液，置10mL棕色量瓶中,加25%甲醇稀释至刻度。

2.2.2 供试品溶液 取妇灵丸，研细(过三号筛)，取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按照妇灵丸的制备工艺制备不含红花的阴性对照样品，并按“2.2.2”项下方法制成阴性样品溶液。

2.3 干扰试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，结果：阴性对照溶液色谱中，在与羟基红花黄色素A对照品以及供试品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现，见图1。

2.4 线性关系考察 精密吸取配制好的对照品溶液2、6、8、10、15 、20 、30μL分别进样。以峰面积A为纵坐标，以对照品进样量X(μg)为横坐标，绘制标准曲线。羟基红花黄色素A进样量在0.0783～1.1745μg范围内线性关系良好。回归方程为Y=3298191.6X-46673.2 r=0.99998

2.5 精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液10μL，重复进样6次，测得峰面积平均值为1235513, RSD为0.5%。

2.6 重复性试验 取同一批号(20171208)妇灵丸供试品6份, 按“2.2.2”项下方法操作，进行测定含量。结果羟基红花黄色素A含量的平均值(n=6)为1.08mg·g-1，RSD为0.4%。

2.7 稳定性试验 取同一批号(20171208)妇灵丸供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24h按上述色谱条件测定。测得羟基红花黄色素A峰面积的RSD(n=6)1.0%。结果表明供试品溶液室温放置24h内稳定。

2.8 回收率试验 精密称取已知含量的样品约0.8g，共6份，分别精密加入一定量的羟基红花黄色素A对照品溶液，按“2.2.2”项下方法操作，测定含量，并计算回收率，羟基红花黄色素A平均回收率(n=9)为99.3%，见表1。

表1 妇灵丸中羟基红花黄色素A的回收率

3 样品测定

取妇灵丸，按上述供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱测定，见表2。

表2 妇灵丸中羟基红花黄色素A的含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 先后考察了超声40、50、60min的提取结果，含量接近，故选用40min。该法提取效能高，干扰物质少，操作简单、快捷。

3.2 配制一定浓度的羟基红花黄色素A对照品溶液，分别在200～500nm波长内进行全扫描，羟基红花黄色素A在403.0nm处有较强的紫外吸收。实验选择403.0nm进行测定。

3.3 本文建立了一种准确可靠、专属性强、简单快捷的定量方法，通过对羟基红花黄色素A的含量测定，达到控制该制剂质量的目的。