多鳞对饲料中n-3高不饱和脂肪酸需要量的研究

何昊伦 董晓慧* 谭北平 杨奇慧 迟淑艳 刘泓宇 章 双 杨原志 张海涛

(1.广东海洋大学水产学院，水产动物营养与饲料实验室，湛江 524088；2.农业部华南水产与畜禽饲料重点实验室，湛江 524000)

高不饱和脂肪酸(highly unsaturated fatty acids，HUFAs)是指碳原子数目≥20且双键数目≥3的一类不饱和脂肪酸。根据甲基端第1个双键所连碳原子的位置，可将高不饱和脂肪酸分为n-3、n-6等系列，其中n-3HUFA主要包括二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)。n-3HUFA的生理功能主要包括：1)抑制促炎症因子产生，抑制炎症反应，减轻疾病症状；2)视网膜的重要结构成分，对视力发育有促进作用；3)作为细胞膜的重要组成成分，可影响甚至决定细胞膜的功能，同时可影响细胞膜的流动性，对细胞之间的信号传递起到重大的作用等[2-4]。在海水鱼中，EPA、DHA是类花生酸等高活性旁分泌激素类的前体[5]，参与生理功能的调控。已有的报道证明，多数淡水鱼具有合成EPA和DHA的能力，饲料中只需补充其合成原料亚麻酸即可满足其对n-3HUFA的需要[6]。对于缺乏脂肪酸延长和去饱和能力的海水鱼而言，n-3HUFA则是其必需脂肪酸[6]。饲料中添加n-3HUFA能提高海水鱼的生长性能，有利于脂类代谢平衡，加强机体免疫功能[7-10]。

1 材料与方法

1.1 试验设计与饲料配制

以鱼粉、小麦谷朊粉等为蛋白质源，鱼油和玉米油为脂肪源，调整饲料中玉米油和鱼油的含量，配制n-3HUFA水平分别为0.53%、0.80%、1.22%、1.62%、2.12%和2.56%的6组等氮等能饲料，试验饲料组成及营养水平见表1，试验饲料脂肪酸组成见表2。饲料原料粉碎后过60目筛，根据饲料配方称取各原料。饲料制作过程中，微量成分采用逐级扩大法混合均匀，再添加不同含量的鱼油和玉米油并搅拌均匀，然后添加30%～40%的水制成团状，用双螺杆挤条机制成粒径为1.5 mm的饲料，在阴凉干燥环境中风干后封口带密封，-20 ℃保存。

表1 试验饲料组成及营养水平(风干基础)

续表1项目Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)21.001.001.001.001.001.00诱食剂 Attractant0.100.100.100.100.100.10乙氧基喹啉 Ethoxy quinolone0.030.030.030.030.030.03微晶纤维素 Microcrystalline cellulose7.577.577.577.577.577.57合计 Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00营养水平 Nutrient levels水分 Moisture8.458.148.258.868.118.44粗蛋白质 CP46.4146.0947.1946.4446.9347.22粗脂肪 EE9.449.679.329.229.779.71粗灰分 Ash7.977.607.617.617.567.52总磷 TP1.211.191.161.221.241.17

1)维生素预混料为每千克饲料提供 The vitamin premix provided the following per kg of diets：VA 22 500 IU，VD36 000 IU，VE 200 mg，VK340 mg，VB130 mg，VB245 mg，VB635 mg，VB120.25 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 150 mg，烟酸 nicotinic acid 225 mg，叶酸 folic acid 12.5 g，生物素 biotin 0. 5 mg，肌醇 inositol 500 mg。2)矿物质预混料为每千克饲料提供 The mineral premix provided the following per kg of diets：Fe 60 mg，Zn 24 mg，Mn 16 mg，Cu 1.4 mg，Co 0.2 mg，Se 0.1 mg，I 0.2 mg。

表2 试验饲料脂肪酸组成(占总脂肪酸的百分比)

1.2 试验动物与饲养管理

1.3 样本采集及分析

1.3.1 样品采集

养殖试验结束禁食24 h后取样。每桶鱼用丁香酚麻醉后称重，计数，计算生长指标。每桶随机选5尾鱼量取体长、称体重、肝脏重，计算形态学指标。再取5尾鱼，吸干体表水分，编号于-20 ℃冰箱中保存，备测常规成分。另取10尾鱼心脏采血，血液置于1.5 mL离心管中于-20 ℃冰箱过夜后4 000 r/min离心10 min，取上清液置于-80 ℃备用，待测血清生化指标。剖取肝脏及肌肉，液氮冷存，然后转移至-80 ℃冰箱，备测肝脏酶活性及肝脏和肌肉脂肪酸含量。

1.3.2 常规成分分析

全鱼和饲料常规成分采用国际标准方法[12]进行分析。样品在105 ℃下烘干测定水分含量，凯氏定氮仪(KjeltecTM 8400，瑞典)测定样品中粗蛋白质含量，索氏抽提法(抽提剂为石油醚)测定样品中粗脂肪含量，550 ℃马弗炉灼烧法测定样品中粗灰分含量。

1.3.3 脂肪酸含量分析测定

根据GB/T 21514—2008进行脂肪酸含量的测定，原理为用氢氧化钠-甲醇溶液皂化，皂化物与三氟化硼-甲醇溶液反应生成脂肪酸甲酯。用毛细管气相色谱分离，色谱峰用已知组成的标准品进行鉴定，以内标法定量。

1.3.4 血清生化指标测定

使用全自动生化分析仪(日立7600-110型)测定血清中甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(T-CHOL)含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性，所需试剂盒均购自南京威特曼生物科技有限公司。

1.3.5 组织酶活性测定

肝脏中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性均使用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定，测定步骤按试剂盒说明书进行。

1.4 生长指标和形态学指标计算公式

增重率(weight gain rate, WGR, %)=[(末均重-初均重)/初均重]×100；特定生长率(specific growth rate, SGR, %/d)=[(ln末均重-ln初均重)/饲养天数]×100；饲料系数(feed conversion rate, FCR)=摄食饲料干重/(末均重-初均重)；成活率(survival rate, SR, %)=试验结束时鱼尾数/试验开始时鱼尾数；肝体比(hepatosomatic index, HSI, %)=(肝脏重量/鱼体重)×100；肥满度(condition factor, CF, g/cm3)=[末重(g)/体长3(cm)]×100。

1.5 数据统计

试验数据用平均值±标准差表示，采用SPSS 20.0对试验数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，若有显著性差异则进行Duncan氏法多重比较，P<0.05表示差异显著。

2 结 果

2.1 饲料n-3HUFA水平对多鳞生长性能和形态学指标的影响

由表3可见，WGR随着饲料n-3HUFA水平增加呈现先上升后下降趋势，2.12%组最高，显著高于0.53%组和0.80%组(P<0.05)，与其他各组差异不显著(P>0.05)。SGR随着饲料n-3HUFA水平增加呈现先上升后下降的趋势，2.12%组最高，显著高于0.53%组和2.56%组(P<0.05)，与其他各组差异不显著(P>0.05)。FCR随着n-3HUFA水平的增加呈现先下降后上升的趋势，2.12%组最低，显著低于0.53%组(P<0.05)，与其他各组差异不显著(P>0.05)。各组之间SR没有显著差异(P>0.05)。随着饲料n-3HUFA水平的增加，HSI呈现出先下降后稳定的趋势，在2.12%组达到最低值，显著低于0.53%组和0.80%组(P<0.05)，与其他各组无显著差异(P>0.05)；而CF则呈现出先上升后下降的趋势，在2.12%组达到最大值，显著高于除1.62%组外的其他各组(P<0.05)。

表3 饲料n-3HUFA水平对多鳞生长性能和形态学指标的影响

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

图1 饲料n-3HUFA水平与多鳞WGR的折线模型

2.2 饲料n-3HUFA水平对多鳞体成分的影响

由表4可见，各组之间全鱼水分、粗蛋白质、粗灰分含量无显著差异(P>0.05)。随着饲料n-3HUFA水平的增加，全鱼粗脂肪含量呈现先上升后下降的趋势，1.62%组和2.12%组之间全鱼粗脂肪含量无显著差异(P>0.05)，但显著高于其他各组(P<0.05)，其他各组之间无显著差异(P>0.05)。

2.3 饲料n-3HUFA水平对多鳞血清生化指标的影响

由表5可见，饲料HUFA水平在0.53%～1.62%之间时，血清HDL-C含量显著上升(P<0.05)，2.56%组血清HDL-C含量显著高于除2.12%组外的其他各组(P<0.05)。血清LDL-C含量则是先上升后逐渐下降，在0.80%组达到最大值并显著高于其他各组(P<0.05)。血清ALT、AST活性呈现出先下降后上升再下降的趋势，血清ALT活性在1.22%组达到最低值并显著低于其他各组(P<0.05)，血清AST活性则在0.80%组达到最低值并显著低于其他各组(P<0.05)。随着饲料n-3HUFA水平的增加，血清T-CHOL含量呈先上升后下降并稳定的趋势，血清TG含量呈先上升后下降的趋势；0.53%组的血清T-CHOL、TG含量显著低于其他各组(P<0.05)，0.80%组的血清T-CHOL、TG含量显著高于其他各组(P<0.05)。

2.4 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏酶活性的影响

由表6可见，各组之间的血清SOD和ACP活性没有显著差异(P>0.05)。2.12%组和2.56%组之间的血清AKP活性无显著差异(P>0.05)，但显著低于除1.62%组外的其他各组(P<0.05)。1.62%组的血清CAT活性最低，与1.22%组和2.12%组无显著差异(P>0.05)，但显著低于其他各组(P<0.05)。

2.5 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏、肌肉脂肪酸组成的影响

由表8可见，随着饲料n-3HUFA水平的提高，肌肉C18∶2n-6、C20∶4n-6含量呈降低趋势，2.12%组和2.56组显著低于其他各组(P<0.05)；肌肉C20∶5n-3、C22∶6n-3含量呈升高趋势，2.56%组显著高于其他各组(P<0.05)；肌肉C16∶0含量呈先升高后稳定趋势，在1.22%组达到最高。肌肉C16∶1n-9含量在1.62%组达到最高。

表4 饲料n-3HUFA水平对多鳞体成分的影响

Table 4 Effects of dietary n-3HUFA level on body composition of Sillago sihama %

表4 饲料n-3HUFA水平对多鳞体成分的影响

项目 Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56水分 Moisture53.50±2.1257.50±4.9553.33±2.3158.50±0.7158.50±0.7154.00±1.11粗蛋白质 CP69.41±1.2168.40±2.9569.96±1.4267.56±1.2467.41±0.8370.57±2.36粗脂肪 EE17.16±1.82b16.73±0.71b17.52±1.40b21.34±0.83a20.50±0.39a16.27±0.69b粗灰分 Ash20.93±1.0619.01±2.1619.75±0.7320.76±0.5620.22±1.2021.61±0.95

表5 饲料n-3HUFA水平对多鳞血清生化指标的影响

Table 5 Effects of dietary n-3HUFA level on serum biological parameters of Sillago sihama

表5 饲料n-3HUFA水平对多鳞血清生化指标的影响

项目 Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56高密度脂蛋白胆固醇HDL-C/(mmol/L)2.10±0.05e2.33±0.08d 2.59±0.05c2.76±0.06b2.80±0.02ab2.91±0.05a低密度脂蛋白胆固醇LDL-C/(mmol/L)1.76±0.08d4.25±0.13a3.35±0.18b3.30±0.06b3.24±0.08b2.87±0.06c谷丙转氨酶ALT/(U/L)61.54±0.85a47.04±1.12c34.93±0.91e41.98±0.86d49.94±0.21b47.08±1.15c谷草转氨酶AST/(U/L)228.05±3.61a148.60±3.08d187.06±0.40c191.26±0.51c204.20±1.14b188.67±2.89c总胆固醇T-CHOL/(mmol/L)4.83±0.21c7.96±0.09a6.58±0.36b6.67±0.11b6.98±0.05b6.92±0.06b甘油三酯 TG/(mmol/L)3.75±0.13e8.55±0.26a6.90±0.02c7.06±0.08bc7.30±0.13b6.28±0.05d

表6 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏酶活性的影响

Table 6 Effects of dietary n-3HUFA level on liver enzyme activities of Sillago sihama

表6 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏酶活性的影响

项目 Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56超氧化物歧化酶 SOD/(U/mg prot)2.70±0.513.08±0.382.83±0.493.13±0.052.56±0.112.40±0.18酸性磷酸酶 ACP/(金氏单位/g prot)18.82±2.3220.39±1.5222.01±4.9018.90±2.4917.81±2.8318.68±2.26碱性磷酸酶 AKP/(金氏单位/g prot)38.72±6.99ab39.87±4.62ab43.51±4.14a30.01±0.10bc21.43±3.13c23.70±4.13c过氧化氢酶 CAT/(U/mg prot)22.06±1.87b37.06±1.99a16.15±5.80bc7.01±0.84c14.76±1.45bc23.72±9.19b

3 讨 论

3.1 饲料n-3HUFA水平对多鳞生长性能和形态学指标的影响

表7 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏脂肪酸组成的影响(占总脂肪酸的百分比)

Table 7 Effects of dietary n-3HUFA level on liver fatty acid composition ofSillago sihama (percentage of total fatty acids) %

表7 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏脂肪酸组成的影响(占总脂肪酸的百分比)

脂肪酸Fatty acidsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56C14∶02.90±0.042.90±0.012.89±0.012.90±0.032.90±0.002.92±0.01C16∶023.88±0.1923.72±0.0723.78±0.1323.86±0.0923.88±0.0923.85±0.06C16∶1n-98.86±0.128.52±0.048.75±0.088.83±0.078.83±0.168.67±0.30C18∶07.32±0.13b7.31±0.04b7.44±0.08ab7.40±0.06ab7.55±0.11a7.46±0.07abC18∶1n-930.92±0.06a27.49±0.54b25.84±0.71c24.93±0.34c22.63±1.01d22.13±0.36dC18∶2n-611.65±0.07a10.71±0.06b9.93±0.06c9.18±0.09d8.20±0.06e7.49±0.11fC18∶3n-31.25±0.06f1.43±0.03e1.54±0.03d1.66±0.03c1.77±0.02b1.86±0.03aC20∶00.45±0.060.43±0.030.46±0.020.44±0.030.47±0.010.45±0.03C20∶1n-60.70±0.020.73±0.010.71±0.010.69±0.020.73±0.030.74±0.03C20∶2n-60.68±0.04a0.65±0.04ab0.61±0.01bc0.58±0.01bc0.58±0.01c0.61±0.02bcC20∶3n-60.42±0.040.44±0.030.39±0.010.43±0.020.44±0.010.42±0.02C20∶4n-60.88±0.04e1.13±0.06d1.82±0.04c2.32±0.04b2.79±0.13a2.41±0.04bC22∶00.14±0.010.14±0.010.15±0.010.13±0.010.15±0.010.14±0.01C22∶1n-90.13±0.010.14±0.010.12±0.010.12±0.010.13±0.020.13±0.01C20∶5n-31.25±0.06f1.43±0.03e1.54±0.03d1.66±0.03c1.77±0.02b1.86±0.03aC22∶6n-33.92±0.09f5.91±0.04e6.80±0.06d8.52±0.06c9.92±0.06b10.94±0.25a

表8 饲料n-3HUFA水平对多鳞肌肉脂肪酸组成的影响(%总脂肪酸)

Table 8 Effects of dietary n-3HUFA level on muscle fatty acid composition of Sillago sihama (%TFA)

表8 饲料n-3HUFA水平对多鳞肌肉脂肪酸组成的影响(%总脂肪酸)

脂肪酸Fatty acidsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.81.221.622.122.56C14∶03.41±0.023.25±0.133.32±0.103.44±0.083.48±0.093.30±0.11C16∶024.92±0.05ab24.39±0.40b25.25±0.17a24.60±0.38ab25.00±0.16ab24.75±0.23abC16∶1n-94.30±0.14ab4.01±0.18b4.22±0.11ab4.43±0.08a4.28±0.13ab4.15±0.11abC18∶011.10±0.0810.81±0.3310.98±0.1910.88±0.1311.03±0.0810.99±0.21C18∶1n-914.69±0.0414.50±0.2514.65±0.1314.39±0.1914.56±0.1614.60±0.12C18∶2n-68.85±0.07a9.00±0.14a8.20±0.14b7.25±0.21c6.60±0.14d5.10±0.28eC18∶3n-30.85±0.070.95±0.211.05±0.211.20±0.141.10±0.141.15±0.07C20∶00.54±0.020.53±0.020.54±0.010.53±0.010.56±0.020.55±0.03C20∶1n-60.57±0.010.56±0.010.56±0.010.57±0.010.57±0.010.56±0.01C20∶2n-60.36±0.010.37±0.010.35±0.010.36±0.020.37±0.020.37±0.01C20∶3n-60.46±0.020.45±0.020.45±0.010.46±0.010.47±0.010.47±0.02C20∶4n-64.42±0.07a3.76±0.16b3.13±0.06c2.43±0.06cd1.83±0.08f2.10±0.06eC22∶00.26±0.010.27±0.010.27±0.020.25±0.010.26±0.020.26±0.01C20∶5n-37.81±0.09d8.51±0.09c8.75±0.19c9.28±0.05b9.52±0.10b9.95±0.09aC22∶6n-312.52±0.04d14.14±0.94c14.35±1.08c15.86±0.26b16.93±0.08b18.42±0.07a

3.2 饲料n-3HUFA水平对多鳞体成分的影响

3.3 饲料n-3HUFA水平对多鳞血清生化指标的影响

3.4 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏酶活性的影响

3.5 饲料n-3HUFA水平对多鳞肝脏、肌肉脂肪酸含量的影响

4 结 论