解毒化瘀Ⅱ方对HBV相关急性肝衰竭患者外周血Th17、Th1表达及临床疗效的影响

石清兰 毛德文 陈月桥 吕建林

[摘要] 目的 探討解毒化瘀Ⅱ方对乙型肝炎病毒（HBV）相关急性肝衰竭患者外周血Th17、Th1表达及临床疗效的影响。 方法 选择2013年2月～2016年3月在广西中医药大学第一附属医院、广西中医药大学附属瑞康医院、田东县中医院治疗的118例HBV相关急性肝衰竭患者作为研究对象，根据随机数字表分为对照组和观察组，每组各59例。对照组患者采用西医常规治疗，观察组患者采用解毒化瘀Ⅱ方+西医常规治疗。治疗8周后，对两组患者临床疗效、生化指标及外周血Th17及Th1表达水平进行评估。 结果 观察组总有效率显著高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。治疗后，观察组患者谷草转氨酶、丙氨酸氨基转移酶和总胆红素均低于对照组，凝血酶原活动度高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。治疗后，观察组患者Th17、Th1细胞亚群比例低于对照组，观察组患者Th1/Th17值高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 解毒化瘀Ⅱ方可有效改善HBV相关急性肝衰竭患者肝功能，降低Th17及Th1表达水平，调节Th17/Th1，临床应用价值较高。

[关键词] 解毒化瘀Ⅱ方；HBV相关急性肝衰竭；辅助性T细胞17；辅助性T淋巴细胞1；临床疗效

[中图分类号] R256 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）07（c）-0122-04

Effect of Jiedu Huayu Ⅱ Decoction on the expression of Th17 and Th1 in peripheral blood of patients with HBV related acute liver failure and its clinical efficacy

SHI Qinglan MAO Dewen CHEN Yueqiao LYU Jianlin

The First Ward of Department of Hepatopathy， the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning 530023， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of Jiedu Huayu Ⅱ Decoction on the expression of Th17 and Th1 in peripheral blood of patients with HBV related acute liver failure and its clinical efficacy. Methods From February 2013 to March 2016， 118 patients with HBV related acute liver failure treated in the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine， Rukang Hospital affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine and Tiandong Hospital of Traditional Chinese Medicine were divided into control group and observation group according to random number table， with 59 cases in each group. The control group was treated with western medicine dialectical therapy， and the observation group were treated by Jiedu Huayu Ⅱ Decoction and Western medicine dialectical therapy. After 8 weeks of treatment， the clinical efficacy， biochemical indexes and the expression levels of Th17 and Th1 in peripheral blood of two groups were evaluated. Results The total effective rate of the observation group was higher than that of the control group （P < 0.05）. After treatment， the AST， ALT and TBiL of the observation group were lower than those of the control group， and PTA was higher than that of the control group， with statistically significant difference （P < 0.05）. After treatment， the proportion of Th17 and Th1 cell in the observation group was lower than that of the control group， and the Th1/Th17 value of the observation group was higher than that of the control group， with statistically significant difference （P < 0.05）. Conclusion Jiedu Huayu Ⅱ Decoction can effectively improve the liver function of patients with HBV related acute liver failure， decline the Th17 and Th1 expression， which has high clinical value.

[Key words] Jiedu Huayu Ⅱ Decoction； HBV related acute liver failure； peripheral blood； Th17； Th1； clinical curative effect

肝衰竭是临床一种由多种因素引起的严重的肝脏损伤，可导致肝脏功能发生严重障碍、失代偿的一组症候群。该病具有病情进展速度快，病死率高等特点[1-2]。乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染是临床造成肝衰竭的重要原因，临床对各种因素引起的肝衰竭尚无有效的治疗药物或成熟的治疗方案[3-4]。近年来，中西医结合治疗肝衰竭在临床应用逐渐增多，取得了一定成效，但目前尚无研究分析该治疗方案的作用机制[5]。Th17是近年来新发现的一种CD4+T细胞亚群，研究表明该细胞亚群在乙型病毒性肝炎的发生、发展中发挥重要作用。Th1细胞也是一种CD4阳性细胞亚群，其能分泌白细胞介素2、γ干扰素、肿瘤坏死因子-β等，参与调节细胞免疫，辅助细胞毒性T细胞分化，介导细胞免疫应答，参与迟发型超敏反应等生理或病理过程。在此背景下，为推动该治疗方案在临床应用，提高临床对该病的治疗效果，本研究旨在探讨解毒化瘀Ⅱ方治疗对HBV相关急性肝衰竭患者外周血Th17及Th1表达的影响，为其在临床推广提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年2月～2016年3月在广西中医药大学第一附属医院、广西中医药大学附属瑞康医院、田东县中医院治疗的HBV相关急性肝衰竭患者118例作为研究对象，根据随机数字表分为对照组和观察组，每组59例。对照组中，男47例，女12例；年龄21～67岁，平均（47.2±7.2）岁；29例早期，19例中期，11例为晚期。观察组中，男49例，女10例，年龄20～65岁，平均（48.1±8.1）岁；31例早期，18例中期，10例为晚期。两组患者在年龄、性别比例、疾病分期等基线资料方面比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究方案报经医院医学伦理委员会批准同意。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①入组患者均为HBV感染患者；②入组患者均符合2005年美国肝病学会发布的对急性肝衰竭处理的建议中相关规定[6]。排除标准：①合并心、脑、肝、肾、造血系统、免疫系统等严重的原发性疾病患者；②合并甲、丙、戊、丁型肝炎者；③妊娠期女性，哺乳期女性；④原发性肝癌患者；⑤精神病患者。

1.3 治疗方法

对照组患者采用西医常规治疗，具体措施包括注射甘草酸制剂、促肝细胞生长素、前列地尔及核苷类药物抗病毒治疗；同时采用血浆及人血白蛋白支持疗法、人工肝血浆置换治疗；合并感染者可给予抗生素治疗；治疗过程中注意纠正患者水、电解质和酸碱平衡。观察组患者采用中西医结合治疗，在对照组西医常规治疗措施的基础上采用解毒化瘀Ⅱ方加减进行治疗，解毒化瘀Ⅱ方药物组成：茵陈30～50 g，赤芍50 g，白花蛇舌草30 g，大黄15 g（后下），郁金15 g，石菖蒲15 g。均由江苏省江阴市天江药业有限公司提供免煎中药。用法：冲温开水200 mL，分2次口服，每日1付。2组疗程均为8周。

1.4 观察指标

（1）中医证候积分疗效参照《中药新药临床研究指导原则》[7]：①临床治愈，症状、体征消失或基本消失，证候积分减少≥95%；②显效，症状、体征明显改善，证候积分减少≥70%；③有效，症状、体征均有好转，证候积分减少≥30%；④无效，症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少<30%。总有效率=（临床治愈例数+显效例数+有效例数）/例数×100%。中医证候积分评分见表1。（2）临床综合疗效评估[8]：症状基本消失，肝功能正常或略有异常，总胆红素（TBiL）≤34 μmol/L则为临床治愈；症状显著减轻，肝功能显著好转，TBiL降低50%以上，或凝血酶原活动度（PTA）升高50%以上，持续2周无明显波动则为显效；症状有所改善，肝功能有所好转，TBiL下降25%以上，或PTA升高25%以上，持續2周无明显波动则为有效；症状无改善，TBiL或PTA水平无恢复甚至加重，或患者病情继续恶化甚至死亡，以及部分自动出院患者均为无效。总有效率=（临床治愈例数+显效例数+有效例数）/例数×100%。（3）生化指标检测，收集血清，采用全自动生化仪检测肝功能谷草转氨酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、TBiL；血栓止血分析仪检测PTA。（4）Th17及Th1表达情况检测：分别在治疗前后采集两组患者静脉抗凝血，采用佛波酯联合离子霉素进行刺激，再加入莫能霉素培养，收集培养细胞后，向其中加入抗体和破膜液，洗涤细胞。之后使用Beckman流式细胞仪分析，最后用Cellquest软件进行分析，严格根据试剂盒（生产厂家：上海哈灵生物科技有限公司，型号：201602）操作说明书进行。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 中医症候积分及疗效比较

组内比较，治疗后两组患者中医症候积分均较治疗前降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。组间比较，治疗前两组患者中医症候积分差异无统计学意义（P > 0.05）；治疗后，观察组患者中医症候积分高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。观察组中医症候积分疗效优于对照组（P < 0.05）。

2.2 两组患者临床综合疗效比较

观察组患者临床疗效优于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。

2.3 治疗前后两组患者生化指标比较

组内比较，治疗后两组患者AST、ALT和TBiL含量均较治疗前降低，PTA均显著升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。组间比较，治疗前两组患者AST、ALT、TBiL、PTA差异无统计学意义（P > 0.05）；治疗后，观察组患者AST、ALT和TBiL均低于对照组，PTA高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表4。

2.4 治疗前后两组患者Th17和Th1表达情况

组内比较，治疗后两组患者Th17、Th1细胞亚群比例均显著降低，Th1/Th17值显著升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。组间比较，治疗前两组患者Th17、Th1细胞亚群比例以及Th1/Th17值差异均无统计学意义（P > 0.05）；治疗后，观察组患者Th17、Th1细胞亚群比例低于对照组，观察组患者Th1/Th17值高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表5。

3 讨论

肝衰竭是由多种损伤因素引起的严重肝功能损害，具有发病急、病死率高等特点，在我国主要由肝炎病毒感染所引起。据统计，我国现约有1.2亿病毒携带者，3000万例慢性乙型肝炎患者，每年有1%～3%的肝炎患者将发生或进展为肝衰竭，因此国内肝衰竭的防治工作仍非常艰巨[9]。我国每年死于肝炎及其并发症的患者达数十万人，直接和间接经济损失超过1000亿元人民币。因此该病已成为严重影响我国人民身心健康和国民经济、社会发展和稳定的重大疾病之一。临床对该病的常规治疗措施虽然取得了一定的成效，但仍然不能有效解决该问题，近年来将中医药应用于临床对该病的研究越来越多，取得了显著成效，但对其作用机制尚不明确。有研究表明肝损伤部位Th17聚集增多，且聚集程度与炎症程度呈正相关[10]。此外，Th1能够增强CD8+T细胞活性，清除细胞内病毒[11]。为此，本研究旨在探讨解毒化瘀Ⅱ方对HBV相关急性肝衰竭患者外周血Th17、Th1表达及临床疗效的影响，为临床更有效的治疗HBV相关急性肝衰竭提供参考。

本研究结果表明组内比较，治疗后两组患者中医症候积分均较治疗前降低，观察组患者中医症候积分高于对照组。观察组总有效率显著高于对照组，治疗后，观察组患者AST、ALT和TBiL均低于对照组。上述结果说明中西医结合治疗较单独采用西医常规治疗能够更有效地改善HBV相关急性肝衰竭患者的临床症状。根据生化指标结果分析也可以看出解毒化瘀Ⅱ方能够更有效地改善患者肝功能。其原因可能是观察组患者针对HBV相关的急性肝衰竭湿热毒淤虚的病机进行辨证施治，采用凉血解毒化瘀法进行治疗，方中赤芍、茵陈清热利湿，利胆退黄。现代药理研究表明赤芍具有较好的抗氧化、抗纤维化作用，在瘀胆型肝炎、重型肝炎中普遍应用，效果确切[12]。茵陈具有抗脂质过氧化，稳定肝细胞膜，促进肝细胞再生及改善肝脏微循环，增强肝脏解毒功能，与栀子互佐促进胆汁排泄[13]，同时，茵陈醇提物对FFA引起的肝脂毒性具有显著的治疗作用[14]。白花蛇舌草具有显著的抗炎抗菌、抗氧化及抗肿瘤作用[15]。与西医常规治疗配合使用，标本兼治，有效提高临床效果。此外，动物实验研究表明，解毒化瘀Ⅱ方能显著改善肝衰竭大鼠肝脏的合成、分泌、解毒功能，减少肝脏坏死面积，保护肝细胞线粒体，抑制肝细胞凋亡，提高存活率。其拮抗肝衰竭的作用机制在于抑制肝线粒体发生线粒体膜通透性转换（MPT）[16-18]。

HBV抗原诱导，细胞坏死产生的大量细胞因子，刺激Th17，进而使得其他免疫、非免疫细胞分泌大量前炎性因子、趋化因子，增强免疫反应，进一步造成肝组织损伤，加重病情[19]。此外该细胞分泌的白介素-17可提高抗凋亡分子表达水平，使病毒感染细胞生存时间延长，使病情迁延不愈。Th1细胞可分泌干扰素-γ，杀伤HBV，因此Th1细胞亚群的比例在一定程度反映了细胞免疫、炎性反应的强度[20]。本研究结果提示治疗后，观察组患者Th17、Th1细胞亚群比例显著低于对照组，观察组患者Th1/Th17值显著高于对照组说明解毒化瘀Ⅱ方能够抑制机体炎性反应，从而减少对肝细胞的损伤，进而改善病情。

综合上述分析，本研究可以得出结论，解毒化瘀Ⅱ方可有效改善HBV相关急性肝衰竭患者肝功能，降低Th17及Th1表達水平，调节Th17/Th1，临床应用价值较高。

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（收稿日期：2018-04-22 本文编辑：李岳泽）