高效液相色谱-ELSD法检测泡菜中三氯蔗糖的含量

王丽兰

(国家泡菜质量检验中心(四川)，四川 眉山 620010)

三氯蔗糖是一种甜度可达蔗糖600倍的新型甜味剂，具有甜度高、甜味纯正、无热值、耐高温和安全性高等优点，被广泛应用于食品加工中[1-3]。但美国一项新的研究表明三氯蔗糖会消灭肠道内的有益菌，可能导致胰岛素和血糖水平发生变化，所以，过量食用三氯蔗糖可能对身体产生危害[4]。我国国家标准GB 2760-2014中也明确规定了三氯蔗糖的食用范围和限量[5]。因此，在食品质量监管中，监测三氯蔗糖的含量是十分重要的。

泡菜产品常用的甜味剂主要是安赛蜜和糖精钠等，随着三氯蔗糖的广泛使用，近2年，有些泡菜企业用三氯蔗糖替代了安赛蜜等甜味剂。现行三氯蔗糖检测标准GB 22255-2014中样品前处理过程较为复杂[6]。为满足泡菜企业三氯蔗糖的批量检测需求，本实验结合泡菜产品特点和三氯蔗糖性质，采用乙醇超声提取，直接浓缩处理样品，省去固相萃取步骤，大大简化了样品前处理过程，降低了检验成本，缩短了检验时间，建立了一种简易、快速、低成本的三氯蔗糖检测方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent 1260 高效液相色谱仪：配置蒸发光散射检测器，美国安捷伦公司；电子分析天平；漩涡混合器；超声波清洗仪；恒温水浴锅。

1.2 试剂

乙腈：色谱纯；无水乙醇：分析纯；三氯蔗糖标准品(98%)。

三氯蔗糖标准溶液的配制：准确称取三氯蔗糖标准品0.0100 g，用高纯水溶解并定容至10 mL, 配制成浓度为1.0 mg/mL 的三氯蔗糖标准液，再分别移取一定体积的该标准溶液，用水稀释成0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6 mg/mL的标准工作液系列。

2 分析方法

2.1 色谱条件

C18色谱柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，梯度洗脱(见表1)，流速1.0 mL/min, 进样量20 μL，柱温35 ℃，雾化压力3.5 Bar，增益8，蒸发温度40 ℃。在该色谱条件下得到三氯蔗糖标准溶液的液相色谱图，见图1。

表1 梯度洗脱条件

图1 三氯蔗糖标准色谱图

2.2 样品前处理

称取粉碎后的泡菜样品5.0 g于50 mL离心管中，加入30 mL无水乙醇，漩涡提取2 min后超声提取20 min，摇匀，以3000 r/min离心10 min。滤纸过滤提取溶液，取滤液15 mL于25 mL烧杯中，置于60 ℃水浴锅中挥发至干，残渣用1.0 mL水复溶，混匀后过0.45 μm滤膜，滤液上机分析。

3 结果与讨论

3.1 浓缩方法的选择

现行标准GB 22255-2014中采用固相萃取法进行样品提取液的净化和浓缩。本实验对比了固相萃取法净化浓缩和直接浓缩的实验效果。结果表明，固相萃取法对泡菜产品的净化效果并不明显，两法差异不大，故选择直接挥发浓缩提取液，既简易又节约成本。

3.2 提取液的选择

三氯蔗糖极易溶于水、乙醇和甲醇，实验中分别采用水、70%乙醇、乙醇、甲醇作为提取液提取样品，结果表明提取效果未见明显差异。但水溶液不易挥发，会增加后面的浓缩处理时间和难度，而甲醇成本相对较高且有毒性，所以采用低毒性、沸点低、易于挥发浓缩的乙醇作为提取试剂。

3.3 标准工作曲线

根据蒸发光散射检测器的原理，制作峰面积和三氯蔗糖进样量的幂函数工作曲线，见图2。

图2 三氯蔗糖标准曲线

由图2可知，相关系数为0.9998，测量范围为0.05～0.6 mg/mL。

3.4 加标回收率和精密度

在样品中按低、中、高3个水平添加三氯蔗糖标准溶液，平行测定6次，计算加标回收率和相对标准偏差(RSD)，测定结果见表2。

表2 加标回收率和精密度(n=6)

由表2可知，平均加标回收率范围为88.3%～92.1%，3个添加水平的RSD都小于5%，均能满足定量分析要求。空白样品和加标样品的液相色谱图见图3。

图3 空白样品和加标样品的液相色谱图

注：a为泡菜样品的色谱图；b为泡菜加标样品的色谱图。

4 结语

本实验研究了一种简易、高效和低成本的三氯蔗糖样品前处理方法。泡菜样品经乙醇超声提取，直接挥发浓缩，蒸发光散射检测器检测。实验结果表明，该法检测结果具有较高的准确度和良好的稳定性，可为泡菜中三氯蔗糖的检测提供参考。