COX-2和c-Fos在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

陈 娟 毕明宏 高振远 王雅萍

(蚌埠医学院第一附属医院肿瘤内科,安徽 蚌埠 233000)

非小细胞肺癌(NSCLC)是严重影响人类健康的恶性肿瘤之一[1]，其发病率与死亡率逐年上升，在发达国家和我国大中城市已居恶性肿瘤首位[2]。近20多年来，其5年生存率只有不足15%[3]。肺癌的分子生物学的研究是国内外医学研究者不断努力的方向[4]。环氧化酶2(COX-2)作为合成前列腺素过程中的关键酶，在多种肿瘤的发生发展中扮演着重要角色[5]；c-Fos是核转录因子AP-1家族的主要成员，参与形成异源二聚体，调控细胞周期的进程，促进细胞增殖。研究[6]表明，多种转录因子共同调节COX-2水平的表达。本实验选取我院肿瘤内科收治的非小细胞肺癌患者38例，研究COX-2和c-Fos在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 组织标本

选取我院肿瘤内科自2016年3月—2017年9月收治的非小细胞肺癌患者38例，所有患者均由病理学和影像学检查确诊，符合非小细胞肺癌诊断标准。其中男26例，女12例，平均年龄(58±2.6)岁；吸烟状况：吸烟者22例，非吸烟者16例；肿瘤大小：≤3 cm 14例，>3 cm 24例；临床分期(按照AJCC 2010年第7版NSCLC分期标准)：Ⅰ、Ⅱ期11例，Ⅲ、Ⅳ期27例；淋巴转移：是23例，非15例。

1.2 试剂

北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司提供兔抗人COX-2多抗(AF-0010，工作浓度1∶200)；兔抗人c-Fos抗体(ml006334，工作浓度1∶250)及相应试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。

1.3 免疫组织化学染色

将38例肺癌组织和30例癌旁组织新鲜标本用10%多聚甲醛固定，石蜡包埋，4 μm左右厚连续切片，之后脱蜡(二甲苯)，水化(梯度乙醇)，抗原热修复(微波炉中高火5 min、中低火15 min)，消除内源性过氧化酶活性(3%双氧水、80%甲醇室温30 min)。一抗4℃孵育过夜，PBS漂洗，PV9000室温孵育，DAB显色，苏木素复染，1%盐酸、75%乙醇分化，1%氨水返蓝，过梯度乙醇脱水，封片，然后在载玻片固定读片。PBS代替一抗为阴性对照，整个过程按照说明书操作步骤严格实施。

1.4 疗效评定标准

所有制作标本切片由两位专门病理医生分别读取。COX-2胞浆内染色呈棕黄色，c-Fos细胞核染色呈棕黄色。根据芯片上阳性细胞的百分数评分：阳性细胞数≤5%，0分；6%～25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；76%～100%，4分；0分为阴性，1～3分为弱阳性，4分为强阳性。

1.5 统计学处理

采用SPSS15.0软件进行统计学处理，计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关性分析，P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 COX-2、c-Fos在非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达比较

COX-2和c-Fos在非小细胞肺癌组织中的表达阳性率均明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 COX-2、c-Fos在非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达比较

2.2 COX-2、c-Fos的表达与非小细胞肺癌临床因素的关系

COX-2的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关，分化程度(高分化阳性表达率为15.38%，中分化为40.00%，低分化为66.67%)之间存在差异，在有淋巴结转移的组织中表达高于无淋巴结转移的组织，均具有统计学意义(P<0.05)；COX-2的表达与年龄、性别、吸烟状况、肿瘤大小、临床分期无相关性(P>0.05)，差异不具有统计学意义。c-Fos表达与淋巴结转移有关，在有淋巴结转移的组织中表达高于无淋巴结转移的组织，差异具有统计学意义(P<0.05)；c-Fos表达与年龄、性别、吸烟状况、肿瘤大小、临床分期、分化程度无相关性(P>0.05)，差异不具有统计学意义。见表2。

2.3 COX-2和c-Fos之间表达的相关性

COX-2和c-Fos在非小细胞肺癌组织中的表达差异有统计学意义(χ2=15.35,P=0.004)，Spearman相关性分析显示COX-2和c-Fos的表达存在正相关(r=0.590，P<0.01)。见表3。

3 讨 论

COX是一种前列腺素合成的重要限速酶，分为两种亚型：COX-1和COX-2[7]。其中COX-2是诱导酶的一种，将花生四烯酸诱导成前列腺素环内过氧化物，然后经过细胞的一系列代谢，最终生成不同的前列腺产物，在生理代谢和病理过程中起到重要作用[8]。临床研究证实COX-2的表达与肿瘤发生、发展密切相关。刘江等[9]研究发现，COX-2阳性表达与非小细胞肺癌淋巴结转移及肺腺癌预后密切相关，张焕等[10]研究发现，COX-2的表达与非小细胞肺癌的直径呈正相关(P<0.05)，因为COX-2可能在诱导生成前列腺素产物中，产生诱导新生血管生长的物质，中间提供了血供和氧气，最终促进肿瘤的快速生长。

c-Fos是核内癌基因重要蛋白分子，参与肿瘤的发生发展[11]。c-Fos和c-jun相互作用，形成AP-1，调节机体内基因的转录过程。作用机制为通过间接调节靶基因、血管内皮生长因子D等的生长，进而调节肿瘤细胞的增殖，导致侵袭性生长最终血管出现。Bakiri L等[12]研究表明，c-Fos参与非小细胞肺癌的形成，并且没有通过STAT5途径，而是其他途径发挥其抑制细胞分化、促进细胞增殖以及促进细胞转化。另外c-fos参与了细胞内信息传导和能量代谢，在机体活动中扮演重要角色。

表2 COX-2和c-Fos的表达与非小细胞肺癌临床因素的关系

表3 COX-2和c-Fos之间表达的相关性

本研究结果显示，在非小细胞肺癌中，COX-2和c-Fos的表达阳性率均明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义；COX-2的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关，与年龄、性别、吸烟状况、肿瘤大小、临床分期无相关性；c-Fos表达与淋巴结转移有关，与年龄、性别、吸烟状况、肿瘤大小、临床分期、分化程度无相关性。COX-2和c-Fos在非小细胞肺癌组织中的表达差异有统计学意义，Spearman相关性分析显示存在正相关(r=0.590，P<0.01)。Mascaux等[13]研究表明，分化程度较高的肺鳞癌组织中，其COX-2的表达显著高于正常组织和轻中度不典型增生，与本研究结果一致。

综上所述，在非小细胞肺癌组织中COX-2的表达与c-Fos的表达存在明显相关；COX-2和c-Fos在非小细胞肺癌临床、预后评估中可能会起到重要作用。