血清p—ANCA与sRAGE在溃疡性结肠炎中的表达及联合检测的诊断意义

刘增福 李庆芝 葛红梅 付景 吴卫东

[摘要] 目的 檢测溃疡性结肠炎患者血清核周型抗中性粒细胞抗体（p-ANCA）、可溶性晚期糖基化终末产物受体（sRAGE）的表达情况，探讨p-ANCA和sRAGE作为溃汤性结肠炎患者辅助诊断指标的价值。 方法 方便收集该院2014年5月—2015年5月间就诊的68例溃疡性结肠炎患者（溃疡性结肠炎组）、42例非溃疡性结肠炎引起腹泻的患者（疾病对照组）、30名健康体检人群（对照组）；用间接免疫荧光法（IIF）检测各组患者血清p-ANCA的表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组患者血清中sRAGE表达。 结果 溃疡性结肠炎组、疾病对照组和对照组的p-ANCA的阳性率分别为64.7%（44/68），7.1%（3/42）和0.0%（0/30），各组之间差异有统计学意义（χ2=17.52、21.71，P<0.01）；溃疡性结肠炎组患者的sRAGE阳性率为51.5%（35/68）高于肠道疾病对照组16.7%（7/42）和对照组13.3%（4/30） （χ2=4.71、4.03，P<0.05）；且p-ANCA与sRAGE表达呈正相关（r=0.784，P<0.01；r=0.822，P<0.01）；两者联合检测，溃疡性结肠炎组的阳性率为64.8%。结论 p-ANCA和sRAGE可作为溃疡性结肠炎诊断时的辅助指标，具有一定的诊断意义，联合检测p-ANCA和sRAGE可以提高诊断的阳性率。

[关键词] 溃疡性结肠炎；p-ANCA；sRAGE；IIF；ELISA

[中图分类号] R574 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）06（b）-0011-04

Expression of Serum p-ANCA and sRAGE in Ulcerative Colitis and Diagnostic Significance of Combined Test

LIU Zeng-fu1， LI Qing-zhi1， GE Hong-mei2， FU Jing1， WU Wei-dong1

1.Digestive System Department， Heze Municipal Hospital， Heze， Shandong Province， 274031 China；2.Department of Neurosurgery， Heze Municipal Hospital， Heze， Shandong Province， 274031 China

[Abstract] Objective To test the expressions of p-ANCA and sRAGE of patients with ulcerative colitis and study the value of p-ANCA and sRAGE as the adjunctive diagnostic indexes. Methods 68 cases of patients with ulcerative colitis diagnosed in our hospital from Mary 2014 to Mary 2015 （ulcerative colitis group）， 42 cases of patients with diarrhea due to non- ulcerative colitis （disease control group） and 30 cases of healthy physical examination group （control group） were convenient collected， and the expressions of serum p-ANCA in each group was tested by IIF， and the serum sRAGE expression in each group was tested by the ELISA. Results The p-ANCA positive rates in the ulcerative colitis group， disease control group and control group were respectively 64.7%（44/68）， 7.1%（3/42）， 0.0%（0/30）， and the difference was statistically significant （χ2=17.52，21.71，P<0.01）， and the sRAGE positive rate of patients in the ulcerative colitis group was higher than that in the disease control group and in the control group[51.5%（35/68） vs 16.7%（7/42）， 13.3%（4/30）]（χ2=4.71， 4.03，P<0.05）， and the p-ANCA and sRAGE expression had a positive correlation （r=0.784， P<0.01； r=0.822， P<0.01）， and the positive rate of ulcerative colitis group was 64.8%. Conclusion The p-ANCA and sRAGE can be used as the adjunctive indexes in diagnosis of ulcerative colitis， with a certain diagnostic significance， and the combined test of p-ANCA and sRAGE can improve the diagnosis positive rate.

[Key words] Ulcerative colitis； p-ANCA； sRAGE； IIF； ELISA

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种病因尚不清楚的以腹泻、腹痛、黏液脓血便为临床表现的大肠慢性非特异性炎症性疾病；病变主要在大肠黏膜和黏膜下层，一般不超过粘膜下层。因其症状缺乏特异性，确诊 UC 通常靠内镜检查及病理活检[1-3]。但相当部分的 UC 疑似病例仍然不能通过内镜检查确诊[4]。缺乏有效的实验室指标是目前临床上诊断UC的短板，所以寻找特异性高、诊断准确度好的血清标记物鉴别溃疡性结肠炎成为人们研究的焦点。该研究方便选择2014年5月—2015年5月收治的68例溃疡性结肠炎患者，探讨p-ANCA和sRAGE作为溃汤性结肠炎患者辅助诊断指标的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

依据2007年 5月第七次全国消化病学术会议推荐的相关诊断标准[5]，方便收集在该科就诊的68例溃疡性结肠炎患者（溃疡性结肠炎组），男39例，女29例；年龄18～72岁，平均年龄（43.7± 15.4）岁。所有入选病例均接受全结肠镜和病理组织学检查。相同时期42例非溃疡性结肠炎的急性自限性肠炎引起腹泻的患者（疾病对照组），男25例，女17例，年龄24～60 岁，平均（35.8±12.6）岁。并选择同期30名健康体检者为对照组；男17名，女13名，年龄20～65岁平均年龄（34.1±9.4）岁。所有患者及其家属均知晓并同意该次研究，该研究经该院伦理委员会批准。

1.2 方法

①清晨空腹采集3 mL肘静脉血，离心后保存待检。②采用间接免疫荧光薄片法测定p-ANCA。将血清点阵于反应平板，于20～25°条件下孵育30 min。然后使用磷酸盐-吐温缓冲液进行清洗及浸泡。将荧光标记抗体点阵于第二个反应平板，于20～25°条件下孵育30 min。然后使用磷酸盐-吐温缓冲液进行清洗及浸泡，最后封片并于显微镜进行仔细观察。阳性：核周型（pANCA）：为围绕中性粒细胞核的带状、平滑荧光。阴性：中性粒细胞较暗，基本无荧光。采用德国欧蒙公司sRAGE-IgA、sRAGE-IgG酶联免疫吸附法检测试剂盒检测sRAGE表达，sRAGE-IgA和（或）sRAGE-IgG阳性为sRAGE阳性。

1.3 统计方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理。各组间抗体阳性率比较采用χ2检验，相关性分析采用Pearson检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组p-ANCA 阳性表达率分析研究

溃疡性结肠炎组p-ANCA 阳性率为64.7%（44/68），明显高于疾病对照组的 7.1%（3/42）和对照组0.0%（0/30），差异有统计学意义（χ2=17.52、21.71，P<0.01），见表1。

2.2 sRAGE 的阳性表达率

溃疡性结肠炎组患者的 sRAGE 阳性率为51.5%（35/68）高于疾病对照组16.7%（7/42）和对照组 13.3%（4/30） ，差异有统计学意义（χ2=4.71、4.03，P<0.05），见表1。

2.3 联合检测

p-ANCA 和 sRAGE p-ANCA 和 sRAGE 同时阳性的有 17例，以任一指标阳性作为观察指标，溃疡性结肠炎组的阳性率为64.8%。

溃疡性结肠炎组sRAGE表达水平与CRP、TNF-0表达具有正相关性（r=0.784，P<0.01；r=0.822，P<0.01）。

3 讨论

UC是消化内科常见疾病之一，是炎症性肠病中最常见类型，但直到目前其病因尚不十分清楚，病变在大肠，为肠道粘膜及粘膜下层慢性且反复发作的非特异性炎症。由于该疾病早期临床症状不具有典型性，且尚无较为成熟完善的检测手段，所以大多数患者在就诊时往往已经发展至中晚期，从而使患者错过了最佳的治疗时机。该类疾病具有病程长，病情迁延难愈以及复发率高等特点，临床主要表现为腹泻、腹痛等，严重威胁了患者的身体健康，积极寻找安全有效的诊断、治疗措施具有重要的作用。如今其诊断尚缺乏特异性，主要通过临床表现、病理学等方式进行诊断，且往往在排除急性自限性结肠炎、阿米巴痢疾、慢性血吸虫病、肠结核、缺血性肠炎、放射性肠炎、克隆恩病、大肠癌等各种其他原因引起的肠道病变作出的。当结肠镜检查无法确诊或患者存在结肠镜检查禁忌证时，特异的血清学抗体标志物检测有助于它们的鉴别。所以若可早期及时诊断该疾病，则会有效降低患者死亡率，延长其生存时间。UC的发病机制错综复杂，是多种因素综合所致的结果，如何从研究血清因子的发展去诊断、治疗疾病，是目前我们需要深入探索的。目前，越来越多的研究证明p-ANCA和sRAGE在UC中的表达水平与预后质量、病情程度呈相关性。如今，虽然联合检测两种指标为临床诊断工作提供了极大的便利，保障了患者的生命健康，其科学性、合理性也受到众人的关注。该研究收集了UC患者的临床资料，旨在观察上述指标在UC中的临床价值，以期患者的身体健康。

近几年，血清标志物逐渐应用于临床中，它们在一种或多种疾病中呈阳性表达，已经成为筛查疾病必不可少的检测项目。p-ANCA是UC特异性血清抗体之一，可用于鉴别UC与CD。文献报道在 UC患者血清中p-ANCA阳性率为43.4%～70.0%，在鉴别CD与UC时，p-ANCA诊断UC的敏感性稍低（50%～67%），特异性较高（75%～94%）[5]。該研究显示溃疡性结肠炎组患者的 p-ANCA 的阳性率为64.7%（44/68），较对照组的0.0%（0/30）明显升高（P<0.01），结果与国内外报道基本一致。ANCA主要经嗜天青颗粒、溶菌酶而发挥作用。国外研究报道UC 患者ANCA阳性率大约为70%，这与国内相关研究报道基本一致[6-7]，该研究溃疡性结肠炎 组p-ANCA阳性率为64.7%，这可能是由于荧光检测模型影响所致。有文献报道，血清 p-ANCA 水平与溃疡性结肠炎病情程度呈现相关性，若为p-ANCA 阳性者，则其出现肠黏膜血管炎的几率高于阴性患者，另外存在血管炎的 UC 患者，其病灶处炎症情况明显较重，表明UC 相关P-ANCA对血管炎的发生、发展起到了一定的促进作用。人可溶性晚期糖基化终末产物受体（sRAGE）属于RAGE内源分泌型[8]，其属于多配体受体，主要是由RAGE mRNA剪接形成的异形体，由于其未包括跨膜段，因此在循环系统中水平较高，另外它在上皮及神经等组织中也有表达。如今， sRAGE已经成为诊断免疫失调相关疾病的重要炎症因子之一[9]。目前越来越多地研究发现溃疡性结肠炎是免疫失调所致的炎症病变[10]，全世界对于sRAGE在UC中的表达情况报道不多。近年来，有研究发现sRAGE与细胞增殖及炎症反应等方面具有重要的关系，另外它还可有效评估肠道受损程度[11-12]。国外Yilmaz等[4]研究发现溃疡性结肠炎组血清中sRAGE含量明显高于疾病对照组及对照组。国内李为慧等研究发现UC患者sRAGE含量明显升高，阳性率55.6%；且活动期sRAGE含量要高于缓解期，并与CRP存在正相关性。该研究发现，溃疡性结肠炎组血清中sRAGE含量亦明显高于疾病对照组及对照组，这与国外研究相似。如今，其已成为诊断炎症病变的特异性指标之一，上述数据提示，sRAGE因溃疡性结肠炎的出现而呈阳性表达。

除了采用阳性率进行评价外，该研究认为评价上述两种血清因子的标准还可包括以下几点：①敏感性：早期诊断疾病的作用；②特异度：排除误诊的效果；③诊断准确性：判断疾病的能力；④病程相关性：与疾病分期、进展等方面的关系；⑤预后相关性：术后通过其水平观察预后质量。随着检验医学的逐渐发展，部分研究发现它们在患者体内的变化情況与病情发展、预后质量都具有较高的相关性，具有极为重要的临床指导意义。p-ANCA和sRAGE对于评估患者病情程度意义重大，然而在临床中其往往易发生假阳性情况，所以该研究认为应注意以下几点：①检验科应积极主动与医护人员沟通，共同建立、规范标本采集过程以及手册；②检验人员保持高度的责任感，仔细做好标本、仪器保养等工作，一旦出现异常，则应迅速与医师交流，以免错过最佳的治疗时间。目前，病理检查是诊断疾病的“金标准”，但其存在有创性，因此患者依从性较差，因此如血清学检查等无创性方法已经成为新型的诊断趋势，所以血清因子检测逐渐走进人们的视野。值得注意的是，p-ANCA和sRAGE也可能存在于其它疾病中，所以该研究认为：在联合多种血清学指标进行诊断的同时，还应与影像学检查等多个指标实施综合讨论，从而改善诊断准确率。近年来，血清学指标的发现也为治疗敞开了另外一扇大门，虽然目前导致UC的机制尚未清晰，但血清因子在疾病进展过程中扮演的角色为治疗UC提供了可能。扎实的理论基础，正确的操作方法以及合理的检测指标，那么血清因子检测必将被所有人所认可。总之，在UC中p-ANCA、sRAGE检测阳性率显著上升，它们可作为溃疡性结肠炎诊断时的辅助指标，具有一定的诊断意义，联合检测p-ANCA和sRAGE可以提高诊断的阳性率。

[参考文献]

[1] Armando Rojas，Ileana González，Erik Morales，et al. Diabet es and cancer：Looking at the multiligand/RAGE axis[J].World J Diabetes，2011，2（7）：108-113.

[2] Varun Parkash Singh，Anjana Bali，Nirmal Singh，et al. Advanced glycation end products and diabetic complicat ions[J].Korean J Physiol Pharmacol，2014，18：1-14.

[3] Vernier G，Sendid B，Poulain D，et a1.Relevance of serologic studies in inflammatory bowel disease[J].Curr Gastroenterol Rep，2004，6：482-487.

[4] Yilmaz Y，Yonal 0，Eren F，et a1.Serum levels of soluble receptor for advanced glycation endproducts（sRAGE）are higher in ulcerative colitis and correlate with disease activity[J].J Crohns Colitis，2011，5（5）：402-406.

[5] 欧阳钦，胡品津，钱家鸣，等.2007年我国炎症性肠病诊断