复方肺心安片中黄芪甲苷的含量

洪艳苹

摘 要：本文采用高校液相测定了复方肺心安片中黄芪苷的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1，柱温：30℃。黄芪苷在20～350微克/毫升范围内呈良好的线性关系。黄芪苷的平均回收率为99.3%，RSD为0.93%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于复方肺心安片中黄芪苷的含量测定。

关键词：复方肺心安片；黄芪苷；含量

复方肺心安片主要用于治疗慢性肺心病。黄芪为复方肺心安片主要成分之一。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。清朝绣宫内称其为“补气诸药之最”，意思是说经常用黄芪煎汤或用黄芪泡水代茶饮，具有良好的防病保健作用。黄芪属补气良药，常用于虚脱、休克等急症，效果较好。《日华子本草》记载：“助气壮筋骨，长肉补血。”黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、苦味素、黄芪皂苷、甜菜碱、胆碱、叶酸及硒、硅、锌、钴、铜、钼等多种微量元素。黄芪有增强机体免疫功能、保肝、、调节血压、抗病毒性心肌炎、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。本文采用高校液相测定了复方肺心安片中黄芪苷的含量。

1 仪器与试药

JHT2800高效液相色谱仪（深圳市天友利标准光源有限公司）；SB25-12DTS双频超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；蒸发光散射检测器（上海通微分析技术有限公司）；全自动内校分析天平（常州市幸运电子设备有限公司）；恒温油槽（南京恒星实验设备有限公司）；DBT-IV-20高端型超纯水机（杜伯特（北京）科技有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。黄芪苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海展云化工有限公司）、乙醇（上海展云化工有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、甲醇（安徽胜达化工科技有限公司）、冰醋酸（安徽胜达化工科技有限公司）、磷酸氢二钠（安徽胜达化工科技有限公司）、三乙胺（安徽胜達化工科技有限公司）、正丁醇（安徽胜达化工科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，ELSD检测器漂移管温度90℃，气体流速：3.0L·min-1。理论板数按黄芪苷峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取复方肺心安片，研细，精密称取，加60毫升50%乙醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，蒸干滤液，残渣用30毫升纯化水溶解，用水饱和过的正丁醇萃取三次，每次30毫升，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用50%乙醇溶液溶解转移至25毫升容量瓶内并分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取黄芪苷对照品约10毫克，用流动相溶解并稀释成每1ml中含100微克的溶液，作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

依照处方取除黄芪以外的药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芪苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（微克）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，黄芪苷对照品在20～350微克/毫升范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取黄芪苷对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.55%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

称取同一批的复方肺心安片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.89%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品黄芪苷峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明黄芪苷至少在4小时内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的黄芪苷对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.93%。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定复方肺心安片三批样品中黄芪苷的含量，含量为2.35毫克/克、2.16毫克/克、2.22毫克/克。

3 讨论

分别考察甲醇-乙腈-水（20∶20∶60），甲醇：水=55∶45，各加1%冰醋酸，甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），乙腈-水，梯度洗脱（0～30min，乙腈20.5%，30～70min，乙腈20.5%→38%），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氢钠∶甲醇（体积比为15∶85），不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（20∶20∶60）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于复方肺心安片中黄芪苷的含量测定。复方肺心安片中黄芪苷的含量应为不少于2毫克/克。

参考文献

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