太子参须对仔猪免疫系统调理作用的研究

2018-10-23吴建华杨荣平张炎达潘惠青福建贝迪药业有限公司福建宁德352000

福建畜牧兽医 2018年5期

吴建华杨荣平张炎达潘惠青赵齐福建贝迪药业有限公司福建宁德 352000

太子参具有补益脾肺，益气生津的功效，可提高机体的免疫力。太子参须是太子参的尾根和侧须，现代药理研究证明两者之间化学成分相同，差异之处在于其成分的含量不同。仔猪群免疫抑制在养殖生产过程中较为普遍，常由于各种不良因素作用机体，使得免疫组织器官受损或免疫细胞活性受到影响，以至干扰免疫细胞对抗原的递呈，抑制或阻断抗体的形成，导致猪群机体免疫应答不完全，容易被病原感染而发病。引起猪群免疫抑制的各种不良因素之间相互联系，互为因果，从而使各种疾病的病因变得非常复杂。提升猪群整体免疫力水平，才能从根本上减少畜禽疾病的发生，提高养殖生产的经济效益。以太子参须为原料制成的中兽药制剂，取材方便，且效果突出。在畜牧业的应用上有着广阔的空间。本试验通过肌注大剂量环磷酰胺破坏仔猪的免疫系统，造成仔猪免疫抑制，再通过给予太子参须散，观察太子参须散对仔猪免疫系统的影响，为太子参须的应用提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 试验动物 25～30日龄、体重4.0～5.9 kg的健康仔猪40头，公母各半。

1.2 试验药物和主要试剂太子参须散，主要成分为太子参须，由福建贝迪药业有限公司提供，包装规格为200 g/袋，剂型散剂；每克太子参须散含太子参须1 g。对照药物芪黄素：由爱迪森（北京）生物科技有限公司生产，包装规格：100 g/袋，规格：每克含黄芪多糖不得少于450 mg。环磷酰胺（cy，江苏盛边医药有限公司）、猪瘟抗体ELISA试剂盒（北京爱得士元亨生物科技有限公司）、猪瘟疫苗（江苏南农高科技股份有限公司）。

1.3 主要仪器 Centrifuge 5340R型高速冷冻离心机（eppendorf），PYX-DHS-60C×25-BS 型隔水式电热恒温恒湿培养箱（上海跃进医疗器械厂），SW-CJCF型超净工作台（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），LDZF-75KB-II立式压力蒸汽灭菌器（CSHENAN），SUBAqua12plus 型水浴锅（Grant），synergicgyMx 型酶标仪（Gene Company Limited），BC-6900型血细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）。

1.4 试验设计将40头断乳仔猪随机分为空白组、模型组、黄芪多糖组、太子参须散组，每组10头；除空白组外，其余几组均用环磷酰胺造免疫抑制模型，注射环磷酰胺（cy）5 d后计算白细胞数，对比模型组的白细胞数与空白组差异是否显著，环磷酰胺注射剂量参考相关文献[1-2]。造模成功后，模型组正常饲喂，太子参须散组按0.5 g/kg体重剂量灌喂给药，黄芪多糖组按照每千克饲料拌料给药200 mg黄芪多糖，每天2次，连用7 d。注射猪瘟疫苗，每头猪1头份。试验期间观察仔猪的临床表现，试验前、免疫后第14 d、28 d给仔猪称重，前腔静脉采血，记录每组仔猪采食量，计算日采食量、日增重和料重比；采血前禁食12 h，用血细胞分析仪器检测白细胞数（Lc），采用 ELISA法测定猪瘟抗体水平，严格按照猪瘟病毒抗体检测试剂盒说明书操作。抗体水平以阻断率来表示：阻断率（%）=100* （ODN450-ODTEST450）/ODN450，式中：ODTEST450为被检样本的平均值；ODN450为阴性对照的平均值。计算其生长性能、红细胞数、白细胞数、猪瘟抗体水平，评价太子参须散对仔猪免疫功能的影响。

1.5 仔猪免疫抑制标准参照文献[3-7]将仔猪免疫抑制标准定为：（1）仔猪白细胞数低于正常值，与空白组相比显著降低；（2）体重降低，与空白组相比显著降低；（3）精神状态不良，采食量减少。

1.6 数据分析试验数据采用SPSS20.0软件中单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较，结果用±s表示，P＜0.05 为差异显著，P＜0.01 为差异极显著。

2 结果

2.1 试验仔猪的临床表现注射环磷酰胺（cy）5 d后，除阴性对照外，其余试验组仔猪均出现精神状态不良，眼无神，运动量少，被毛杂乱，聚堆畏冷，部分仔猪出现腹泻，会阴部脏乱，有粪便粘着，身体表面亦有粪便，采食量降低。给药3 d后，药物组猪部分开始好转，仔猪被毛开始变干净，采食量逐渐增多，运动量增多。给药7 d后，仔猪被毛虽有粪便粘着，但为风干粪便，仔猪精神状态变好，采食量增加，粪便略有稀便。

2.2 太子参须散对免疫抑制仔猪生长性能的影响试验前，各试验猪体重无显著性差异（P＞0.05）；造模后，空白组仔猪体重升高明显；与空白组相比，太子参须散组、黄芪多糖组显著降低（P＜0.05），模型组与空白组相比，差异不显著（P＞0.05）；免疫 14 d 后，太子参须组与空白组相比，差异不显著（P＞0.05），各药物组与模型组相比，差异显著（P＜0.05）；免疫28 d，太子参须组、黄芪多糖组与空白组相比，差异不显著（P＞0.05），各药物组与模型组相比差异显著（P＜0.05）。见表 1。

表1 太子参须散对免疫抑制仔猪体重的影响

2.3 太子参须散对免疫抑制仔猪白细胞的影响试验仔猪注射环磷酰胺（cy）5 d后，模型建立成功，与空白组相比，药物组和模型组白细胞数极显著降低（P＜0.01）；免疫 14 d，与模型组相比，药物组白细胞数极显著（P＜0.01）升高；免疫 28 d，各试验组间无显著性差异（P＞0.05）。见表 2。

表2 各组不同时期白细胞数变化

2.4 太子参须散对猪瘟疫苗免疫仔猪血清猪瘟抗体水平的影响试验前，各试验组之间猪瘟抗体无显著性差异（P＞0.05）；免疫 14 d、28 d 后，与模型组相比，空白组和各药物组猪瘟抗体水平极显著升高（P＜0.01）。见表 3。

表3 太子参须散对猪瘟疫苗免疫仔猪血清猪瘟抗体水平的影响

3 分析与讨论

1）太子参须散是由中药太子参的须根组成，太子参具有补益脾肺，益气生津之效果，多用于脾气虚证。中兽医认为气是重要的免疫物质，如《内经》上讲“正气内存，邪不相干”，而脾为后天之本，现代免疫学研究表明脾是机体最大的免疫器官，因此，太子参须可提高机体免疫功能。中药制剂能够改善仔猪的生长性能、提高末重、日增重、日采食量，同时能够降低料重比，可在一定程度上降低仔猪的腹泻程度[8]。张世昌等报道[9]，在饲料中添加复方中药制剂能显著降低料重比，有提高末重和平均日增重的趋势。本研究表明：太子参须散可提高免疫抑制仔猪的日增重、日采食量及降低料重比，且效果明显。

2）白细胞指标可反映机体细胞免疫状态，机体处于健康情况下，其免疫细胞在正常范围内较高，说明机体的免疫能力较强，因此，白细胞数量的增加或减少可辅助判断机体免疫状态[10]。白细胞具有渗出、趋化性和吞噬作用，是动物非特异性免疫的重要组成部分和抵御异物入侵的主要防线，是反映机体免疫及抗炎功能的主要标志[11]。本研究结果表明：太子参须散可以提高免疫抑制仔猪血液白细胞数，使其恢复到正常状态，在免疫14 d时作用明显，表明太子参须散可以在较短时间内提高白细胞数，恢复其免疫功能。

3）抗体是指机体免疫系统在抗原的剌激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化形成的浆细胞产生的，具有与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白，是介导体液免疫效应的重要分子。据研究表明[12-14]，某些中草药及有效活性成分可直接作用于B淋巴细胞，使之增殖分化，并可诱导B淋巴细胞对辅助性T细胞的敏感性，从而增强机体对抗原的免疫应答，提高抗体水平。本研究采用对仔猪接种猪瘟疫苗，模拟生产实际中猪瘟疫苗的免疫情况，试验结果表明：太子参须散可提高免疫抑制仔猪猪瘟抗体水平，与阴性对照组无显著性差异，在免疫后28 d，可以延长抗体持续时间。