清热解毒冲洗液质量标准研究*

焦正花，李文萍，赵凤菊，禚 君

1甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050；2甘肃省肿瘤医院

清热解毒冲洗液是裴正学教授的临床协定处方，在临床应用20多年，具有疗效好、毒副作用小，可明显减轻宫颈癌放疗后阴道炎症，减轻阴道黏连及闭锁，并具有放化疗增敏减毒等优势，具有良好的应用前景。本协定处方主要由蛇床子、威灵仙、当归、苦参、红花、蒲公英、败酱草、生大黄、赤芍、桃仁等药物组成，为了在扩大临床应用的同时，保证临床效果，笔者对清热解毒冲洗液进行了质量标准研究，为下一步申报医院制剂提供科学的依据，现报道如下：

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，Agilent多波长紫外检测器；天津HS6150型超声波清洗器，METTLER AE240电子天平。甲醇(色谱纯)，水为超纯水，试剂均为分析纯，硅胶-G(青岛海洋化工厂)，大黄酸、大黄素、大黄酚对照品(均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为 0773-9809、0756-9908、796-9302)，中药阴道冲洗剂(甘肃省肿瘤医院提供，批号为20150706、20150316、20160425、20160310)。

2 薄层鉴别［1-3］

2.1 当归 取清热解毒冲洗液30mL，用乙醚20mL振摇提取2次，合并乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇l mL使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.2 g，加乙醚3 mL，浸泡1小时，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液10 μL、对照药材溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。

2.2 苦参 取清热解毒冲洗液30 mL，用三氯甲烷20 mL振摇提取2次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参对照药材0.5 g，加0.1 mol/L盐酸溶液30 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯 - 丙酮 - 甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂，展开，展距8 cm，取出，晾干，再以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

2.3 大黄 取清热解毒冲洗液30mL，用乙醚20mL振摇提取2次，合分取乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇l mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5 g，加乙醚3 mL，超声15分钟，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯- 甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。置氨蒸汽熏后，斑点变为红色。见图3—4。

2.4 赤芍 取清热解毒冲洗液30 mL，蒸干，残渣加甲醇10 mL，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取赤芍对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷- 乙酸乙酯 - 甲醇(8∶1∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图5。

图1 当归TLC色谱图

图2 苦参TLC色谱图

图3 大黄TLC色谱图

图4 大黄TLC色谱图(氨蒸汽重后)

3 含量测定［2-3］

3.1 系统适用性实验 色谱柱：XDB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇 -0.1%磷酸溶液(75∶25)；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：室温；检测波长：254 nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3 000。

3.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄酸对照品2.8 mg、大黄素对照品8.95 mg、大黄酚对照品1.75 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液；分别精密量取大黄酸、大黄素、大黄酚各5 mL，置同一25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。(每mL中含大黄酸11.2 μg、大黄素 35.8 μg、大黄酚 7.0 μg)。

3.3 供试品溶液的制备 精密量取供试品10 mL，置分液漏斗中，用乙醚提取3次，每次约30 mL，合并乙醚液，蒸干乙醚，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL容量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3.4 阴性对照溶液的制备 按样品处方比例制备不含大黄药材的样品，依照样品含量测定项下方法制成阴性对照溶液。吸取以上3种溶液各10μL按上述色谱条件进行测定，结果阴性样品无干扰。见图6。

图5 赤芍TLC色谱图

图6 清热解毒冲洗液中大黄酸、大黄素、大黄酚含量测定

3.5 线性关系考察 精密吸取含大黄酸(11.2μg/mL)、大黄素(35.8 μg/mL)、大黄酚(7.0 μg/mL)的混合对照品溶液 5.0、10、15、20、50 μL，按上述色谱条件依次进样测定，以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，分别得到回归方程。大黄酸：Y=6 377.9X-6.04，r=0.999 8；大黄素：Y=3 830.1X+2.08，r=0.999 7；大黄酚：Y=155 64X+7.64，r=0.999 0。结果表明，大黄酸进样量在 0.056～0.56 μg、大黄素进样量在 0.179～1.79 μg、大黄酚进样量在 0.035～0.35 μg 范围内具有良好线性关系。

3.6 精密度实验 取对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样5次，计算峰面积，结果大黄酸RSD=0.83%，大黄素 RSD=0.65%，大黄酚 RSD=0.56%。表明精密度良好。

3.7 稳定性实验 取配制的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 小时进样，测定峰面积，大黄酸、大黄素、大黄酚峰面积RSD分别为0.95%、1.05%、0.86%。表明供试品溶液在12小时内稳定性较好。

3.8 重复性实验 取同一批号(20150706)样品，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积，计算结果RSD大黄酸为1.02%、大黄素为0.89%、大黄酚1.20%。表明重复性较好。

3.9 加样回收率实验 取已知含量(批号20150706)的本品5份，分别定量加入大黄酸、大黄素、大黄酚对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备，并按上述色谱条件测定峰面积，计算回收率。见表1。3.10 样品含量测定 取5批清热解毒冲洗液，分别按“3.3”项下方法制备，吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量。见表2。

表1 加样回收率实验结果(n＝5)

表2 清热解毒冲洗液中大黄酸、大黄素、大黄酚含量测定结果(n＝4) μg/mL

4 讨论

宫颈癌患者接受放射治疗后可出现一系列近期放疗反应和远期并发症。放射性阴道炎作为宫颈癌放疗后的常见并发症之一，严重影响患者的生活质量。多数患者在放疗后复查时，可因阴道炎引起的种种不适，成为除放射性膀胱炎及直肠炎并发症外的主要主诉。放射线杀灭癌细胞的同时，可对阴道壁产生放射性腐蚀，导致放射性阴道炎，表现为阴道肿胀、干涩、疼痛、流液，并发腰、腹疼痛，妇科检查见阴道黏膜变薄、糜烂、溃疡、粘连、狭窄，甚至闭锁。这些反应常出现在放疗过程中或治疗后。

苦参，别名为苦骨、牛参等，始载于《神农本草经》，列为中品。明代李时珍在《本草纲目 》曰：“苦以味名，参以功名。”性寒味苦，归心、肝、胃、大肠和膀胱经。具有清热燥湿，杀虫止痒，利尿的功能。主治赤白带下，阴肿阴痒，常与蛇床子配伍。研究表明苦参主要活性物质是生物碱类和黄酮类，具有抗病原微生物、抗炎、抗过敏、抗肿瘤、利尿、抗心律失常、调节免疫和神经等多种药理作用。两药合用共奏清热燥湿、杀虫止痒的功效［4-5］。

《神农本草经》载赤芍：“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，寒热疝瘕，止痛，利小便”，其性味苦、微寒，归肝经，具有清热凉血、散瘀止痛之功能，主要用于治疗温毒发斑、目赤肿痛、肝郁胁痛、经闭痛经、腹痛、跌扑损伤、痈肿疮疡等症。当归、红花、赤芍、桃仁合用共奏祛瘀活血止痛之功效［6-7］。

《神农本草经》认为当归：“主咳逆上气，温疟寒热，洗在皮肤中。妇人漏下绝子，诸恶疮疡，金疮。”其性温，味甘、辛，归肝、心、脾经，具补血活血、调经止痛、润肠通便之功效，主治血虚、血瘀之月经不调、经闭、痛经，为“妇科补血活血，调经止痛之要药”。近代药理研究显示［8］，当归具有抗氧化、镇痛、抗肿瘤、保护脏器器官等作用。

红花味辛，性温，归心、肝经。《本草汇言》载：“红花，破血、行血、和血、调血之药也。”红花是传统的活血化瘀，祛瘀止痛的中药，用于治疗痛经闭经、血脉闭塞、跌打损伤等诸证。

桃仁味苦、甘、平，归心、肝、大肠经。《珍珠囊》载：“治血结、血秘、血燥，润肠通便，破蓄血”，具活血祛瘀、润肠通便、止咳平喘之功效，主治瘀血阻滞诸证。

生大黄是内服外用皆宜的良药，味甘、苦、寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血、养阴生津的作用，用治热入营血，温毒发斑，阴虚内热，骨蒸劳热，津伤口渴，内热消渴，肠燥便秘。

蒲公英味苦、甘，性寒，归肝、胃经。《本草备要》载：“专治痈肿、疔毒，亦为通淋妙品。”具清热解毒，消肿散结，利尿通淋的功能，主治疔疮肿毒、乳痈、瘰疬、目赤、咽痛、肺痈、肠痈、湿热黄疸、热淋涩痛。

败酱草、生大黄、蒲公英合用共奏清热解毒、消炎止痛之效。诸药合用具有清热解毒、祛风利湿、杀虫止痒、消炎止痛、活血祛瘀之功，对因湿、热、毒邪引起的阴道炎有显著疗效。

本研究结果表明，本法操作简便，分离度好，专属性强，重复性良好，可以作为清热解毒冲洗液的质量控制。