浊点萃取法提取穿心莲内酯的工艺研究

周敏　邹毅　廖禹东

摘 要：目的：浊点萃取法在提取穿心莲内酯的工艺及影响因素，分析其应用优势。方法：浊点萃取法提取穿心莲内酯，并测定其含量，再对比分析其影响萃取率的主要因素。结果：明确了浊点萃取技术应用中表面活性剂的选择，Genapol X-080浓度、盐浓度、平衡温度及平衡时间等都是影响萃取率的主要因素。结论：浊点萃取是最新出现的一种“液-液萃取技术”，与传统萃取技术相比更具實效性。

关键词：穿心莲内酯;浊点萃取;工艺;高效液相色谱

穿心莲全草均药，具有清热解毒、消炎、消肿、止痛等功效，其穿心莲内脂对类激素和类蛋白转换酶具有良好的抑制性，极有可能成为高效抗艾滋病的天然药物。尤其是鱼腥草中药制剂被国家禁止使用的情况下，穿心莲类制剂市场大大拓宽，需求极为旺盛，对穿心莲提取工艺提出了更高的要求。

1 浊点萃取法

1 1 仪器与试药

gilent 1100高效液相色谱仪（美国）;AS5150A超声仪;色谱柱（日本岛津）;电子天平（德国赛多利斯公司）;HH-1型恒温水浴锅（江苏省金坛环宇科学仪器厂）;KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有效公司）;穿心莲内酯标准品及脱水穿心莲内酯标准品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇、乙腈为色谱纯（美国西格玛公司）。试剂均为分析纯。穿心莲药材购于樟树药材市场，由我校舒德明教授鉴定为穿心莲。

1.2 浊点萃取

穿心莲粉碎后经250筛备用。取穿心莲粉0.2g，置于25mL的离心管中，并加入20mL 0.15g/mL的Genapol X-080水溶液，经超声提取30min，以3500r/min离心10min，取溶液上部清液，加入适量的NaCl溶液，放置于60℃恒温水浴30min直至溶液显著分层，再次以3500r/min离心10min，去除下层水相，在上层黏稠活性剂中加入2mL甲醇稀释，并以0.45滤膜过滤，获得检测液相。

1.3 对照混合溶液制备

取穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯各2mg，分别置于10mL的容量瓶中，并加入适量的甲醇溶液稀释至同一刻度，摇匀后放置4℃冷藏环境中。

1.4 色谱条件

采用250×4.6mm、5 的安捷伦C18色谱柱，以甲醇-水作为流动相，比例为54：46;色谱柱温度为25℃;检测波长为232;流动相流速为1mL/min。

1.5 结果与讨论

1.5.1 表面活性剂的选择

在浊点萃取技术应用中，常用的表面活性剂为Trition X-114 PONPE-7.5等，但由于这类表面活性剂中均含有苯环，存在紫外检测吸收的问题。选用Genapol X-080能够有效避免该问题。同时，该表面活性剂可在42℃时出现浊点，能有效降低分层条件。

1.5.2 影响萃取率的因素

1.5.2.1 Genapol X-080浓度

加入20mLGenapol X-080作为萃取剂，将其置于60℃恒温水浴锅30min时，Genapol X-080浓度对萃取穿心莲的影响，如下表所示。

实验表明，当Genapol X-080浓度为0.15g/mL，萃取的穿心莲内酯含量达到最高，随着Genapol X-080浓度的升高，萃取的穿心莲内酯含量基本持平。当Genapol X-080浓度较高时分层后的表面活性剂相过于黏稠，严重影响操作。因此，Genapol X-080以0.15g/mL为宜。

1.5.2.2 盐浓度

在使用浊点萃取法提取穿心莲内酯时，惰性盐在其中起到了缩短萃取时间，降低萃取物在水中溶解度的作用。因此，在进行影响萃取率的实验设计时，除了要考虑Genapol X-080浓度，还应考虑盐浓度对萃取率的影响，实验考察了20 mL0.15 g/mL的Genapol X -080水溶液，置60℃恒温水浴中30min时，不同NaCl浓度对萃取率的影响。结果表明，当NaCI浓度达到1.2 mol/L时，萃取率最高。

1.5.2.3 平衡温度

在浊点萃取实验中，当平衡温度高于表面活性剂的浊点温度15℃～20℃，溶液才会分为两相。GenapolX-080的浊点温度为42度，加入20mL 0.15 g/mL的Cenapol X -080水溶液，置恒温水浴中30min，NaCl浓度达到1.2 mol/L时，平衡温度在55℃～65℃之间萃取率最高，所以选择60℃为平衡温度。

1.5.2.4 平衡时间

当固定平衡温度为60℃时，盐浓度为1.2mol/L，根据平衡时间的不同，分别测定穿心莲内酯在不同时间的萃取率，结果表明，当平衡时间在30～40min时，穿心莲内酯萃取率达到最高，因此，平衡时间应优先选择在30min。

1.5.3 精密度试验结果

按最优条件制备同一批样品的供试品溶液，连续进样5次，每次进样18μL，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的峰面积。计算穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积的RSD （n = 6） 分别为2.09%和2.51%。

1.5.4 加样回收率实验结果

取已知含量 （其中穿心莲内酯13.81 mg/g，脱水穿心莲内酯5.33 mg/g） 的穿心莲粉末4份，每份0.2 g，加入穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，按浊点萃取方法操作，制得4份供试品溶液，每次进样18μL，测定峰面积，并根据公式：

计算穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的加样回收率。结果见下表。

2 乙醇直接提取法

2.1 仪器与试药

SHB-III型旋转蒸发仪（巩义市豫华仪器有限公司）、LC-2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津）、DHG-9145A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）。乙醇为工业级95%，国产分析纯、色谱纯试剂作为试剂。其余同浊点萃取。

2.2 方法

称取穿心莲粉末10g，纤维素酶50mg，加入纯化水50mL，用破酸调整至pH4，40℃恒温浸泡1h，减压过滤后取滤渣，加100mL85%乙醇溶波浸泡30min，30℃下F超声（100W）提取30min，减压过滤，滤渣用30mL85%乙醇溶液洗涤3次，洗液并入滤液中，60C减压浓缩至干，得浸膏。按以上方法进行三次实验，得到三批浸膏。

2.3色谱条件

Diamonsil C18色谱柱（5μm，150mmx46mm）;流动相为甲醇：水（52：48）;流速1.0mL/min;柱温30℃;检测波长225nm;进样量5μL。

2.4穿心莲内酯回收率

计算方法同1.5.4项。得出三次实验穿心莲内酯回收率分别为82.5%、86.9%、81.7%，平均值为83.7%。

3 结果与讨论

通过考察浊点萃取穿心莲内酯法与醇提法，得出浊点萃取技术较传统萃取技术更具实效性、安全性，回收率更高，极大的缩短了萃取时间，降低了萃取成本，为药品生产带来极大便利，同时也降低了人们的用药负担。

参考文献：

[1]卢锦花，胡小玲，岳红等.吸附树脂提取分离银杏叶提取物中银杏内酯ABC和白果内脂的研究[J].中草药，2004，35（12）：1359-1360.

[2]范云歌，张秀丽，史作清等.大孔吸附树脂提取穿心莲总内脂的研究[J].离子交换与吸附，2002，18（1）：30-35.