竹筒酒中总黄酮、总酸、总糖含量的测定

赵媛 陈洪国 陈涛

摘要：采用可见光光度法测定竹筒酒中总黄酮的含量，对样品进行波长扫描，确定512nm为最大吸收波长，稳定性试验表明，反应液在30min内吸光度较稳定。所测竹筒酒中总黄酮的含量为16.63mg/L，总糖含量为11.003g/L，总酸含量为0.303g/L， 检测结果证实该白酒复合高度酒的一级标准，符合低度酒的优级标准。

关键词：竹筒酒; 总黄酮; 总酸; 总糖

湖北咸宁是闻名的楠竹之乡，楠竹中含有黄酮类化合物、多糖类，氨基酸类，矿质元素，茶多酚等多种营养成分，其中黄酮类，多糖类和有机酸类是主要的多功能成分[1]。竹筒酒通过特殊的方式将高粱酒浆注入楠竹活竹笋内，自然生长，制作机理图如图1所示。

白酒通过吸取天然竹汁、竹叶多糖、竹叶黄酮、竹叶抗氧化物、硒、锌、铁、钙、镁、多种维生素和氨基酸等活性成份，是一种比普通白酒更香、更纯、更环保的原生态健康饮用酒。竹筒酒富含大量的黄酮类化合物，具有很高药用价值。有抗癌，抗微生物，抗病毒，抑制脂肪酶，保护心脑血管等功效。竹筒酒吸取了竹叶中多糖类物质，有效改善了普通蒸馏白酒的口感和品质，深受消费者欢迎。酒中酸含量决定其风格和品质，因此，测定竹筒酒中总酸含量有助于控制其质量，保障饮用者健康。黄酮含量测定方法主要有可见分光光度法、荧光分光光度法、高效液相色谱法等[23]。本文采用亚硝酸钠硝酸铝可见分光光度法检测竹筒酒中总黄酮含量。采用指示剂法测定竹筒酒中总酸的含量 [45]。

1 实验部分

1.1 竹筒酒中总黄酮的测定

（1）芦丁标准液的配制。

精密称取120℃下干燥至恒重的芦丁标准品100mg，加入42%的乙醇溶液溶解，并定容至1000ml得0.1mg/ml的芦丁标准溶液。

（2）标准曲线的绘制。

精确的量取0.1mg/ml的芦丁标准溶液0ml，0.5ml，1ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3ml置于10ml容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液300微升，摇匀，静置6分钟后加入10%的硝酸铝溶液300微升，摇匀，静置6分钟后加入4%的氢氧化钠4.0ml，再用42%的乙醇溶液定容至刻度，静置30min，于分光光度计上，在510nm波长处测定其吸光度，空白不加人芦丁对照品。以510nm处吸光度为纵坐标，以配制标准样品的质量浓度（mg/ml）为横坐标，绘制相应的标准曲线，如图1所示：

1.2 竹筒酒中总糖的测定

（1）葡萄糖溶液的标定VNaOH。

斐林试剂参照相关文献配制[6]，预备滴定：准确吸取斐林溶液甲、乙液各5ml于锥形瓶中，加入20ml蒸馏水，摇匀，电炉加热至沸，在沸腾的状态下用葡萄糖标准溶液进行滴定，当溶液的蓝色消失呈红色时，加入2滴次甲基蓝指示剂，继续滴定至蓝色消失，记录消耗葡萄糖标准溶液的体积，滴定五次，取数值接近的三次数据计算。正式滴定：加入比预备实验少1ml的葡萄糖标液，加热至沸，并保持2min，加2滴次甲基蓝指示剂，在沸腾状态下于1min内用葡萄糖标准液滴定至终点，记录消耗葡萄糖标液的总体积（V），平行滴定五次，取接近的三次数据计算，结果取平均值。

浓度计算F=M/1000×V（F—斐林试剂甲、乙液各5ml相当于葡萄糖的克数，g; M—称取葡萄糖的质量，g;V—正式滴定消耗的葡萄糖标准溶液的总体积，ml）

（2）样品的制备及测定。

准确吸取100ml的竹筒酒加热浓缩至30ml左右，将其转移至100ml容量瓶中，加入6M的盐酸溶液5ml。用1%的甲基红的乙醇液为指示剂，滴加200g/L的氢氧化钠溶液至中性，冷却至室温， 定容至100ml。

样品总糖测定同标定葡萄糖溶液类似，以样品溶液代替葡萄糖标液进行滴定即可。

1.3 竹筒酒中总酸的测定

（1）样品的制备及测定。

竹筒酒中总酸的测定采用指示剂法，按照国标法进行测定。准确移取5.00ml酒样于150ml的锥形瓶中，加入20ml的蒸馏水，用滴管滴加2滴酚酞指示剂，用一定浓度的氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，记录标准碱用量，计算酒样中总酸的含量。

（2）氢氧化钠浓度的确定。

分别使用1.0，0.1，0.01，0.005及0.001 mol/L的氢氧化钠对未知酒样进行滴定，实验结果表明氢氧化钠浓度为0.005 mol/L最佳。

2 实验结果与分析

2.1 竹筒酒中总黄酮的测定

（1）稳定性和精密度测试结果。

测定竹筒酒中总黄酮在30min内的稳定性，每间隔5min取样一次，测得吸光度分别为0.158，0.162，0.159，0.163，0.162， 0.164计算得RSD%为1.50%。说明使用该方法测定竹筒酒中总黄酮含量时稳定性良好。根据上述方法连6次测定同一样品的总黄酮含量，测定结果显示RSD为2.43%，表明该方法测定竹筒酒中总黄酮含量时精密度良好。

（2）竹筒酒中总黄酮含量测定。

准确量取3ml待测酒样于10ml的容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液300μL，摇匀，静置6分钟后加入10%的硝酸铝溶液300μL，摇匀，静置6分钟后加入4%的氢氧化钠4.0ml，再用42%的乙醇溶液定容至刻度。按照测芦丁的标准吸光度的方法测酒样的吸光度。最后通过芦丁标准曲线确定线性回归方程，计算总黄酮的含量为16.63mg/L。

2.2 竹筒酒中总糖的测定

按照国标法测定总糖含量。按照公式X=F/[100×V2/250]×1000（X：复制白酒中总糖含量

（以葡萄糖计），g/L; F：斐林試剂甲、乙液各5ml相当于葡萄糖的克数，g; V1样品制备液滴定消耗的总体积。）

其中：F=M/100×V1（F：斐林试剂甲、乙液各5ml相当于葡糖糖的克数，g;m：称取葡萄糖的质量，g;V：正式滴定消耗葡萄糖标准液的总体积，ml注：正式滴定35次）取接近的三次总体积数据计算，结果取平均值作为斐林试剂甲、乙液的浓度标定值。计算得F=0.5×14.7/100=0.0735g。

未知白酒中总糖的含量可按公式计算得：X=F/[100×V2/250] ×1000;计算得样品酒中最终含量=11.003g/L。

2.3 竹筒酒中总酸的测定

本实验测定采用国标指示剂法测定竹筒酒中总酸的含量。竹筒酒中的总酸（有机酸），以酚酞为指示剂，采用氢氧化钠溶液进行中和滴定，以消耗的氢氧化钠标准滴定溶液的量计算总酸的含量。

1%酚酞指示剂的配制：准确量取0.1g的酚酞溶于10ml的无水乙醇，使之完全溶解，备用。

样品检测：准确移取5.00ml酒样于150ml的锥形瓶中，加入20ml的蒸馏水，用滴管滴加2滴酚酞指示剂，用0.005mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，记录标准碱用量，计算酒样中总酸的含量。

使用0.005mol/L的氢氧化钠滴定酒样，平行滴定四次取平均值，利用公式：X=[C×（V0.21）×0.0601]/5×1000计算得总酸含量为0.303g/L。（X：酒中总酸的含量 g/L;C：NaOH浓度，mol/L;V：滴定消耗NaOH溶液的体积，ml;V2：取酒样体积，mL）

检测结果证实该白酒复合高度酒的一级标准，符合低度酒的优级标准。

3 结论与展望

随着社会的发展，人们对生活质量的要求越来越高，中国酒类行业正在从广度和深度上健康发展，保健酒行业正蕴藏着巨大的发展潜力。健康意识和环保意识的提升也促进了酒类行业向天然型、营养型、功能型、保健型发展。竹筒酒作为近几年发展起来的新兴酒类，逐渐被大家熟悉，竹筒酒中蕴含丰富的黄酮类化合物、多糖类化合物，具有很好的营养价值和保健作用，其中黄酮类物质对清除DPPH自由基具有明显的效果，并且高浓度的黄酮类化合物具有一定的抗氧化作用。

参考文献：

[1]赖炘，陈其兵.竹叶提取物的化学成分及其生理功能研究进展[J].福建林业科技，2013，40（1）：214220.

[2]王金宝，王姣亮，李顺利，等.楠竹叶中黄酮类化合物的超声提取及抗氧性研究[J].湖南城市学院学报（自然科学版），2014，23（4）：5357.

[3]吴灿，夏延斌，唐鑫.分光光度法测定莲子酒中的总黄酮[J].农产品加工·学刊：下，2013（8）：4850.

[4]黄晓东，程巢宣.白酒中总酸、总酯、总醛含量的常规连续测定[J].食品科技，2004（5）：7072.

[5]中華人民共和国国家标准 GBT 103452007 白酒分析方法.

[6]刘建宗，孔繁岭.关于营养型复制白酒中总糖的测定[J].技术监督纵横，2000（2）：8.

基金项目：湖北省自然科学基金（2016CFB209） ;湖北省教育厅青年基金（Q20172801）;湖北科技学院校内培育科研项目（201618X046）

作者简介：赵媛（1988），女，河南信阳人，助教，研究方向：分析检测。

*通讯作者：陈涛，讲师。