芪参二莲汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶—1及抑制因子的影响

艾迎春 迟男男 杜景峰 张雪梅

摘 要：目的 研究不同剂量芪参二莲汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1及抑制因子变化的影响。方法 于2017年6月～8月选择90只SD雄性大鼠作为研究对象，按照体质量随机分为6组，每组15只，其中1组为正常组，其余5组均为肝纤维化模型，将其分为模型组、秋水仙碱组以及芪参二莲汤低剂量组（5 g/kg）、中剂量组（10 g/kg）和高剂量组（15 g/kg）；各给药组分别给予相应的药物灌胃，正常组、模型组则给予生理盐水灌胃；对比各组大鼠MMP-1和TIMP-1水平以及肝纤维化指标水平。结果 正常组与模型组比较，后者的MMP-1、MMP-1/TIMP-1水平明显降低，而TLISA-1水平则明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；模型组与各给药组比较，各给药组的MMP-1、MMP-1/TIMP-1水平较模型组升高，而TIMP-1水平则较模型组降低，差异有统计学意义（P<0.05），且给药组中，以芪参二莲汤高剂量组的变化水平最为显著，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 15 g/kg高剂量的芪参二莲汤用于治疗肝纤维化大鼠，能够有效促进MMP-1表达、减少TIMP-1表达，进而起到逆转肝纤维化的作用。

關键词：芪参二莲汤；肝纤维化；基质金属蛋白酶-1；抑制因子

中图分类号：R285.5 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.15.045

文章编号：1006-1959（2018）15-0140-03

Effects of Qishenerlian Decoction on Matrix Metalloproteinase-1 and Its Inhibitory Factors in Rats with Hepatic Fibrosis

AI Ying-chun，CHI Nan-nan，DU Jing-feng，ZHANG Xue-mei

（Department of Digestion，Subject Two，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154002，Heilongjiang，China）

Abstract：Objective To study the effects of different doses of Qishenerlian Decoction on matrix metalloproteinase-1 and inhibitor of hepatic fibrosis in rats.Methods In June to August 2017， 90 male SD rats were selected as the research subjects.According to the body mass，they were randomly divided into 6 groups，with 15 rats in each group，of which 1 was the normal group and the other 5 groups were liver fibrosis models.They were divided into model group，colchicine group and low dose group of Qishenerlian Decoction （5g/kg），medium dose group（10g/kg）and high dose group（15g/kg）.Each drug-administered group was given the corresponding drugs，and the normal group and the model group were given normal saline.The levels of MMP-1 and TIMP-1 and liver fibrosis were compared between the groups.Results Compared with the normal group，the level of MMP-1 and MMP-1/TIMP-1 in the model group was significantly decreased，while the level of TLISA-1 was significantly higher，the difference was statistically significant（P<0.05）；Compared with the drug-administered group，the MMP-1 and MMP-1/TIMP-1 levels in the model group were higher than those in the model group，while the TIMP-1 level was lower than that in the model group，the difference was statistically significant（P<0.05），and in the drug-administered group，the change level of the high-dose group of Qishenerlian Decoction was the most significant，and the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion The high dose Qishenerlian Decoction for 15g/kg can effectively promote the expression of MMP-1，reduce the expression of TIMP-1 and reverse the hepatic fibrosis in rats.

Key words：Qishenerlian Decoction；Hepatic fibrosis；Matrix metalloproteinase-1；Inhibitory factors

肝纖维化是体内有害因素的长期刺激使得肝脏内弥漫性细胞外基质（ECM）合成与降解不平衡而导致的一种病理变化。而基质金属蛋白酶类（MMPs）与金属蛋白酶抑制剂（TIMP）则与ECM合成与降解具有具有密切关系。研究证实，通过调节MMPs/TIMPs的平衡，能够有效抑制ECM的合成并促进其降解，故而成为逆转肝纤维化的主要手段[1]。有研究显示，芪参二莲汤具有抗炎、保肝等作用，有助于调节MMPs/TIMPs平衡，进而达到逆转肝纤维化的效果[2]。为进一步探究芪参二莲汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1（MMP-1）及抑制因子（TIMP-1）的影响，本次研究选取了90只大鼠进行了实验探究，现将具体内容报道如下。

1 材料与方法

1.1动物 于2017年6月～8月，在黑龙江中医药大学实验动物中心选取90只SD雄性大鼠（动物合格证号[黑动字第]P00102005）作为研究对象，月龄2个月，体质量180～200 g，平均体质量（192.32±21.01）g；饲养于18～25 ℃室温、50%～60%相对湿度的环境中。

1.2药物与试剂 药物：芪参二莲汤：黄芪、虎杖、半边莲、茵陈蒿、半枝莲、西洋参、石见穿、猫爪草各10 g，女贞子、五味子、墨旱莲、甘草各15 g组成药方，由煎药室制备并浓缩；硫代乙酰胺（TAA）由上海麦克林生化科技有限公司提供，产品批号MFCD00008070；秋水仙碱片（云南植物药业有限公司，国药准字H53020166，0.5 mg/片）使用前将其研磨成细粉过100目筛，并用蒸馏水配比成混悬液。试剂：大鼠MMP-1和TIMP-1试剂盒（ELISA）。

1.3分组、造模和给药 在对大鼠进行适应性饲养7d后，按照体质量进行随机分组，总共分为6组，每组15只，分别为正常组、模型组、秋水仙碱组、芪参二莲汤低剂量组（5 g/kg）、中剂量组（10 g/kg）和高剂量组（15 g/kg）；其中正常组大鼠行常规饲养，其余各组则采用硫代乙酰胺（TAA）灌胃法造肝纤维化模型，每2 d 1次，共持续7周。而后进行对照观察，给药组灌胃给药剂量为：秋水仙碱0.105 g/kg，低剂量芪参二莲汤5 g/kg，中等剂量芪参二莲汤10 g/kg，高剂量芪参二莲汤15 g/kg，而正常组与模型组则分别给予等量生理盐水对大鼠进行灌胃；给药体积均为8ml/kg，1次/d，连续给药35 d。

1.4标本制备 于给药35 d后，采用3%的戊巴比妥钠1 ml/100 g对所有大鼠进行腹腔注射麻醉，而后行静脉取血，静置后采用5000 r/min的离心机进行离心分离7 min，取血清并置于-20 ℃的冰箱中保存备用；同时与大鼠肝左叶距边缘约5 mm处取2块规格为10 mm×10 mm×5 mm的组织块。

1.5指标检测 MMP-1和TIMP-1检测：运用ELISA试剂盒与酶标仪对大鼠血清中的MMP-1和TIMP-1含量进行检测；运用96孔板，分别设置标准孔、空白孔、模型孔、秋水仙碱孔以及芪参二莲汤各剂量孔，在加入标准品50 μl以预计浓度梯度，将10 μl的待测样本分别加入相对应的孔中，并加入40 μl的样本稀释液进行稀释，在进行3次的洗板后加入酶标工作液，并按顺序在每个孔中加入A液50 μl显色剂，后加入B液50 μl显色剂，将其置于37℃的恒温箱内显色15 min，最后用酶标仪进行检测。

1.6统计学方法 采用SPSS 20.0进行数据分析，计量资料采用（x±s）表示，组间比较行t检验，计数资料则以[n（%）]表示，行？字2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1实验大体情况 正常组与芪参二莲汤高剂量组的大鼠饮食与体态正常，营养状况较好，同时反应较为灵敏、眼神有关、皮毛有光泽且相对密集；而其余各组的大鼠饮食较少，皮毛黯淡无光并伴有不同程度的脱毛，体形消瘦且反应迟钝。在实验的过程有部分大鼠死亡，其中模型组死亡3只、秋水仙碱与芪参二莲汤各剂量组各死亡1只，可能与灌胃损伤导致或药物耐受差导致。

2.2芪参二莲汤对肝纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1水平的影响 正常组与模型组比较，后者的MMP-1、MMP-1/TIMP-1水平明显降低，而TLISA-1水平则明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；模型组与各给药组比较，各给药组的MMP-1、MMP-1/TIMP-1水平较模型组升高，而TIMP-1水平则较模型组降低，差异有统计学意义（P<0.05），且给药组中，以芪参二莲汤高剂量组的变化水平最为显著，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

3 讨论

肝纤维化是否能够得到逆转，主要取决于ECM的合成与降解是否能够恢复平衡。因为ECM降解调控的主要手段是促进MMPs表达、降低TIMPs的表达，而MMP-1和TIMP-1的平衡发生变化则被认为是肝纤维化的主要原因[3]。因此，要实现肝纤维化的逆转，恢复ECM的合成与降解平衡，需要从调节MMP-1和TIMP-1的表达入手。

祖国医学认为，肝纤维化属于“积聚”范畴，病机多为气虚血瘀、络气不足、外感湿热、凝聚成痰，从而引起病症，故而主要为本虚标实、虚实夹杂。而芪参二莲汤则以益气扶正为主功效，同时还具有解毒化痰逐瘀等功效。方中的黄芪，为补药之长，具有祛瘀散结之功；西洋参、五味子、女贞子等则有滋补肝肾、通络活血等效果；而半边莲、半枝莲等则清利湿热；猫爪草、石见穿则化痰散结、解毒化瘀；甘草、虎杖等则能够散瘀退黄、清血分肝络之毒。故而全方共奏扶正祛邪、化痰逐瘀、活血解毒等功效。本次研究显示，当运用剂量为15 g/kg时，对肝纤维化能够起到良好的治疗效果。

在本次研究中，通过将90只大鼠进行分组研究发现，正常组与模型组比较，正常组大鼠血清中MMP-1表达降低、TIMP-1表达升高，MMP-1/ TIMP-1比值降低（P<0.05）；该结果提示，肝纤维化与MMP-1、TIMP-1水平有关，当TIMP-1明显升高抑制MMP-1表达时，大鼠会出现肝纤维化。而通过模型组与各给药组比较，秋水仙碱组、芪参二莲汤各剂量组大鼠血清中的MMP-1表达明显提升、TIMP-1表达则显著下降，MMP-1/ TIMP-1比值上升（P<0.05），但芪参二莲汤高剂量组相对于其余各给药组，MMP-1表达上升、TIMP-1表达下降以及MMP-1/ TIMP-1比值上升更为明显（P<0.05）。该结果表示，运用高剂量芪参二莲汤治疗肝纤维化的大鼠，能够有效促进MMP-1的表达，减少TIMP-1的表达。而MMP-1和TIMP-1作为影响与调节ECM的合成与降解平衡主要因素，MMP-1表达增加， TIMP-1表达减少时，能够促进ECM合成与降解平衡的恢复，进而起到逆转肝纤维化的作用。

综上所述，15 g/kg高剂量的芪参二莲汤用于治疗肝纤维化大鼠，能够有效促进MMP-1表达、减少TIMP-1表达，进而起到逆转肝纤维化的作用。

参考文献：

[1]袁星星，郭蕾，王炳予，等.芪参二莲汤对肝纤维化大鼠血清基质金属蛋白酶-1及其抑制剂-1水平的影响[J].中国中医药信息杂志，2017，24（05）：52-56.

[2]山丹，巴图德力根.肝纤维化与MMPs及TIMPs的研究进展[J].中国民族民间医药，2015，24（05）：39-40.

[3]王振常，杨删，黄晶晶，等.柔肝化纤颗粒对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠肝脏MMP-2、TIMP-2的影响[J].疑难病杂志，2014，13（01）：74-76，82.

收稿日期：2018-1-12；修回日期：2018-1-22

编辑/成森